一种腺病毒的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种腺病毒的纯化方法，涉及病毒纯化技术领域。本发明专利技术公开的腺病毒的纯化方法，其包括：对收集的腺病毒细胞培养液第一次离心，收集细胞沉淀，用缓冲液冲重悬细胞沉淀，得到重悬液，冻融处理破碎重悬液中的细胞，将重悬液进行第二次离心，收集上清液；将上清液加入至密度梯度介质溶液中，进行密度梯度离心，吸取完整病毒颗粒带溶液；将完整病毒颗粒带溶液进行浓缩、换液以及过滤，得到含有腺病毒的溶液。该纯化方法采用密度梯度离心法对细胞破碎后的上清液进行离心，可以较好地分离非完整病毒颗粒及完整病毒颗粒，提高腺病毒回收率。

A purification method of adenovirus

The invention discloses a purification method of adenovirus, which relates to the field of virus purification technology. The invention discloses a purification method of adenovirus comprising adenovirus cell culture fluids collected on the first centrifugation, cells were collected by precipitation precipitation, the cell suspension buffer, get heavy suspension, freeze-thaw breakage re suspension cells in the heavy suspension second times of centrifugation, collecting the supernatant was added to the supernatant; density gradient medium solution, by density gradient centrifugation and absorb intact virus particles with complete virus particles with solution; solution concentration, liquid exchange and filtration, get the solution containing adenovirus. The purification method was centrifuged by density gradient centrifugation to centrifugate the supernatant of cells after breaking up, which could better isolate non intact virus particles and intact virus particles, and improve the recovery rate of adenovirus.

【技术实现步骤摘要】
一种腺病毒的纯化方法
本专利技术涉及病毒纯化
，具体而言，涉及一种腺病毒的纯化方法。
技术介绍
腺病毒(adenovirus)是一种没有包膜的双链DNA病毒，直径为70～90nm，基因组长约25-45kb，理论上可编码22-40个基因。由252个壳粒呈廿面体排列构成。衣壳(capsid)呈规则的20面体结构，衣壳里是线状双链DNA分子，腺病毒分两个属，共约100余血清型。一般会造成呼吸系统的不适，对啮齿类动物有致癌能力，或能转化体外培养的啮齿类动物细胞，但对人体不出现致癌性。腺病毒作为载体应用于疫苗的开发具有以下优点：感染的宿主范围广，能感染分裂和非分裂细胞，导入细胞的效率高；遗传背景清楚，致病性低，不整合到染色体中不会导致插入突变；外源基因表达水平高，可以容纳约8-10kb的外源基因，能同时表达多个基因；增殖速度快，易培养，可以产生较高的病毒滴度，适用多种途径免疫。基于上述优点，腺病毒是一种大有潜力值得试验和推广的疫苗载体，在新型疫苗研究中越来越显示出良好的应用前景。故对腺病毒的纯化显得尤为重要。采用凝胶过滤层析、离子交换层析及二者结合的方法对腺病毒进行纯化。凝胶过滤耗时长，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种腺病毒的纯化方法，其特征在于，其包括：预处理步骤：对收集的腺病毒细胞培养液第一次离心，收集细胞沉淀，用缓冲液冲重悬所述细胞沉淀，得到重悬液，冻融处理破碎所述重悬液中的细胞，将所述重悬液进行第二次离心，收集上清液；密度梯度离心步骤：将所述上清液加入至密度梯度介质溶液中，进行密度梯度离心，吸取完整病毒颗粒带溶液；浓缩换液步骤：将所述完整病毒颗粒带溶液进行浓缩、换液以及过滤，得到含有腺病毒的溶液。

【技术特征摘要】
1.一种腺病毒的纯化方法，其特征在于，其包括：预处理步骤：对收集的腺病毒细胞培养液第一次离心，收集细胞沉淀，用缓冲液冲重悬所述细胞沉淀，得到重悬液，冻融处理破碎所述重悬液中的细胞，将所述重悬液进行第二次离心，收集上清液；密度梯度离心步骤：将所述上清液加入至密度梯度介质溶液中，进行密度梯度离心，吸取完整病毒颗粒带溶液；浓缩换液步骤：将所述完整病毒颗粒带溶液进行浓缩、换液以及过滤，得到含有腺病毒的溶液。2.根据权利要求1所述的腺病毒的纯化方法，其特征在于，所述密度梯度介质溶液中的密度梯度介质为氯化铯、甘油或蔗糖。3.根据权利要求2所述的腺病毒的纯化方法，其特征在于，所述密度梯度介质溶液中的密度梯度介质为氯化铯，所述密度梯度介质溶液的密度梯度为1.2-1.4g/mL。4.根据权利要求3任一项所述的腺病毒的纯化方法，其特征在于，密度梯度离心的转速...

【专利技术属性】
技术研发人员：王欣，刘冬，邓飞，贾芳苗，张仁怀，
申请(专利权)人：成都远睿生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51