一种角质细胞生长因子及其分离纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种角质细胞生长因子及其分离纯化方法，属于蛋白制备领域。该方法采用阳离子交换层析柱与UV检测联用的方式分离菌体匀浆液，菌体为重组人角质细胞生长因子‑2工程菌；该分离纯化方法包括：将菌体匀浆液上样至阳离子交换柱，用清洗液冲洗2～3个柱体积后，再用洗脱液冲洗阳离子交换柱，收集在270～290nm处有紫外吸收峰的馏分。利用该方法，仅通过阳离子交换层析柱就可一次性的分离得到纯度大于95％的角质细胞生长因子，纯化过程简单、成本低，可进行放大生产。由该方法制备的角质细胞生长因子，纯度高，可进一步用于制备生物制剂。

Keratinocyte growth factor and its separation and purification method

The present invention provides a keratinocyte growth factor and its separation and purification method, belonging to the field of protein preparation. This method combined with column chromatography using cation exchange method and UV detection and separation of cell homogenate, the mycelium of recombinant human keratinocyte growth factor 2 engineering bacteria; purification methods including the isolation: the cell homogenate sample to the cation exchange column, rinse cleaning liquid for 2 ~ 3 column volume, and then rinse the eluent cation exchange column, collected in 270 ~ 290nm of ultraviolet absorption fraction. With this method, the keratinocyte growth factor with purity of more than 95% can be isolated by cation exchange chromatography column at one time. The purification process is simple, the cost is low, and it can be amplified. The keratinocyte growth factor prepared by this method has high purity and can be further used for the preparation of biological agents.

【技术实现步骤摘要】
一种角质细胞生长因子及其分离纯化方法
本专利技术涉及蛋白制备领域，具体而言，涉及一种角质细胞生长因子及其分离纯化方法。
技术介绍
重组人角质细胞生长因子(rhKGF-2)，又名成纤维细胞生长-10(FGF-10),属成纤维细胞生长因子超家族的成员,它特异性作用于上皮细胞的FGFR-2b,对烧伤、溃疡、切割伤的修复、再生比其他生长因子具有更显著的促进愈合、减少瘢痕的作用。对体外培养的人角膜上皮细胞有明显的促生长作用,可提高辐射后小鼠肠干细胞的存活率,并对辐射引起气道上皮细胞的通透性升高具有拮抗作用,可以加速辐射诱导的DNA损伤的修复,并对维持细胞骨架蛋白F-肌纤蛋白的稳定和保护细胞间连接具有重要作用。KGF-2能特异性促进上皮细胞的增殖、分化和迁移，对脊椎动物多种组织和器官的发育起重要调控作用。KGF-2有2种细胞膜表面受体，即FGFR1Ⅲb和FGFR2Ⅲb。KGF-2与受体FGFR2Ⅲb的亲和力很高，是其特异性配体。KGF-2与受体结合后，促使受体处于细胞内的C端酪氨酸残基磷酸化，磷酸化的受体具有酪氨酸蛋白激酶活性，并与一系列靶蛋白发生作用，引发信号级联反应，发挥生物学功能。KGF-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种角质细胞生长因子的分离纯化方法，其特征在于，采用阳离子交换层析柱与UV检测联用的方式分离菌体匀浆液，所述菌体为重组人角质细胞生长因子‑2工程菌；所述分离纯化方法包括：将所述菌体匀浆液上样至阳离子交换柱，用清洗液冲洗2～3个柱体积后，再用洗脱液冲洗所述阳离子交换柱，收集在270～290nm处有紫外吸收峰的馏分。

【技术特征摘要】
1.一种角质细胞生长因子的分离纯化方法，其特征在于，采用阳离子交换层析柱与UV检测联用的方式分离菌体匀浆液，所述菌体为重组人角质细胞生长因子-2工程菌；所述分离纯化方法包括：将所述菌体匀浆液上样至阳离子交换柱，用清洗液冲洗2～3个柱体积后，再用洗脱液冲洗所述阳离子交换柱，收集在270～290nm处有紫外吸收峰的馏分。2.根据权利要求1所述的角质细胞生长因子的分离纯化方法，其特征在于，所述洗脱液按重量份数计包括：Na2HPO4·12H2O4.5～5.5份、NaH2PO4·2H2O0.8～1.0份、EDTA3～4份、NaCl41～43份。3.根据权利要求1所述的角质细胞生长因子的分离纯化方法，其特征在于，所述清洗液按重量份数计包括：Na2HPO4·12H2O4.5～5.5份、NaH2PO4·2H2O0.8～1.0份、EDTA3～4份、NaCl34～36份。4.根据权利要求1所述的角质细胞生长因子的分离纯化方法，其特征在于，将所述菌体匀浆液上样至所述阳离子交换柱的过程中，上样的线性流速为0.5～1cm/min。5.根据权利要求1所述的角质细胞生长因子的分离纯化方法，其特征在于，在将所述菌体匀浆液上样至所述阳离子交换柱之前，还包括对所述阳离子交换柱进行平衡步骤，所述平衡步骤包括：用水冲洗2～3个柱体积至流出液为...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘冬，王鑫杰，邓飞，张仁怀，沈健，王欣，
申请(专利权)人：成都远睿生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51