一种多肽、免疫原性偶联物和流感疫苗制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽、免疫原性偶联物和流感疫苗，涉及生物技术领域。该多肽为如下a)、b)或c)中的任一种：a)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽；b)在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；c)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的多肽。其可用于预防或治疗流感病毒，可作为活性成分用于制备预防或治疗流感病毒的药品。本发明专利技术公开的免疫原性偶联物，其能够提高免疫原性以及其对构象依赖性位点的抗原的免疫效果。

A peptide, immunogenic coupling and influenza vaccine

The invention discloses a polypeptide, an immunogenic coupling and a influenza vaccine, which relates to the field of biological technology. The following a, b) polypeptide) or C) either: a) amino acid sequence is shown as SEQ ID NO.1; b) fusion protein connection label in amino acid sequence is shown as SEQ ID NO.1 N terminal and / or C end of the C); the amino acid sequence of SEQ peptide ID NO.1 shown by one or several amino acid substitution and deletion and / or addition obtained with the same function. It can be used to prevent or treat influenza viruses and can be used as active ingredients for the preparation of drugs to prevent or treat influenza viruses. The present invention is an immunogenic coupling, which can improve immunogenicity and immune effect on the antigen of conformational dependent loci.

【技术实现步骤摘要】
一种多肽、免疫原性偶联物和流感疫苗
本专利技术涉及生物技术
，具体而言，涉及一种多肽、免疫原性偶联物和流感疫苗。
技术介绍
甲型流感病毒为常见流感病毒，甲型流感病毒最容易发生变异，甲型流感病毒的亚型则被人们称为“禽流感”，禽流感(BirdFlu)是由禽流感病毒引起的一种急性传染病，病毒基因变异后能够感染人类，感染后的症状主要表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等，多数伴有严重的肺炎，严重者心、肾等多种脏器衰竭导致死亡，病死率很高。甲型流感对人类致病性高，曾多次引起世界性大流行。甲型流感病毒中至今发现能直接感染人的禽流感病毒亚型有：甲型H1N1、H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2和H10N8。其中H1、H5、H7亚型为高致病性，H1N1、H5N1、H7N9尤为值得关注。目前，针对甲型流感病毒的疫苗主要为合成肽疫苗(Syntheticpeptidevaccine)，即用化学方法合成的病毒保护性抗原多肽疫苗，其安全性好，不会受到病原微生物的污染，且易保存和控制质量。但是合成肽疫苗一般分子量较小且只针对单一抗原位点，免疫原性较差，对序列依赖性的抗原位点免疫效果较好，对构象依赖性位点则较差。鉴于此，研发对甲型流感病毒具有较好免疫效果的疫苗具有重大意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种多肽，其可用于预防或治疗流感病毒，此多肽是基于流感病毒M2e蛋白的高度保守性设计得到的，可作为活性成分用于制备预防或治疗流感病毒的药品。本专利技术的另一目的在于提供一种免疫原性组合物，其包括上述多肽，可用于制备对流感免疫效果较佳的药品。本专利技术的另一目的在于提供一种免疫原性偶联物，其采用交联剂将上述多肽偶联到载体蛋白上，增大其分子量，提高免疫原性以及其对构象依赖性位点的抗原的免疫效果。本专利技术的另一目的在于提供一种流感疫苗，用于预防或治疗流感病毒。本专利技术的另一目的在于提供上述多肽、免疫原性组合物、以及免疫原性偶联物在制备用于预防或治疗流感病毒的药品中的应用。本专利技术是这样实现的：一种多肽，该多肽为如下a)、b)或c)中的任一种：a)氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的多肽；b)在氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的多肽的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；c)将SEQIDNO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的多肽。一种免疫原性组合物，其包括上述多肽和至少一种药物载体或赋形剂。一种免疫原性偶联物，其包括上述多肽，免疫原性偶联物是通过采用交联剂将载体蛋白与多肽交联后制得。一种流感疫苗，其活性成分包括：上述多肽、免疫原性组合物、或免疫原性偶联物。一种上述多肽、免疫原性组合物、或免疫原性偶联物在制备用于预防或治疗流感病毒的药品中的应用。本专利技术具有以下有益效果：甲型流感病毒保守的M2抗原，特别是M2e，在各种甲型流感病毒中具有极高的保守性，且可诱导特异性保护抗体产生。动物模型显示，针对M2e产生的IgG抗体能够降低动物模型中流感的发病率，有效地防止流感病毒引发的死亡。鉴于此，本专利技术提供的多肽是基于流感病毒M2e蛋白的高度保守性设计得到的，可作为活性成分用于制备预防或治疗流感病毒的药品比如流感疫苗；本专利技术提供的免疫原性偶联物，其采用交联剂将上述多肽偶联到载体蛋白上，能够增大分子量，提高免疫原性，提高其对构象依赖性位点的抗原的免疫效果；此外，本专利技术提供的流感疫苗以上述免疫原性偶联物作为活性成分，其能够有效地抵抗流感病毒例如(A/FM/1/47(H1N1)、A/PR/8/34(H1N1)、A/Victoria/3/75(H3N2)以及A/Aichi/2/68(H3N2)等)的感染，保护个体，提高个体的生存率。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例1中的多肽M2A6的纯度检测结果；图2为本专利技术实施例1中的多肽M2A6的分子量检测结果；图3为本专利技术实施例2中的多肽M2A6与载体蛋白CRM197结合的SDS-PAGE检测结果图；图中，1：载体蛋白CRM197标品；2：载体蛋白CRM197与多肽M2A6结合前样品；3：免疫原CRM197-M2A6；图4A为变性毛细管电泳Marker标准图；图4B为载体蛋白CRM197的检测图谱线是典型的毛细管电泳图谱；图4C为CRM197-M2A6免疫原的检测图谱；图5为本专利技术实施例3中的多肽M2A6、CRM197包板检测CRM197-M2A6结合疫苗免疫血清ELISA抗体效价检测结果；图6为本专利技术实施例3中的感染A/FM/1/47(H1N1)流感病毒后各组小鼠生存曲线图；图7为本专利技术实施例3中的感染A/FM/1/47(H1N1)流感病毒后各组小鼠体重变化图；图8为本专利技术实施例3中的感染A/PR/8/34(H1N1)流感病毒后各组小鼠生存曲线图；图9为本专利技术实施例3中的感染A/PR/8/34(H1N1)流感病毒后各组小鼠体重变化图；图10为本专利技术实施例3中的感染A/Victoria/3/75(H3N2)流感病毒后各组小鼠生存曲线图；图11为本专利技术实施例3中的感染A/Victoria/3/75(H3N2)流感病毒后各组小鼠体重变化图；图12为本专利技术实施例3中的感染A/Aichi/2/68(H3N2)流感病毒后各组小鼠生存曲线图；图13为本专利技术实施例3中的感染A/Aichi/2/68(H3N2)流感病毒后各组小鼠体重变化图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的一种多肽、免疫原性偶联物和流感疫苗进行具体说明。甲型流感病毒为分节段的单股负链RNA病毒，基因组含8个节段，第7个节段RNA编码M1和M2蛋白。其中M2蛋白是除HA和NA以外的第3个外膜蛋白，从N端到C端依次为：含23个氨基酸的胞外区(M2e)、含19个氨基酸的疏水性跨膜区和含54个氨基酸的胞内区。天然状态下M2以同源四聚体的形式存在于流感病毒表面，每个病毒粒子仅含14～68个M2分子，但感染流感病毒的细胞表面分布着大量M2分子，具有质子通道的作用，在病毒侵染时能降低病毒颗粒内部的pH值，帮助病毒释放RNA。多年的研究证实，甲型流感病毒保守的M2抗原，特别是M2e，在各种甲型流感病毒中具有极高的保守性，且可诱导特异性保护抗体产生。动物模型显示，针对M2e产生的IgG抗体能够降低动物模型中流感的发病率，有效地防止流感病毒引发的死亡。目前基于M2e疫苗的临床研究结果为早日研制成功防控流感大流行的广谱流感疫苗提供了大量的实验资料。本专利技术的专利技术人通过从NCBI中共比对约13000条流感毒株的序列，设计了一条多肽M2A6，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，并将其命名为多肽M2A6，该多肽可作为流感疫苗等药品的有效成分，对本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多肽，其特征在于，所述多肽为如下a)、b)或c)中的任一种：a)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽；b)在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；c)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的多肽。

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽为如下a)、b)或c)中的任一种：a)氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的多肽；b)在氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的多肽的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；c)将SEQIDNO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的多肽。2.一种免疫原性组合物，其特征在于，其包括如权利要求1所述的多肽和至少一种药物载体或赋形剂。3.一种免疫原性偶联物，其特征在于，其包括如权利要求1所述的多肽，所述免疫原性偶联物是通过采用交联剂将载体蛋白与所述多肽交联后制得。4.根据权利要求3所述的免疫原性偶联物，其特征在于，所述载体蛋白为白喉类毒素或白喉毒素无毒突变体CRM197；所述白喉类毒素或所述白喉毒素无毒突变体CRM197是如下d)或e)或f)的蛋白质：d)氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的蛋白质；e)在氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；f)将SEQIDNO.2所示的氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁雪爽，刘晓刚，安文琪，张静静，郝一楠，王满满，师方园，
申请(专利权)人：华兰生物疫苗有限公司，华兰基因工程有限公司，华兰生物工程股份有限公司，华兰生物工程技术北京有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41