一种高产纳豆激酶的液态培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种高产纳豆激酶的液态培养基，属于生物技术领域。发酵培养基包括以下组分：红芸豆粉4.0％，葡萄糖4％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.05‑0.2％，磷酸二氢钾0.05‑0.2％，PH值7.0‑7.4。与现有技术相比，该培养基组分简单，来源丰富，成本低廉，发酵纳豆激酶单位酶活力高，制作工艺简单，发酵液纳豆激酶活性达到33160u/ml。

【技术实现步骤摘要】
一种高产纳豆激酶的液态培养基
本专利技术属于生物
，涉及一种高产纳豆激酶的液态培养基。
技术介绍
血栓性疾病是中老年人群的高发病，已成为致死和致残的主要原因之一。截止到2016年，我国60岁以上老年人口为2.2亿人，占总人口的16.1％，中国已进入老龄化社会。此外，随着生活水平的提高，更多高脂高糖高胆固醇的食物被纳入餐桌，不良的饮食搭配更加剧了血栓性疾病的发生。目前，溶解血栓是治疗这一类疾病的重要手段，当今用于临床治疗的药物包括链激酶、尿激酶、组织型纤溶酶原激活剂、单链尿激酶型血纤溶酶原活剂、化学修饰的血纤溶酶一链激酶激活剂复合物等，但是这些药物都存在明显不足：价格昂贵、药物半衰期短、全身性出血副作用等，因此，开发新型溶血栓药物已成为当前重要研究课题之一。纳豆激酶(Nattokinase，NK)是枯草芽孢杆菌发酵过程中形成的一种丝氨酸蛋白酶，具有溶解血栓、降低血粘度，改善血液循环，软化和增加血管弹性等作用。纳豆激酶可以刺激血管内皮细胞产生组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)，t-PA将纤溶酶原激活为纤溶酶，溶解纤维蛋白从而直接溶解血栓；纳豆激酶同时将人体内的尿激酶原激活为尿激酶，尿激酶与t-PA一同激活纤溶酶原，达到间接溶解血栓的目的。并且纳豆激酶只溶解血栓的主体物质纤维蛋白，不水解血浆纤维蛋白原，因此没有引发出血的危险。多年来发酵生产含有纳豆激酶食品的培养基的多为固体发酵，而固态发酵工艺具有易感染杂菌，散热难和回收难的缺陷，不能满足相关药品与保健品的生产要求；目前工业化生产纳豆激酶的主要方式为液态发酵，而液态发酵方面的研究也多集中于优良菌种的选育、发酵工艺的优化与产物的分离纯化，对液态培养基成分筛选的研究较少，因此筛选出来源丰富，组分简单，成本低廉，纳豆激酶单位酶活力高，制作工艺简单的液态培养基具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种枯草芽孢杆菌液态发酵培养基，该液态发酵培养基组分简单，来源丰富，成本低廉，发酵纳豆激酶单位酶活力高，制作工艺简单。本专利技术的技术方案为：一种高产纳豆激酶液态发酵培养基，含有以下组分：红芸豆粉4.0-10.0％，葡萄糖3.0-8.0％，氯化钠1.0-3.0.0％，磷酸氢二钾0.05-0.2％，磷酸二氢钾0.05-0.2％，PH值7.0-7.4，均为w/v。优选的培养基组成为：红芸豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。用于验证上述培养基的枯草芽孢杆菌菌株Bacillussubtilissubsp.UJS-1，现保藏于中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.14434，保藏日期为2017年07月17日，建议的分类命名为：枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis。本专利技术提供的液态发酵培养基组分简单，来源丰富，成本低廉，发酵纳豆激酶单位酶活力高，制作工艺简单。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明本专利技术用于验证实施例培养基的枯草芽孢杆菌菌株Bacillussubtilissubsp.UJS-1，现保藏于中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.14434，保藏日期为2017年07月17日，建议的分类命名为：枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis。实施例1培养基组成为：红芸豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilissubsp.UJS-1，CGMCCNo.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法(参考谢平会等，2010，纤维蛋白平板法测定保健食品中纳豆激酶活力)测得发酵液纳豆激酶酶活性为33160u/ml。实施例2培养基组成为：红芸豆粉5.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilissubsp.UJS-1，CGMCCNo.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为29170u/ml。实施例3培养基组成为：红芸豆粉6.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilissubsp.UJS-1，CGMCCNo.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为26720u/ml。实施例4培养基组成为：红芸豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，PH值7.0，均为w/v。用上述成分配比配成的培养基进行草芽孢杆菌(Bacillussubtilissubsp.UJS-1，CGMCCNo.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为22060u/ml对比例培养基组成为：黄豆粉4.0％，葡萄糖4.0％，氯化钠1.5％，磷酸氢二钾0.1％，磷酸二氢钾0.1％，PH值7.0，均为w/v。用上述成分配比配成的培养基进行枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilissubsp.UJS-1，CGMCCNo.14434)的液态发酵，37℃、225rpm，发酵48h，通过琼脂糖-纤维蛋白平板法测得发酵液纳豆激酶酶活性为9830u/ml。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高产纳豆激酶液态发酵培养基，其特征在于含有以下组分：红芸豆粉4.0‑10.0％，葡萄糖3.0‑8.0％，氯化钠1.0‑3.0％，磷酸氢二钾0.05‑0.2％，磷酸二氢钾0.05‑0.2％，PH值7.0‑7.4，均为w/v。

【技术特征摘要】
1.一种高产纳豆激酶液态发酵培养基，其特征在于含有以下组分：红芸豆粉4.0-10.0％，葡萄糖3.0-8.0％，氯化钠1.0-3.0％，磷酸氢二钾0.05-0.2％，磷酸二氢钾0.05-0.2％，PH值7.0-7.4，均为w/v。2.根据权利要求1所述的一种高产纳豆激酶液态发酵培养基，其特征在于优选的培养基组成为：红...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚爱华，朱沛煌，严永敏，曾建，彭琬昕，杜凤移，崔恒林，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32