【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物工程与发酵领域，具体涉及一种富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的酸豆乳的制备方法。
技术介绍
纳豆由大豆经纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)发酵而成，具有多重生理功效：①纳豆对心血管系统的作用：纳豆中一种标志性生理活性物质纳豆激酶(Nattokinase，NK)是能够溶解血栓的蛋白质，由275个氨基酸残基组成，分子量27KD左右，无毒、无副作用，是一种丝氨酸蛋白酶，其溶栓效果甚至超过溶栓制剂尿激酶。纳豆激酶除具有直接溶栓作用外，还具有促进静脉内皮细胞产生纤维蛋白溶酶原激活剂的能力，从而间接表现其溶栓活性。纳豆中亚油酸占全脂质的50％，亚油酸能够降低血浆中胆固醇含量，有预防动脉硬化、心脏病和高血压的功效，具有血栓溶解作用；②纳豆对消化系统的作用：大豆蛋白质经纳豆酶的作用转化成可溶性多肽和氨基酸，有利于人体吸收。1g纳豆中含有10亿个以上纳豆菌，纳豆菌繁殖快，能消耗肠道中的氧，可以抑制引起肠内异常发酵的痢疾杆菌等腐败菌，促进乳酸菌繁殖，调节肠内细菌平衡，预防痢疾、肠炎和便秘等。大豆经过纳豆菌发酵蓄积了大量蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、酯酶、纤维素酶和脲酶等酶群，这些生物酶在消化系统中能够有效调理促进消化吸收。纳豆芽孢杆菌在通过分解利用大豆蛋白进行繁殖的过程中，可以产生大量酵素、维生素、多聚谷氨酸和多聚果糖等粘性物质，其被覆在胃肠粘膜表面起到保护作用，饮酒时可缓解酒醉。纳豆菌还能杀...
【技术保护点】
一种富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的酸豆乳的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)、将产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌10261和纳豆芽孢杆菌10263分别进行亚硝基胍诱变；然后混合二者诱变后代，进行细胞融合传代培养，高通量筛选得到高产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌，命名为纳豆芽孢杆菌BN‑NKPQQ‑RWX‑201；2)、将干酪乳杆菌进行亚硝基胍诱变，从中筛选出甲硫氨酸营养缺陷型的干酪乳杆菌，命名为干酪乳杆菌LcS‑Met‑；3)将纳豆芽孢杆菌BN‑NKPQQ‑RWX‑201和干酪乳杆菌LcS‑Met‑共发酵豆乳，得到富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的酸豆乳。
【技术特征摘要】
1.一种富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的酸豆乳的制备方法，其特征在于，
包括以下步骤：
1)、将产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌10261和纳豆芽孢杆菌
10263分别进行亚硝基胍诱变；然后混合二者诱变后代，进行细胞融合传代
培养，高通量筛选得到高产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌，命名为
纳豆芽孢杆菌BN-NKPQQ-RWX-201；
2)、将干酪乳杆菌进行亚硝基胍诱变，从中筛选出甲硫氨酸营养缺陷型
的干酪乳杆菌，命名为干酪乳杆菌LcS-Met-；
3)将纳豆芽孢杆菌BN-NKPQQ-RWX-201和干酪乳杆菌LcS-Met-共发
酵豆乳，得到富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的酸豆乳。
2.根据权利要求1所述的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的酸豆乳的制备
方法，其特征在于，步骤1)中，所述的高通量筛选具体包括：①制备2
个平板豆芽汁豆乳固体培养基，其中一个将小鼠抗PQQ IgG单抗PQQ-mAb
配入，形成平板A，另一个将琼脂糖-纤维蛋白配入，形成平板B；②将纳
豆芽孢杆菌10261和纳豆芽孢杆菌10263的诱变融合后代涂布其中一个平板
后，再用纤维素膜影印至另一个平板，使平板A和平板B互为影印平板；
③平板A中，高产吡咯喹啉醌的诱变融合后代菌落周围形成肉眼可见沉淀
圈，根据沉淀圈直径大小可肉眼判断产吡咯喹啉醌量大小；④平板B中，
高产纳豆激酶的诱变融合后代菌落周围形成透明圈，根据透明圈直径大小可
肉眼判断产纳豆激酶活力高低；⑤平板A与平板B中，高产吡咯喹啉醌菌
落与高产纳豆激酶菌落处于同一位置者，即为高产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的
纳豆芽孢杆菌。
3.根据权利要求2所述的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的酸豆乳的制备
方法，其特征在于，步骤1)中，所述的平板豆芽汁豆乳固体培养基以1L
计，由以下量的组分组成：
4.根据权利要求1所述的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的酸豆乳的制备
方法，其特征在于，步骤2)中，所述的从中筛选出甲硫氨酸营养缺陷型的
干酪乳杆菌，具体包括：①制备2个平板MRS固体培养基，其中一个将甲
硫氨酸配入，为平板C，另一个为单纯MRS固体培养基平板，为平板D；
②将诱变后的干酪乳杆菌涂布其中一个平板后，再用纤维素膜影印至另一
个平板，使平板C和平板D互为影印平板；③在平板C与平板D的同...
【专利技术属性】
技术研发人员：阮子琦，徐薇薇，吴渊，张哲滔，莫凡，
申请(专利权)人：杭州元佩特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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