本发明专利技术公开了一株耐微波枯草芽孢杆菌及其在纳豆激酶制备中的应用，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)LB-18，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号：CGMCC NO.10835，保藏日期：2015年5月22日。本发明专利技术从豆豉中筛选出耐微波枯草芽孢杆菌菌株LB-18，采用本发明专利技术的菌株，可以获得具有高纤溶活性且富含枯草芽孢杆菌活菌的纳豆激酶产品(纳豆胶囊)，该纳豆激酶产品不但具有降压、溶栓等功效，还有改善肠道功能、提高机体免疫力等作用，为纳豆激酶作为功能性食品和保健食品的研发提供了新的思路，使其具有更为广阔的开发前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株耐微波枯草芽孢杆菌及其在纳豆激酶制备中的应用，属于微生物
技术介绍
随着人们生活节奏的加快和饮食习惯的调整，血栓性疾病的发病率大大提高，严重威胁着人类的健康与生命安全，每年死于脑梗塞、心肌梗死的病人多达几百万，居各种疾病之首。目前，治疗心脑血管疾病的首选方法是溶解血栓，因此，具有高纤溶活性溶栓药物(如纳豆激酶)的研发成为研究热点之一。纳豆激酶是纳豆(natto)在发酵过程中由枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)产生的具有高纤溶活性的丝氨酸蛋白酶，该酶不但具有显著的溶栓活性，还可以激活体内的纤溶酶原，增加内源性溶纤酶的含量，具有降血压、抗氧化、抗肿瘤及溶血栓等多种医疗功效，而且与传统的溶栓制剂相比，纳豆激酶有不易引起出血、无抗原性、半衰期长、安全无毒、成本低廉及口服有效等优点，因而具有开发为预防心脑血管疾病保健食品的潜力。自1987年被Dr.Sumi首次从纳豆中分离出来后，纳豆激酶便受到世界相关研究人员的广泛关注。与此同时，由于饮食习惯、工作压力以及环境等的影响，肠道疾病的发病率也有逐年增高之势，给人们的生活和工作造成了重大影响。肠道微生物又称人类的第二套基因组，与多种肠道疾病如代谢性疾病、免疫性疾病甚至肿瘤的发生都有直接关系。因此，改善肠道微环境、调节肠道菌群是预防和治疗肠道疾病的关键，而肠道益生菌也是21世纪新型药物研发的方向。纳豆激酶发酵菌株——枯草芽孢杆菌是人体益生菌，其活菌剂对人体具有多种生物功能。首先，枯草芽孢杆菌可以抑制致病菌生长，促进益生菌生长，从而改善肠道微生态环境，预防痢疾、肠炎、便秘等肠道疾病；其次，枯草芽孢杆菌通过分泌有机酸、细菌素等，可以增强机体免疫功能；再者，枯草芽孢杆菌在肠道内增殖，可以调节机体肠道代谢；最后，枯草芽孢杆菌通过分泌各种酶和维生素类物质，能够促进肠道营养物质的消化吸收。而在现有纳豆激酶产品产业化生产的过程中，由于发酵产物的干燥需要用到微波真空干燥设备，该干燥过程会杀死大部分发酵生产纳豆激酶的枯草芽孢杆菌活菌，因此，纳豆激酶产品中枯草芽孢杆菌活菌含量不高。如果能筛选出一株耐微波的纳豆激酶高产菌株，就可以得到富含枯草芽孢杆菌活菌的纳豆激酶产品，该产品不但具有纳豆激酶产品的降压、溶栓等功效，还含有丰富的枯草芽孢杆菌活菌，从而起到改善肠道功能、预防和治疗肠道疾病的作用，其未来的发展前景不言而喻，但目前国内还没有相关方面的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株耐微波枯草芽孢杆菌及其在纳豆激酶制备中的应用，以解决纳豆激酶生产过程中由于枯草芽孢杆菌不耐微波辐射，而不易得到富含枯草芽孢杆菌活菌的纳豆激酶产品(纳豆胶囊)的技术问题。为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是提供一株耐微波枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)LB-18，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号：CGMCCNO.10835，保藏日期：2015年5月22日。本专利技术从豆豉中筛选出耐微波枯草芽孢杆菌菌株LB-18，采用本专利技术的菌株，可以获得具有高纤溶活性且富含枯草芽孢杆菌活菌的纳豆激酶产品(纳豆胶囊)。实验结果表明，本专利技术菌株生产的纳豆激酶产品纤溶活性可达2800FU/g；枯草芽孢杆菌活菌含量为1.26×108个/g，是现有纳豆激酶发酵产物的几倍。本专利技术所采用的技术方案还在于提供一株枯草芽孢杆菌在生产富含枯草芽孢杆菌活菌的高纤溶活性纳豆激酶产品方面的应用。本专利技术所采用的技术方案还在于提供一株枯草芽孢杆菌生产富含枯草芽孢杆菌活菌的高纤溶活性纳豆激酶的方法，包括以下步骤：(1)从斜面挑取枯草芽孢杆菌LB-18接种于LB液体种子培养基，25-40℃条件下，120-180r/min摇床恒温培养12-18h，得到枯草芽孢杆菌种子液；(2)将黄豆浸泡过夜，沥干水分，高压灭菌，冷却至室温后，按照1-8％的接种量接种枯草芽孢杆菌种子液，25-40℃条件下发酵培养36-72h；(3)将步骤(2)的黄豆发酵培养产物微波真空干燥，粉碎，过80-120目筛即得。所述LB液体种子培养基包括以下质量分数的原料：蛋白胨1％，酵母粉0.5％，NaCl1％；pH6.8，121℃高压灭菌20min。所述微波真空干燥设备的干燥条件为：干燥温度≤40℃，真空度-0.06MPa，微波功率8kW，微波频率2450±50MHz，干燥时间3-8h。采用本专利技术的枯草芽孢杆菌生产纳豆激酶产品，不但可以得到具有高纤溶活性的纳豆激酶，而且还是一种富含枯草芽孢杆菌的活菌制剂，从而既有降压、溶栓等功效，还有改善肠道功能、提高机体免疫力的作用，为纳豆激酶作为功能性食品和保健食品的研发提供了新的思路，使其具有更为广阔的开发前景。同时，本专利技术采用黄豆为原料，来源丰富易取，成本低，无环境污染，所用设备、试剂价格便宜，便于规模化生产。附图说明以下结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。图1为本专利技术菌株LB-18及其他纳豆激酶生产菌株用不同剂量Co60辐照后的存活率；图2为本专利技术菌株LB-18及其他纳豆激酶生产菌株用不同时间微波照射后的存活率。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。实施例1纳豆激酶高产菌株的筛选1.1纳豆激酶高产菌株的初筛取市售豆豉，称取样品10g，加入100mL无菌水中，充分振荡打散，100℃沸水煮沸5min，静置片刻，取上层混浊液，梯度稀释后，分别取100μL不同稀释度的溶液，均匀涂布于LB平板上，37℃过夜培养，挑单菌落进行划线培养，连续两次。挑取LB分离平板上的单菌落点种到纤维蛋白平板上，37℃培养18h，测量溶解圈直径，溶解圈较大的菌株液体发酵进行复筛。1.2纳豆激酶高产菌株的复筛将初筛溶解圈直径较大的菌株，用LB种子培养基活化(37℃、150r/min、过夜)，按照5％的接种量分别接入液体发酵培养基(以质量分数计：6％大豆粉，2％葡萄糖，0.06％CaCl2，0.07％MgSO4，pH6.5)中，37℃发酵72h，发酵产物用0.05M、pH7.4的磷酸缓冲液稀释，取稀释液10μL，加样于纤维蛋白平板上37℃恒温培养18h，测定溶解圈直径，选取溶解圈较大的菌株，进行耐辐射菌株的筛选。实施例2耐辐射纳豆激酶高产菌株的筛选2.1亚硝基胍诱变取复筛后产纳豆激酶活性相对较高的菌株，接种于液体LB培养基中，37℃、150r\本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株耐微波枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)LB‑18，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号：CGMCC NO.10835，保藏日期：2015年5月22日。
【技术特征摘要】
1.一株耐微波枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus
subtilis)LB-18，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北
京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号：CGMCCNO.10835，保藏日期：2015年5月22
日。
2.一种如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌在生产富含枯草芽孢杆菌活菌的高纤溶活性纳
豆激酶产品方面的应用。
3.一种如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌生产富含枯草芽孢杆菌活菌的高纤溶活性纳
豆激酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)从斜面挑取枯草芽孢杆菌LB-18接种于LB液体种子培养基，25-40℃条件下，
120-180r/min摇床恒温培养12-18h，得到枯草芽孢杆菌种子液；
(2)将黄...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓飞，周伏忠，宁萌，王雪妍，冯菲，刁文涛，胡宜亮，
申请(专利权)人：河南省科学院生物研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
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