一种纳豆激酶高效表达的方法及其用途技术

技术编号:10219020 阅读:188 留言:0更新日期:2014-07-16 17:56
本发明专利技术涉及一种纳豆激酶高效表达的方法及其用途,其特征在于:运用基因工程技术构建高效表达质粒,优化工程菌发酵条件实现纳豆激酶的低成本、高活性、高产量生产。用PCR的方法从分泌纳豆激酶的枯草芽孢杆菌基因组DNA中扩增得到全长为1056bp的前导肽+成熟肽纳豆激酶原基因,构建重组表达质粒pBE2S-Pro-NK,转化重组质粒到枯草芽孢杆菌WB600菌株后取培养液,用硫酸铵分级沉淀法纯化分泌到培养液中的纳豆激酶,经聚丙烯酰铵凝胶电泳SDS-PAGE成单一条带,经纤维平板法检测出现透明圈,得到有活性的纯度较高的纳豆激酶。这些方法可以用于工业化生产用于生产纳豆激酶胶囊、纳豆激酶肠溶片和注射针剂。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种纳豆激酶高效表达的方法,其特征在于:纳豆激酶高效表达的方法是,运用基因工程技术构建高效表达质粒,优化工程菌发酵条件实现纳豆激酶的低成本、高活性、高产量生产,用PCR的方法从分泌纳豆激酶的枯草芽孢杆菌基因组DNA中扩增得到全长为1056bp的前导肽+成熟肽纳豆激酶原基因,构建重组表达质粒pBE2S‑Pro‑NK,转化重组质粒到枯草芽孢杆菌WB600菌株后取培养液,用硫酸铵分级沉淀法纯化分泌到培养液中的纳豆激酶,经聚丙烯酰铵凝胶电泳SDS‑PAGE成单一条带,经纤维平板法检测出现透明圈,得到有活性的纯度较高的纳豆激酶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:邱东茹阮晶洪峰
申请(专利权)人:武汉万密斋养生堂科技发展有限公司
类型:发明
国别省市:湖北;42

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