具有二肽基肽酶‑IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种具有二肽基肽酶‑IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌及其应用，其中，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCC NO.14571；保藏日期为：2017年8月29日；分类命名为：干酪乳杆菌鼠李糖亚种Lactobacillus casei subsp rhamnosus。本发明专利技术筛选出的菌株，对二肽基肽酶‑IV的抑制率达27.113％，在此基础上，又充分模拟人体的消化环境对筛选的菌株进行评估，结果显示，该菌株对酸很敏感，对胆盐有很好的耐受性，在模拟唾液、胃液、肠液中的存活率分别为98.46％、36.51％、50.62％，可以很好地在人体内环境中存活并发挥作用。这株具有二肽基肽酶‑IV高抑制活性且对人体胃肠转运具有优秀生存特性的鼠李糖乳杆菌ZNJ05可用于制备降糖功能性食品的开发，具有很好的市场前景。

With two dipeptidyl peptidase IV high inhibitory activity of Lactobacillus rhamnosus and its application

The invention discloses a Lactobacillus and its application, with a two dipeptidyl peptidase IV high inhibitory activity in which the strains in the preservation number of bacterial China microbe preservation management committee is: CGMCC NO.14571; the preservation date: August 29, 2017; classification named as Lactobacillus casei in rats Li Lactobacillus casei subsp sugar subspecies rhamnosus. The present invention screened strains, inhibition of dipeptidyl peptidase two IV rate of 27.113%, on this basis, but also fully simulated human digestive environment assessment, screening of strains showed that the strain was sensitive to acid, have very good tolerance to bile salts, the survival rate in artificial saliva and in the gastric and intestinal juice were 98.46%, 36.51%, 50.62%, can be a good environment in the human body and play a role in survival. This strain has two dipeptidyl peptidase IV high inhibitory activity and has excellent survival characteristics of human gastrointestinal transit Shu Li Lactobacillus ZNJ05 preparing sugar can be used for the development of functional food, has good market prospects.

【技术实现步骤摘要】
具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌及其应用
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌及其应用。
技术介绍
近年来，糖尿病在全世界广泛流行，逐渐成为危害人体生活和健康的主要疾病，各种抗糖尿病药物也在不断地开发。常见的主要口服降糖药有胰岛素分泌促进剂、胰岛素增敏剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂等，但是不可避免地会出现一定程度的药物不良。葡萄糖依赖性促胰岛素释放多肽(GIP)和胰高血糖素样肽(GLP-1)是人体中主要存在的两种内源性肠促胰岛激素，可以促进胰岛素的分泌，维持血糖平衡。二肽基肽酶-IV(DPP-IV)是一种具有丝氨酸外肽酶活性的膜糖蛋白，可以从多肽的N端切除脯氨酸二肽。当GLP-1释放后会被DPP-IV迅速降解，因此可通过二肽基肽酶抑制剂抑制DPP-IV作用提高GIP和GLP-1水平，进而起到提高胰岛素水平，维持血糖平衡作用。因此二肽基肽酶抑制剂已经成为治疗II型糖尿病的重要的作用靶点。益生菌目前已经被广泛应用在食品发酵和医药等工业领域。近几年研究发现，益生菌作为定居肠道中的有益菌群具有多种生理功能：缓解乳糖不耐受症、改善便秘和腹泻、维持肠道微生态平衡和肠管机能、增强免疫功能和抗肿瘤、影响心血管疾病的发展、影响糖尿病和血糖代谢、缓解过敏反应等一系列的疾病。大量研究表明，益生菌具有减少糖尿病发病率的潜力，但是人们对于益生菌作为糖尿病治疗剂的研究还是很少。研究筛选出具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的益生菌，在制药、保健食品以及特殊膳食等具有广泛的应用前景。实现在人体日常摄入益生菌，改善肠道健康的同时，就能够对异常血糖代谢进行及早干预，避免了药物控制导致的低血糖或体重增加等其他副作用。为肥胖人群、血糖紊乱及糖尿病人开发具有调节和干预血糖、促进身体健康功能的保健型功能性食品提供新型的功能性的配料，奠定基础。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供一种具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌及其应用，所述鼠李糖乳杆菌具有优秀的体外抑制二肽基肽酶-IV活性能力；所述鼠李糖乳杆菌用于降糖功能性食品的制备中，具有有效的降糖效果。为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCCNO.14571；保藏日期为：2017年8月29日；分类命名为：干酪乳杆菌鼠李糖亚种Lactobacilluscaseisubsprhamnosus；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号一种上述的具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌的获取方法，包括以下步骤：步骤1、通过筛选获得对二肽基肽酶-IV抑制活性最高的菌株；所述筛选包括样品的制备和对二肽基肽酶-IV抑制活性的测定。步骤2、对筛选获得的菌株进行益生特性评价；所述益生特性评价包括耐酸性试验、耐胆盐试验、对HT-29细胞的黏附性、对模拟胃肠道的耐受性和体外模拟益生菌的消化试验。步骤3、通过16SrDNA基因测序分析确定菌种即得所述对二肽基肽酶-IV具有抑制作用的鼠李糖乳杆菌。优选的是，步骤1中所述样品的制备包括细胞代谢物的制备；所述细胞代谢物的制备的具体过程为：益生菌于MRS培养基中37℃静置培养16-20h后，离心收集菌体，将收集到的菌体用无菌磷酸盐缓冲溶液洗涤2-4次，再重悬于磷酸盐缓冲溶液中，调节菌液浓度至1×106-1×1010cfu/mL，混匀，孵育、离心、收集上清，过滤得到细胞代谢物。优选的是，步骤1中所述样品的制备包括细胞内容物的制备；所述细胞内容物的制备的具体过程为：益生菌于MRS培养基中37℃静置培养16-20h后，离心收集菌体，将收集到的菌体用无菌磷酸盐缓冲溶液洗涤2-4次，再重悬于磷酸盐缓冲溶液中，调节菌液浓度至1×106-1×1010cfu/mL，混匀，超声破碎，4℃下离心收集上清，过滤得到细胞内容物。优选的是，所述超声破碎的条件为：冰浴条件下，功率200W，以3-5s的脉冲破碎10-14min。优选的是，步骤1中对二肽基肽酶-IV抑制活性的测定主要包括以下步骤：步骤A、取酶标板，用微量移液器在反应孔中加入20-30μL细胞代谢物或细胞内容物，45-55μL缓冲液，0.5-1.5μL酶，于37℃避光培养8-12min，再加入45-55μL缓冲液，1-3μL物质，用酶标仪37℃反应1-30min，在405nm处每分钟测一次反应液的吸光值。步骤B、用西格列汀做阳性对照，0.1MpH6.8的磷酸盐缓冲溶液做空白对照。步骤C、计算相对抑制率，得到对二肽基肽酶-IV抑制活性最高的菌株。上述的具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌在制备降糖功能性食品中的应用。本专利技术至少包括以下有益效果：本专利技术采用体外试验的方法，筛选出对二肽基肽酶-IV抑制能力最强的菌株，所述菌株对酸很敏感，但对胆盐有很好的耐受性，可以很好地在人体内环境中存活，可用于制备降糖功能性食品的开发，具有很好的市场前景。对于含有抑制二肽基肽酶-IV能力的鼠李糖乳杆菌的食品，不但具有辅助降糖的效果，还兼具益生菌的诸多优点，适用于肥胖人群、胰岛素抵抗及糖尿病患者的食品的开发。含有本专利技术所述鼠李糖乳杆菌的食品无任何不良影响及毒副作用，安全性高。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。附图说明图1为本专利技术获得的所述具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌的工艺流程图；图2为本专利技术所述具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌的益生特性柱状图；图3为本专利技术所述的琼脂糖凝胶电泳图；图4为本专利技术实验1中所述鼠李糖乳杆菌ZNJ05对不同来源的二肽激肽酶的抑制作用图；图5为本专利技术所述实验2中饲喂13周后每组的空腹血糖值图；图6为本专利技术所述实验2中饲喂13周后每组的糖基化血红蛋白值图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。如图1所示，本专利技术提供一种具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCCNO.14571；保藏日期为：2017年8月29日；分类命名为：干酪乳杆菌鼠李糖亚种Lactobacilluscaseisubsprhamnosus。一种上述的具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌的获取方法，包括以下步骤：步骤1、通过筛选获得对二肽基肽酶-IV抑制活性最高的菌株；所述筛选包括样品的制备和对二肽基肽酶-IV抑制活性的测定。步骤2、对筛选获得的菌株进行益生特性评价；所述益生特性评价包括耐酸性试验、耐胆盐试验、对HT-29细胞的黏附性、对模拟胃肠道的耐受性和体外模拟益生菌的消化试验。步骤3、通过16SrDNA基因测序分析确定菌种即得所述对二肽基肽酶-IV具有抑制作用的鼠李糖乳杆菌。一个优选方案中，步骤1中所述样品的制备包括细胞代谢物的制备；所述细胞代谢物的制备的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有二肽基肽酶‑IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌，其中，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCC NO.14571；保藏日期为：2017年8月29日；分类命名为：干酪乳杆菌鼠李糖亚种Lactobacillus casei subsp rhamnosus。

【技术特征摘要】
1.一种具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌，其中，所述菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCCNO.14571；保藏日期为：2017年8月29日；分类命名为：干酪乳杆菌鼠李糖亚种Lactobacilluscaseisubsprhamnosus。2.一种如权利要求1所述的具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌的获取方法，其中，包括以下步骤：步骤1、通过筛选获得对二肽基肽酶-IV抑制活性最高的菌株；所述筛选包括样品的制备和对二肽基肽酶-IV抑制活性的测定；步骤2、对筛选获得的菌株进行益生特性评价；所述益生特性评价包括耐酸性试验、耐胆盐试验、对HT-29细胞的黏附性、对模拟胃肠道的耐受性和体外模拟益生菌的消化试验；步骤3、通过16SrDNA基因测序分析确定菌种即得所述对二肽基肽酶-IV具有抑制作用的鼠李糖乳杆菌。3.如权利要求2所述的具有二肽基肽酶-IV高抑制活性的鼠李糖乳杆菌，其中，步骤1中所述样品的制备包括细胞代谢物的制备；所述细胞代谢物的制备的具体过程为：益生菌于MRS培养基中37℃静置培养16-20h后，离心收集菌体，将收集到的菌体用无菌磷酸盐缓冲溶液洗涤2-4次，再重悬于磷酸盐缓冲溶液中，调节菌液浓度至1×106-1×1010cfu/mL，混匀，孵育、离心、收集上清，过滤得到细胞代谢物。4.如权利要求2所述的具有...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘鹭，吕加平，张书文，逄晓阳，芦晶，王芬，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11