一种用于人类MGMT基因启动子甲基化水平检测的成套试剂及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于人类MGMT基因启动子甲基化水平检测的成套试剂及检测方法。本发明专利技术保护引物探针组合，由引物探针组甲和引物探针组乙；所述引物探针组甲由序列1‑3所示的单链DNA分子组成；所述引物探针组乙由序列4‑6所示的单链DNA分子组成。本发明专利技术通过荧光定量PCR技术平台，实现对MGMT基因启动子是否甲基化的检测，同时计算样本的突变率，从而为胶质瘤患者临床诊断和治疗提供参考。

Kit and detection method for detection of methylation level of human MGMT gene promoter

The invention discloses a kit for detecting the methylation level of human MGMT gene promoter and a detection method thereof. The present invention protection primer probe combinations by primer probe group A and group B of the primer probe; primer probe sets of single stranded DNA molecules by a sequence of 1 shown in Figure 3; single stranded DNA molecules with the primer probe set B by the sequence of 4 represented by 6. The present invention uses fluorescence quantitative PCR technology platform to detect whether the promoter of MGMT gene is methylated, and calculates the mutation rate of the sample, so as to provide reference for the clinical diagnosis and treatment of the glioma patients.

【技术实现步骤摘要】
一种用于人类MGMT基因启动子甲基化水平检测的成套试剂及检测方法
本专利技术涉及一种用于人类MGMT基因启动子甲基化水平检测的成套试剂及检测方法。
技术介绍
MGMT(O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶)是一种DNA修复蛋白，普遍存在于人体细胞内，其编码基因位于染色体10q26.3，全长170kb，由5个外显子和4个内含子组成。MGMT主要通过不可逆地将烷化基团从O6-mG转移到MGMT蛋白145位的半胱氨酸残基上而保护细胞免受烷化剂的致突变、致癌和细胞毒作用的损伤。烷化剂类抗肿瘤药物在给药后，分子中的一个或多个活性烷基将会转移到肿瘤细胞DNA分子的碱基鸟嘌呤上，使O6-鸟嘌呤甲基化，形成O6-MG，O6-MG的存在阻碍了肿瘤细胞DNA的复制过程，或影响基因的表达，或导致DNA分子断裂，最终实现杀死肿瘤细胞的目的。而DNA修复蛋白MGMT能将甲基从O6-MG转移到自身第145位的半胱氨酸残基上，使半胱氨酸残基成为新的甲基受体，并使肿瘤细胞DNA链上的鸟嘌呤复原为O6-鸟嘌呤，恢复肿瘤细胞的繁殖增生能力。因此，MGMT的存在被认为是肿瘤细胞对烷化剂类抗肿瘤药物耐药性存在的主要原因。人本文档来自技高网...

【技术保护点】
引物探针组甲，由引物F1、引物R1和探针P1组成；所述引物F1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；所述引物R1为序列表的序列2所示的单链DNA分子；所述探针P1为序列表的序列3所示的单链DNA分子；所述探针P1的5’端采用荧光基团修饰，3’端采用淬灭基团修饰。

【技术特征摘要】
1.引物探针组甲，由引物F1、引物R1和探针P1组成；所述引物F1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；所述引物R1为序列表的序列2所示的单链DNA分子；所述探针P1为序列表的序列3所示的单链DNA分子；所述探针P1的5’端采用荧光基团修饰，3’端采用淬灭基团修饰。2.如权利要求1所述的引物探针组甲，其特征在于：所述荧光基团为6-FAM；所述淬灭基团为3IABkFQ。3.引物探针组合，由权利要求1或2所述的引物探针组甲和引物探针组乙组成；所述引物探针组乙由引物F2、引物R2和探针P2组成；所述引物F2为序列表的序列4所示的单链DNA分子；所述引物R2为序列表的序列5所示的单链DNA分子；所述探针P2为序列表的序列6所示的单链DNA分子；所述探针P2的5’端采用荧光基团修饰，3’端采用淬灭基团修饰。4.如权利要求3所述的引物探针组合，其特征在于：所述探针P2的5’端采用HEX修饰，3’端采用3IABkFQ修饰。5.权利要求1或2所述的引物探针组甲，或，权利要求3或4所述的引物探针组合在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为如下(a1)-(a4)中的至少一种：(a1)检测待测样本MGMT基因启动子甲基化百分比；(a2)检测待测样本MGMT基因启动子甲基化程度；(a3)辅助预测胶质瘤患者化疗效果；(a4)辅助制定胶质瘤患者化疗方案。6.含有权利要求1或2所述的引物探针组甲的试剂盒甲，或，含有权利要求3或4所述的引物探针组合的试剂盒乙；所述试剂盒的用途为如下(a1)-(a4)中的至少一种：(a1)检测待测样...

【专利技术属性】
技术研发人员：阎海，王思振，焦宇辰，赵芳萍，郑延军，徐大勇，郑乔松，
申请(专利权)人：北京泛生子基因科技有限公司，重庆泛生子生物科技有限公司，重庆今创泛生医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11