可提升干细胞存活率的胎盘活性成分制备方法技术

本发明专利技术提供一种可提升干细胞存活率的胎盘活性成分制备方法，为在预定操作条件下，利用超临界流体技术去除胎盘粉末的雌激素，继而检测去除雌激素的胎盘粉末的脂肪组织来源干细胞的活性，当活性高于100％，表示干细胞具有增生效果，可将胎盘粉末制成胶囊食品，若活性低于100％，表示干细胞无增生效果，则再将去除雌激素的胎盘粉末与生理食盐水以预定比例混合成胎盘液后予以纯化，用以可获得胎盘中胜肽与蛋白质等活性成分。

Preparation method of placenta active component capable of improving stem cell survival rate

The invention provides a dried placenta active ingredients can promote cell survival in the preparation process, for a predetermined operation condition, the removal of the placenta powder of supercritical fluid technology and detection of estrogen, adipose tissue derived placental powder removal of estrogen stem cell activity, when the activity is higher than 100%, said stem cells have proliferative effects the placenta powder capsule, food, if the activity is lower than 100%, said stem cell proliferation effect, then remove the placenta estrogen powder and salt water mixed liquid into the placenta after purified by a predetermined, which can be used to obtain peptides and proteins and other active components in placenta.

【技术实现步骤摘要】
可提升干细胞存活率的胎盘活性成分制备方法
本专利技术为人体胎盘运用技术有关，更详而言之是指一种可提升干细胞存活率的胎盘活性成分制备方法。
技术介绍
胎盘含有必需氨基酸及具生理活性的胜肽、维生素、矿物质和各种生长因子，可延缓细胞衰老，调节自主神经系统、女性内分泌，改善心血管循环，促进伤口组织愈合，增强神经再生能力，平衡多种荷尔蒙分泌，调节免疫功能(抗过敏)，镇痛作用(抗发炎)和改善肠道健康等功能。胎盘萃取物可广泛应用于生医、医美等美白、保湿与促进细胞愈合与再生的用途，可全面有效地改善人体皮肤老化、促进肌肤美白、增强皮肤弹性、防止皱纹产生、增强细胞活力、抗过敏、抗肿瘤与改善记忆等强化身体健康的机能性。虽然胎盘含有甚多对人体有益的成分，不过，更含有致癌疑虑的雌激素，世界多国皆已将雌激素列为一级致癌物而逐渐禁用。已知去除胎盘中雌激素的技术甚多，如美国第47849360号、第4423151号、第5565199号等专利，及第20070087001号、第20040132086号等公开案所示，大多采用强酸、强碱、酵素或是加热与添加有机溶剂等方式，将雌激素从胎盘粉中分离去除，例如，以酸、碱与酵素分解或以有机溶剂分离雌激素成分，均需使用100～1000倍水溶液或溶剂进行去雌激素的加工程序，去雌激素后还需进行繁复的浓缩、分离及纯化步骤，且需考虑酸、碱破坏有效机能成分与酵素活性等缺点，无法大量应用于商业化。此外，也可利用萃取、纯化等方式取得胎盘中有益的成分，例如，可从胎盘中萃取生物活性胜肽成分，如美国专利US3409605，以离子交换树脂吸附、浓缩和纯化胎盘中生长因子，美国专利US4169139，则以丙酮、稀醋酸铅和稀硫酸铵分离沉淀组织中的蛋白质成分，也有如中国CN101658534A专利，其采用液态氮冷冻解冻法，高速研磨后，再经过透析脱盐与超过滤膜澄清处理，以离子交换树脂吸附和洗脱条件下，得到活性胜肽成分。由于现有萃取、纯化胎盘中的胜肽、蛋白质与活化因子等相关机能成分的技术，不是制程繁杂、耗时，且需使用大量的有机溶剂，有机溶剂可能会在制作过程中与机能成分产生化学反应，不仅制作完成后溶剂去除与浓缩过程中，加热蒸发溶剂易造成部分机能成分被破坏，且溶剂易残留于分离物或纯化物中，造成机能成分纯度不足的情形，显有改进之处。
技术实现思路
本专利技术的主要目的即在提供一种可提升干细胞存活率的胎盘活性成分制备方法，其以无毒无害的安全技术可几乎完全去除胎盘的雌激素，将胎盘的好处极大化，更可提升干细胞的活性，供制成食品或化妆品，甚具实用价值。缘是，为达成前述的目的，本专利技术提供一种可提升干细胞存活率的胎盘活性成分制备方法，至少包含以下步骤：制备胎盘粉末：将新鲜胎盘以预定温度杀菌后，经冷冻干燥处理并研磨而得到胎盘粉末；去除雌激素：在压力20～30MPa、温度40℃的操作条件下，将50～100g胎盘粉末放置于一萃取槽内，以体积流速比为10～20：1的超临界状态溶剂通入该萃取槽，用以去除胎盘粉末中的大部分雌激素，超临界状态溶剂为饱和超临界流体CO2与乙醇的混合液，再在相同操作条件下，将前述胎盘粉末与相同体积流速比的超临界状态溶剂流入一吸附槽，用以使胎盘粉末中剩余的雌激素被该吸附槽吸附，获致去除雌激素的胎盘粉末；检测干细胞活性：检测去除雌激素的胎盘粉末的脂肪组织来源干细胞的活性，当活性高于一预定值时，表示干细胞具有增生效果，可将胎盘粉末制成食品或化妆品，若活性低于该预定值，表示干细胞无增生效果，则进行下一纯化步骤，将去除雌激素的胎盘粉末与生理食盐水以1:20～25的比例混合成胎盘液再予以纯化，用以获得胎盘中胜肽与蛋白质等活性成分。进一步地，制备胎盘粉末的步骤中，将新鲜胎盘以温度121℃灭菌30分钟，再冷冻干燥处理后磨成胎盘粉末。进一步地，制备胎盘粉末的步骤中，新鲜胎盘为人体或动物胎盘。进一步地，去除雌激素的步骤中，最适的操作条件压力为24～26MPa，温度为40℃，超临界状态溶剂的体积流速比例为15：1，可达到90％的雌激素去除率。进一步地，检测干细胞活性的步骤中，该干细胞为脂肪组织来源干细胞(adiposederivedstemcells；ADSC)。进一步地，检测干细胞活性的步骤中，以MTT比色法分析干细胞的活化能力，活化能力的单位以％表示，该预定值为100％。进一步地，纯化的步骤中，包含一分馏的步骤与一纯化的步骤，分馏的步骤为在压力2000～4000psi、温度40至60℃、超临界状态溶剂流速3～9mL/min与胎盘液流速1～3mL/min的操作条件下，将胎盘液与超临界状态溶剂连续通入一分馏槽内，用以可在该分馏槽的顶端与底端分别萃取出胜肽与蛋白质等机能成分，纯化的步骤为在温度40℃或60℃下，将该分馏槽内萃取出的胜肽与蛋白质等机能成分，连续地依序输送经过连接的三个分离槽，分别以3000、2000、1000psi的压力逐步降压，也即，第一分离槽为3000psi的压力、第二分离槽为2000psi的压力、最后的第三分离槽为1000psi的压力，用以可分离超临界状态溶剂、可选择性分离、区分与纯化胎盘胜肽与蛋白质的含量与纯度在不同分离槽，以获得胎盘液中的胜肽、蛋白质与活化因子等机能成分。进一步地，纯化的步骤中，在5kg/cm2、25℃的操作条件下，使用一过滤膜过滤胎盘液为透流液，用以将胜肽、蛋白质与活化因子等机能成分保留于透流液中。进一步地，该过滤膜可为微过滤膜(0.2μm)或超过滤膜(分子量分割：500,000)之一。此外，本专利技术更提供一种可提升人体内超氧化物歧化酶(SOD)的食品，以前述方法所制备。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供一种可提升干细胞存活率的胎盘活性成分制备方法，其以无毒无害的安全技术可几乎完全去除胎盘的雌激素，将胎盘的好处极大化，更可提升干细胞的活性，供制成食品或化妆品，甚具实用价值。附图说明图1为本专利技术一较佳实施例的流程图。图2为本专利技术一较佳实施例所制备的胎盘粉末与原始胎盘的雌激素含量HPLC图谱图。图3为本专利技术一较佳实施例所制备的胎盘粉末与原始胎盘的ADSC干细胞存活率比较图。图4为本专利技术一较佳实施例胎盘粉末所制备的食用胶囊供12位女性使用后与控制组的干细胞存活率比较图。图5为比较不同浓度(25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)的本专利技术原始胎盘液(增生效果小于100％的胎盘液)与经纯化处理后的ADSC干细胞存活率比较图。图6A、图6B为微过滤膜(MF)与超过滤膜(UF)在不同浓度(25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)下透流液(permeate)、保留液(retentate)及原始胎盘液的ADSC干细胞存活率比较图。图7A、图7B、图7C为分别经微过滤膜纯化、超过滤膜纯化后蛋白在保留液中的比例图。图8为使用本专利技术一较佳实施例胎盘粉末所制备的食品前后的SOD活性变化图。图9为4名使用者使用本专利技术一较佳实施例胎盘粉末所制备的食品前后的端粒酶活性变化图。具体实施方式以下，兹举本专利技术若干较佳实施例，并配合附图做进一步的详细说明如后：首先，请参阅图1所示，本专利技术一较佳实施例可提升干细胞存活率的胎盘活性成分制备方法100，其第一步骤为制备胎盘粉末110：：将新鲜胎盘以杀菌釜在温度121℃灭菌30分钟后，经冷冻干燥处理并本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可提升干细胞存活率的胎盘活性成分制备方法，其特征在于，至少包含以下步骤：制备胎盘粉末：将新鲜胎盘以预定温度杀菌后，经冷冻干燥处理并研磨而得到胎盘粉末；去除雌激素：在压力20～30MPa、温度40℃的操作条件下，将50～100g胎盘粉末放置于一萃取槽内，以体积流速比为10～20：1的超临界状态溶剂通入该萃取槽内萃取2～3小时，用以去除胎盘粉末中的大部分雌激素，超临界状态溶剂为饱和超临界流体CO2与乙醇的混合液，再在相同操作条件下，将前述胎盘粉末与相同体积流速比的超临界状态溶剂流入一吸附槽，用以使胎盘粉末中剩余的雌激素被该吸附槽吸附，获致去除雌激素的胎盘粉末；检测干细胞活性：检测去除雌激素的胎盘粉末的干细胞活性，当活性高于一预定值时，表示干细胞具有增生效果，可将胎盘粉末制成食品或化妆品，若活性低于该预定值，表示干细胞无增生效果，则进行下一纯化步骤；及纯化：将去除雌激素的胎盘粉末与生理食盐水以1:20～25的比例混合成胎盘液再予以纯化，用以可获得胎盘中胜肽与蛋白质等活性成分。

【技术特征摘要】
2016.04.29 TW 1051136251.一种可提升干细胞存活率的胎盘活性成分制备方法，其特征在于，至少包含以下步骤：制备胎盘粉末：将新鲜胎盘以预定温度杀菌后，经冷冻干燥处理并研磨而得到胎盘粉末；去除雌激素：在压力20～30MPa、温度40℃的操作条件下，将50～100g胎盘粉末放置于一萃取槽内，以体积流速比为10～20：1的超临界状态溶剂通入该萃取槽内萃取2～3小时，用以去除胎盘粉末中的大部分雌激素，超临界状态溶剂为饱和超临界流体CO2与乙醇的混合液，再在相同操作条件下，将前述胎盘粉末与相同体积流速比的超临界状态溶剂流入一吸附槽，用以使胎盘粉末中剩余的雌激素被该吸附槽吸附，获致去除雌激素的胎盘粉末；检测干细胞活性：检测去除雌激素的胎盘粉末的干细胞活性，当活性高于一预定值时，表示干细胞具有增生效果，可将胎盘粉末制成食品或化妆品，若活性低于该预定值，表示干细胞无增生效果，则进行下一纯化步骤；及纯化：将去除雌激素的胎盘粉末与生理食盐水以1:20～25的比例混合成胎盘液再予以纯化，用以可获得胎盘中胜肽与蛋白质等活性成分。2.如权利要求1所述可提升干细胞存活率的胎盘活性成分制备方法，其特征在于，制备胎盘粉末的步骤中，将新鲜胎盘以温度121℃灭菌30分钟，再冷冻干燥处理后磨成胎盘粉末。3.如权利要求2所述可提升干细胞存活率的胎盘活性成分制备方法，其特征在于，制备胎盘粉末的步骤中，新鲜胎盘为人体或动物胎盘。4.如权利要求1所述可提升干细胞存活率的胎盘活性成分制备方法，其特征在于，去除雌激素的步骤中，最适的操作条件压力为24～26MPa，温度为40℃，超临界状态溶剂的体积流速比例为15：1，可达到90％的雌激素去除率。5.如权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄明熙，王璧娟，游宜龙，彭秋莹，庄淋翔，钟心语，郭蕙甄，
申请(专利权)人：超微体生医科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71