制备皿培式牛樟芝中抗癌成分三萜类化合物的方法技术

本发明专利技术提供一种制备皿培式牛樟芝中抗癌成分三萜类化合物的方法，在压力2000‑4000psi、温度40‑60℃的操作条件下，将超临界CO2流体与乙醇1:0.1‑0.2(v/v)混合至饱和状态，以流速6‑9L/hr通入含1‑2kg牛樟芝的一萃取槽内进行萃取，再流入一层析管柱进行分离，可在层析管柱顶部得到高浓度三萜类化合物活性成分，并通过细胞毒性试验、细胞形态变化的分析、细胞周期与细胞凋亡检测、细胞爬行转移等检测，证实制备的三萜类化合物具有抗癌效果。

Method for preparing anticancer components of Antrodia camphorata in culture dish type three terpenoids

The present invention provides a method for preparing anticancer components of Antrodia camphorata in culture dish type three terpenoids, under the pressure of 2000 4000psi, 40 temperature of 60 DEG C operating conditions, the supercritical fluid CO2 and 1:0.1 0.2 ethanol (v/v) mixed to the saturated state, with a flow rate of 6 9L/hr into a the extraction tank containing 1 2kg a.cinnamomea in extraction, and then into a column were separated in column top compounds obtained from high concentration of active ingredients of three terpenoids, and by cytotoxicity test, cell morphology, cell cycle analysis and detection of apoptosis and cell metastasis detection, crawling, confirmed three terpene compounds were prepared with anticancer effect.

【技术实现步骤摘要】
制备皿培式牛樟芝中抗癌成分三萜类化合物的方法
本专利技术与皿培式牛樟芝(Antrodiacinnamomea)中活性成分有关，更详而言之是指一种制备皿培式牛樟芝中抗癌成分三萜类化合物的方法者。
技术介绍
牛樟芝子实体所含的多种化合物、三萜类活性成分，已被不少研究证实具有抗肿瘤、抑制癌细胞生长的功效，如刊登在“活体外毒理学(ToxicologyinVitro)”期刊的马偕一号(MMH01)(“去氢硫色多孔菌酸化合物(dehydrosulphurenicacid)”)，及登载在“国际老人医学期刊(InternationalJournalofGerontology)”的马偕二号(MMH02)(羊毛甾烷(Lanostane)三萜类成分)等，而已知生产牛樟芝的技术中，利用皿培方式生产牛樟芝，不仅生长速度快，且萃取物的抗癌效果更得到提升，并可减少牛樟树被砍伐、加强民众的环保意识。已知关于牛樟芝抗癌成分、化合物制备的专利甚多，例如，中国专利CN102232944B、CN102000047B、CN102232945B、CN102232940B、CN102232943B、CN102232942B、CN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备皿培式牛樟芝中抗癌成分三萜类化合物的方法，其特征在于，步骤至少包含有：备取牛樟芝：将1‑2Kg的皿培式牛樟芝放置于一萃取槽内；萃取与分离：在操作压力2000‑4000psi、温度40‑60℃的操作条件下，将超临界状态溶剂以3‑9L/hr流速通入该萃取槽进行萃取，超临界状态溶剂为超临界CO2流体与乙醇以1：0.1‑0.2(v/v)的体积比例混合至饱和状态，萃取30‑60分钟后，将牛樟芝萃取物通入一层析管柱，利用该层析管柱将牛樟芝萃取物分离出杂质与三萜类化合物，杂质可自该层析管柱的底部去除，另自该层析管柱的顶部取出高浓度三萜类化合物；及检测：通过细胞毒性试验、细胞形态变化分析、细胞周期、细...

【技术特征摘要】
2016.03.25 TW 1051094851.一种制备皿培式牛樟芝中抗癌成分三萜类化合物的方法，其特征在于，步骤至少包含有：备取牛樟芝：将1-2Kg的皿培式牛樟芝放置于一萃取槽内；萃取与分离：在操作压力2000-4000psi、温度40-60℃的操作条件下，将超临界状态溶剂以3-9L/hr流速通入该萃取槽进行萃取，超临界状态溶剂为超临界CO2流体与乙醇以1：0.1-0.2(v/v)的体积比例混合至饱和状态，萃取30-60分钟后，将牛樟芝萃取物通入一层析管柱，利用该层析管柱将牛樟芝萃取物分离出杂质与三萜类化合物，杂质可自该层析管柱的底部去除，另自该层析管柱的顶部取出高浓度三萜类化合物；及检测：通过细胞毒性试验、细胞形态变化分析、细胞周期、细胞凋亡检测及细胞爬行转移分析，检测三萜类化合物的抗癌效果。2.如权利要求1所述制备皿培式牛樟芝中抗癌成分三萜类化合物的方法，其特征在于，检测的步骤中，细胞毒性试验的方式，为将大肠癌细胞株放置于一96孔培养盘内200μL的完全培养基中，预定时间后将培养基置换成含三萜类化合物0.25-1.0mg/mL的完全培养基，并加入到96孔培养盘的不同孔中；另外，对照组则只加入200μL的完全培养基，培养预定时间后，以四甲基偶氮唑盐比色法分析测定每孔中的活细胞数量比值，并以免疫酵素分析仪在570nm下测定吸光值。3.如权利要求2所述制备皿培式牛樟芝中抗癌成分三萜类化合物的方法，其特征在于，为1天后将培养基置换成含三萜类化合物的完全培养基，培养2天后以四甲基偶氮唑盐比色法测定每孔中的活细胞数量比值。4.如权利要求1所述制备皿培式牛樟芝中抗癌成分三萜类化合物的方法，其特征在于，检测的步骤中，细胞形态变化分析的方式，为将大肠癌细胞株放置于一培养盘，预定时间待细胞贴底后，给予适量含有三萜类化合物1.0mg/mL的样品，并置于培养盘中预定时间后，以倒立显微镜观察细胞形态，并拍照记录。5.如权利要求4所述制...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄明熙，彭秋莹，钟心语，纪正祐，刘曲婷，郭蕙甄，
申请(专利权)人：超微体生医科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71