桑黄抗癌活性黄酮类化合物PBF‑2及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种桑黄抗癌活性黄酮类化合物PBF‑2及其制备方法与应用。将桑黄子实体处理获得桑黄子实体粉，取桑黄子实体粉加入80％乙醇溶液并进行超声处理，超声处理后的溶液依次进行水浴回流和抽滤处理，然后离心处理后收集上清液浓缩萃取，再浓缩回收得到粗黄酮类化合物液，用80％乙醇溶液进行稀释，离心取上清液后，过滤膜再上AB‑8大孔树脂柱吸附处理，用80％乙醇溶液洗脱后收集洗脱峰的洗脱液，冷冻干燥后得到均一的黄酮类化合物PBF‑2。本发明专利技术制备产物纯度均一，对细胞Hela和SGC‑7901的生长均有抑制作用，对正常细胞人胚胎肾细胞HEK293和小鼠巨噬细胞RAW264.7生长均无不良影响，可用于抗癌产品开发。

The anticancer activity of Flavonoids from Phellinus PBF 2 preparation method and application thereof

The present invention discloses a kind of anticancer activity of Flavonoids from Phellinus linteus PBF 2 preparation method and application thereof. The fruiting bodies of Phellinus linteus obtain fruiting powder, from the fruiting body of p.igniarius powder added 80% ethanol solution and ultrasonic treatment, ultrasonic treatment after solution in water bath reflux and filtration treatment, then centrifuged supernatant was collected after extraction and concentration, concentration and recovery of crude flavonoids was diluted with 80% ethanol solution and the centrifugal supernatant after filtration membrane to AB 8 macroporous resin column adsorption treatment, collecting the eluting peak with 80% ethanol eluted after freeze-drying to obtain uniform flavonoids PBF 2. The purity of the product prepared by the invention is uniform, has inhibitory effects on the growth of Hela cells and SGC 7901, there were no adverse effects on normal cells of human embryonic kidney cell HEK293 and mouse macrophage RAW264.7 growth, can be used for anti-cancer product development.

【技术实现步骤摘要】
桑黄抗癌活性黄酮类化合物PBF-2及其制备方法与应用
本专利技术涉及了一种黄酮类化合物及其制备方法，尤其是涉及了一种桑黄抗癌活性黄酮类化合物PBF-2及其制备方法与应用。
技术介绍
黄酮类化合物广泛存在于动植物体中，可分为黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、二氢异黄酮、查尔酮等多种类型，不同的动植物种类及部位存在不同的黄酮类化合物类型。天然黄酮类化合物具有抗炎、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、解热、保肝等广泛的药理作用，并且毒副作用小，深受国内外研究者高度关注，被广泛应用于医药、食品等领域中。桑黄(Phellinusbaumii)是一种珍贵的药用真菌子实体，因寄生于桑树而得名，有“森林黄金”的美誉。桑黄具有抗癌、抗炎症、抗氧化、降血糖、免疫调节、护肝等多种药理作用，尤其抗癌效果极其显著，但桑黄的抗癌机理还不清楚，这阻害了桑黄药用水平提高及药用范围扩大。分离纯化制备桑黄抗癌活性成分，对于推进桑黄药用开发具有积极的现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种桑黄抗癌活性黄酮类化合物PBF-2及其制备方法与应用，是采用回流提取、乙酸乙酯萃取、AB-8大孔树脂柱分离纯化的方法，制备桑黄抗癌活性黄酮类化合物PBF-2。为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一、一种桑黄抗癌活性黄酮类化合物PBF-2的制备方法：1)将桑黄子实体处理获得桑黄子实体粉；2)取桑黄子实体粉加入乙醇溶液并进行超声处理；3)超声处理后的溶液依次进行水浴回流和抽滤处理，然后离心处理后收集上清液；4)上清液浓缩后萃取，再浓缩回收得到粗黄酮类化合物液；5)用乙醇溶液将粗黄酮类化合物液进行稀释，离心取上清液后，过滤膜再上AB-8大孔树脂柱吸附处理；6)用乙醇溶液洗脱后收集洗脱峰的洗脱液，冷冻干燥后得到均一的黄酮类化合物组分，取名PBF-2。所述步骤2)、5)和6)中的乙醇溶液均为含有80％质量分数乙醇的水溶液。本专利技术方法的工艺条件具体为：1)桑黄子实体于-50℃下真空干燥36h，于-15℃下超微粉碎5min，过80～100目筛，得到桑黄子实体粉；2)取桑黄子实体粉，按W：V为1:40加入质量分数为80％的乙醇溶液，混匀后，在30℃下用超声波清洗仪以500W功率53KHz频率的超声波磁场作用30min；3)于100℃水浴中回流提取3次，每次1.5～2.0h，集中收集三次的提取液，三次提取液经过合并后用抽滤机进行抽滤处理，弃掉滤渣，将滤液用高速离心机于10000rpm下离心5min，弃掉沉淀，收集上清液；4)上清液用旋转蒸发仪浓缩，用乙酸乙酯萃取3次，收集并合并三次萃取液，用旋转蒸发仪浓缩并回收溶剂，得到粗黄酮类化合物液；5)用分光光度法测定粗黄酮类化合物液中黄酮类化合物含量，根据测定的含量用质量分数为80％的乙醇溶液进行稀释，使得黄酮类化合物质量浓度调整为1.2～1.4mg/mL溶液，再将溶液在8000rpm下离心10min，取上清液，过0.45μm滤膜，上AB-8大孔树脂柱吸附，用蒸馏水冲洗直到流出液为无色；6)用质量分数为80％的乙醇溶液于1.5～2.0mL/min流速下洗脱，用自动收集器收集，根据分光光度法测定结果收集具有黄酮类化合物的洗脱峰的洗脱液，-50℃下真空干燥，得到均一的黄酮类化合物组分PBF-2。所述步骤4)中的乙酸乙酯体积是浓缩后溶液体积的2倍。二、由上述方法制备而成的桑黄抗癌活性黄酮类化合物在抗癌中的应用。所述抗癌中的应用是针对人宫颈癌细胞Hela和人胃癌细胞SGC-7901，具体是抑制癌细胞生长的作用。本专利技术具有的有益效果是：本专利技术分离纯化制备的桑黄抗癌活性黄酮类化合物PBF-2，纯度均一，对人宫颈癌细胞Hela和人胃癌细胞SGC-7901的生长均表现出明显的抑制作用，对正常细胞人胚胎肾细胞HEK293和小鼠巨噬细胞RAW264.7生长均无不良影响，可用于抗癌产品的开发，这对于提升桑黄药用价值，具有积极的社会效益和经济效益。附图说明图1是实施例1的PBF-2对人宫颈癌细胞Hela和人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。实施之前，先将桑黄子实体于-50℃下真空干燥36h，于-15℃下超微粉碎5min，过80～100目筛，得到桑黄子实体粉，用于以下各个实施例。本专利技术实施例采用MTT法检测PBF-2对人宫颈癌细胞Hela和人胃癌细胞SGC-7901的生长情况，来验证本专利技术制备产物是否具有其技术效果。实施例1：取过80目筛的桑黄子实体粉，按1：40料液比加入质量分数为80％的乙醇溶液，混匀后，在30℃下用超声波清洗仪以500W功率53KHz频率的超声波磁场作用30min。于100℃水浴中回流提取3次，提取液用乙酸乙酯，每次1.5h，集中收集三次的提取液，三次提取液经过合并后用抽滤机进行抽滤处理，弃掉滤渣，将滤液用高速离心机于10000rpm下离心5min，弃掉沉淀，收集上清液。上清液用旋转蒸发仪浓缩，用乙酸乙酯萃取3次，收集并合并三次萃取液，用旋转蒸发仪浓缩并回收溶剂，得到粗黄酮类化合物液。用分光光度法测定粗黄酮类化合物液中黄酮类化合物含量为2.85mg/mL，粗黄酮类化合物用质量分数为80％的乙醇溶液调整质量浓度为1.3mg/mL，再将溶液在8000rpm下离心10min，取上清液，过0.45μm滤膜，上AB-8大孔树脂柱吸附，用蒸馏水冲洗直到流出液为无色。再用质量分数为80％的乙醇溶液于1.8mL/min流速洗脱，自动收集器收集，减压浓缩，用分光光度法测定，收集具有黄酮类化合物的洗脱峰的洗脱液，-50℃下真空干燥，得到黄酮类化合物PBF-2，PBF-2纯度均一。针对两种癌细胞，本实施例得到的黄酮类化合物PBF-2分别配成0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL和0.3mg/mL不同浓度下对SGC-7901和Hela的生长进行实验，并增加常用抗癌药物氟尿嘧啶5-Fu作为阳性对照。实验后发现，本实施例得到的黄酮类化合物PBF-2在浓度0.3mg/mL时对Hela和SGC-7901的抑制率分别为92.75％和97.12％(如图1所示，图中柱上字母不同表示两者间差异达显著水平)，对正常细胞人胚胎肾细胞HEK293和小鼠巨噬细胞RAW264.7生长无不良影响，相比常用抗癌药物氟尿嘧啶5-Fu能够达到相等的抑制作用。实施例2：取过100目筛的桑黄子实体粉，按1：40料液比加入质量分数为80％的乙醇溶液，混匀后，在30℃下用超声波清洗仪以500W功率53KHz频率的超声波磁场作用30min。于100℃水浴中回流提取3次，提取液用乙酸乙酯，每次1.8h，集中收集三次的提取液，三次提取液经过合并后用抽滤机进行抽滤处理，弃掉滤渣，将滤液用高速离心机于10000rpm下离心5min，弃掉沉淀，收集上清液。上清液用旋转蒸发仪浓缩，用乙酸乙酯萃取3次，收集并合并三次萃取液，用旋转蒸发仪浓缩并回收溶剂，得到粗黄酮类化合物液。用分光光度法测定粗黄酮类化合物液中黄酮类化合物含量为2.81mg/mL，粗黄酮类化合物用质量分数为80％的乙醇溶液调整质量浓度为1.2mg/mL，再将溶液在8000rpm下离心10min，取上清液，过0.45μm滤膜，上AB-8大孔树脂柱吸附，用蒸馏水本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种桑黄抗癌活性黄酮类化合物PBF‑2的制备方法，其特征在于：1)将桑黄子实体处理获得桑黄子实体粉；2)取桑黄子实体粉加入乙醇溶液并进行超声处理；3)超声处理后的溶液依次进行水浴回流和抽滤处理，然后离心处理后收集上清液；4)上清液浓缩后萃取，再浓缩回收得到粗黄酮类化合物液；5)用乙醇溶液将粗黄酮类化合物液进行稀释，离心取上清液后，过滤膜再上AB‑8大孔树脂柱吸附处理；6)用乙醇溶液洗脱后收集洗脱峰的洗脱液，冷冻干燥后得到均一的黄酮类化合物组分PBF‑2。

【技术特征摘要】
1.一种桑黄抗癌活性黄酮类化合物PBF-2的制备方法，其特征在于：1)将桑黄子实体处理获得桑黄子实体粉；2)取桑黄子实体粉加入乙醇溶液并进行超声处理；3)超声处理后的溶液依次进行水浴回流和抽滤处理，然后离心处理后收集上清液；4)上清液浓缩后萃取，再浓缩回收得到粗黄酮类化合物液；5)用乙醇溶液将粗黄酮类化合物液进行稀释，离心取上清液后，过滤膜再上AB-8大孔树脂柱吸附处理；6)用乙醇溶液洗脱后收集洗脱峰的洗脱液，冷冻干燥后得到均一的黄酮类化合物组分PBF-2。2.根据权利要求1所述的一种桑黄抗癌活性黄酮类化合物PBF-2的制备方法，其特征在于：所述步骤2)、5)和6)中的乙醇溶液均为含有80％质量分数乙醇的水溶液。3.根据权利要求1所述的一种桑黄抗癌活性黄酮类化合物PBF-2的制备方法，其特征在于方法的工艺条件具体为：1)桑黄子实体于-50℃下真空干燥36h，于-15℃下超微粉碎5min，过80～100目筛，得到桑黄子实体粉；2)取桑黄子实体粉，按W：V为1:40加入质量分数为80％的乙醇溶液，混匀后，在30℃下用超声波清洗仪以500W功率53KHz频率的超声波磁场作用30min；3)于100℃水浴中回流提取3次，每次1.5～2.0h，集中收集三次的提取液，三次提取液经过合并后用抽滤机进行抽滤处理，弃掉滤渣，将滤液用高速离...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘明明，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33