本发明专利技术公开了一种具有抗肿瘤活性的桑黄高效工厂化袋料栽培工艺，该工艺包括以下步骤：(1)从桑树采集获得野生桑黄子实体，经过菌株分离纯化后接种到母种培养基中培养获得桑黄母种，桑黄母种接种到液体培养基中培养获得桑黄原种，桑黄原种接种到液体发酵罐中进行放大发酵培养获得桑黄栽培种；(2)将桑黄栽培种接种到菌棒中进行发菌生产；(3)出菇管理：将布满菌丝体的菌棒进行切口，转入出菇室进行工厂化管理出菇。本发明专利技术的优点是：自动化液体接种极大的提高接种效率、减少污染；工厂化栽培保证桑黄出菇率高、桑黄子实体生长迅速，生长周期缩短，子实体成熟期统一，颜色金黄、外形大小均一，经过大量培养实践证明，桑黄可实现高效工厂化培养。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种具有抗肿瘤活性的桑黄高效工厂化袋料栽培工艺。
技术介绍
桑黄是一种真菌，因寄生于桑树而得名。分类上属真菌界(Fungi)、担子菌门(Basidiomycotas)、层菌纲(Hymenomycetes)非褶菌目(Aphyllophorales)锈革孔菌科(Hymenochaetaceae)针层孔菌属(PhellinusQuel.)。主要分布于东亚(中国、日本、韩国、朝鲜、俄罗斯)一带。在中国，桑黄的使用从汉朝起至今已经有2000多年的历史了，中国最早的本草学著作《神农本草经》就已经有了“桑寄生”的药物功效记载(戴玉成，崔宝凯.药用真菌桑黄种类研究；北京林业大学学报，2014；36(5)：2-8)。现代研究证实桑黄含有多种活性成分，如多糖、黄酮、多酚等，具有抗癌、护肝、抗过敏等药理作用，备受消费者青睐(张维博，王家国，李正阔，杨丽群，秦俭，向仲怀，崔红娟.药用真菌桑黄的研究进展，中国中药杂志，2014，39(15)：2838-2845)。由于桑黄人工驯化栽培过程较为复杂，难度较大，现有的桑黄栽培方法存在出菇率低，人工培养生长情况不好，桑黄子实体颜色成褐色，生长周期长，导致生产成本较高等问题，需要对现有的栽培方法进行改良。自动化液体接种、高效工厂化栽培是现代高效农业的典范，属新兴产业，是高效现代化农业的发展趋势和重要模式。通过现代设施设备的调控减少人为操作和气候因素的影响，
进行工厂化常年生产，提高栽培成功率，形成稳定的产品来源是目前桑黄生产的关键问题。同时由于“桑黄”种类繁多，寻找具有药用活性和价值的桑黄菌种进行人工栽培才具有市场化应用价值，才能实现真正的产业化生产和应用。
技术实现思路
本专利技术提供了一种接种高效、培养简单，管理容易，出菇率高、可进行大面积工厂化人工栽培的桑黄袋料栽培工艺。为了解决上述技术问题，本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种具有抗肿瘤活性的桑黄高效工厂化袋料栽培工艺，包括以下步骤：A、栽培设施a、栽培房：栽培房要求：高2.6-3.2m，长8-12m，宽5-6m，栽培房分为菌种室、接种室、发菌室、出菇室，接种室、发菌室和出菇室之间设有内隔门相连，每两个室之间有缓冲室，房内外地面及周围用水泥砖石铺设，栽培房内设有通风设备和控温控湿设备；b、栽培床：搭建栽培床架用不锈钢搭建，栽培床设有横梁托撑，能承受菌棒重压，床宽0.5-0.8m，长1.8-2.0m，床架层数以3-4层，床架底层离地面0.1-0.2m，最顶层离房顶1.2-1.5m，上下层间距0.4-0.5m，床架排与排之间留有0.5-0.6m的走道；B、菌种的制备本专利技术所使用的桑黄菌(Inonotus linteus)来自浙江省农业科学院蚕桑所，是从浙江省桐庐县桑树上寄生的野生桑黄子实体分离纯化菌株，该菌株经过ITS分子生物学鉴定后，于2015年10月23日保存在中国微生物菌种保藏管理委员
会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.11407，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所邮编100101，本专利技术保藏提供的生物材料为桑黄S9，分类命名为：桑黄Inonotus linteus；母种培养基配方(PDA培养基)：马铃薯200克，白砂糖20克，琼脂20克，MgSO4 1.5克，KH2PO4 1.5克，水1000毫升；原种、栽培种培养基配方：马铃薯200克，白砂糖20克，MgSO4 1.5克，KH2PO4 1.5克，水1000毫升；原种是由母种液体接种培养而成，栽培种则由原种放大发酵而成。本专利技术中桑黄菌种活化后，在无菌条件下将母种接种到液体培养基上培养，20℃-30℃震荡培养获得桑黄原种；待菌丝成熟后在无菌条件下接种至液体发酵罐中，20℃-30℃培养获得栽培种；C、菌棒的制备袋料培养基配方：桑黄栽培培养基的含水量为50-70％，固相配方为：桑树枝木屑20-60重量份，棉籽壳25-60重量份，麸皮10-25重量份，白糖0.5-2重量份，石膏0.5-2重量份，具体配置方法为：先将桑树枝条用粉碎机加工成粒度为0.5-2cm的木屑；再按培养基配方称取白糖、石膏用水溶化；继续称取桑树枝木屑、棉籽壳、麸皮，加入溶化好的白糖、石膏充分混匀，并补充水分，使培养料含水量达到50-70％；用17cm×33cm×0.05cm的聚乙烯菌袋装袋，每袋装湿料0.8-1kg，套上菌环和菌盖封口；D、菌棒灭菌菌棒进行高压灭菌时压力为3-5个大气压，温度120℃，灭菌时间为6-8小时；常压灭菌时压力为为1个大气压，温度100℃，灭菌时间为24-36小时，灭菌结束后冷却至室温；E、接种接种开始前，对接种箱进行清洗消毒。按常规的无菌接种法，在无菌条件下，打开菌盖，接入15-30ml液体菌种迅速盖上菌盖，移入发菌室内培养；F、出菇管理发菌时温度控制在18-30℃，湿度控制在40-50％，培养30-40天。待栽培袋内菌丝开始呈现黄色或出现突起的瘤状原基时，将菌袋移至出菇室进行出菇管理。在菌袋中部用手术刀开两个1-1.5×4-7cm长方形的小口，菌袋与菌袋之间留有10-15cm空间，温度控制在20-30℃，湿度控制在80-95％，每天通风3次，每次1-3小时。培养50-60天，当桑黄子实体由橙黄色转成深黄色，边缘硬化，表明已经成熟，可采收。与现有技术相比，本专利技术的优点是：本专利技术的高效工厂化人工袋料栽培桑黄工艺经过大量的培养实践证明，可真正实现桑黄的工厂化人工培养，自动化液体接种不仅可以节省大量劳动力成本，而且还可以避免人为操作所带来接种量不均、易污染等因素，使得生产过程高效可控；工厂化栽培可以节省大量空间，温湿度可控，使得桑黄生产管理简化易于掌控。根据本专利技术方法得到的桑黄子实体出现在菌棒切口处，桑黄出菇率大于＞90％，桑黄子实体生长迅速，生长周期缩短，子实体成熟期统一，颜色金黄、外形大小均一，桑黄子实体鲜品
重30-60克，干重为15-30克。经成分检测分析发现：人工袋料栽培的桑黄子实体药用活性成分含量显著高于野生桑黄，这可能是由于野生桑黄常年野外生长木质化造成有效成分下降。药理学实验证实本专利技术所生产的桑黄子实体具有显著的抑制肿瘤细胞，特别是肠道肿瘤细胞增殖的功效。附图说明图1是采用本专利技术栽培桑黄子实体图；图2是多糖含量分析的葡萄糖标准曲线；图3是野生桑黄和采用本专利技术栽培桑黄子实体的多糖含量；图4是黄酮含量分析的芦丁标准曲线图；图5是野生桑黄和采用本专利技术栽培桑黄子实体的黄酮含量；图6是多酚含量分析的没食子酸标准曲线图；图7是野生桑黄和采用本专利技术栽培桑黄子实体的多酚含量；图8是野生桑黄和采用本专利技术栽培桑黄多糖对HT-29细胞增殖抑制作用；图9是野生桑黄和采用本专利技术栽培桑黄黄酮对HT-29细胞增殖抑制作用；图10是野生桑黄和采用本专利技术栽培桑黄多酚对HT-29细胞增殖抑制作用；图11是野生桑黄和采用本专利技术栽培桑黄多糖对HCT116细胞增殖抑制作用；图12是野生桑黄和采用本专利技术栽培桑黄黄酮对HCT116细胞增殖抑制作用；图13是野生桑黄和采用本专利技术栽培桑黄多酚对HCT116细胞增殖抑制作
用。具体实施方式一种具有抗肿瘤活性的桑黄高效工厂化袋料栽培工艺，包括以下步骤：A、栽培设施a、栽培房：栽培房要求本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有抗肿瘤活性的桑黄高效工厂化袋料栽培工艺，其特征在于：包括以下步骤：A、栽培设施a、栽培房：栽培房要求：高2.6‑3.2m，长8‑12m，宽5‑6m，栽培房分为菌种室、接种室、发菌室、出菇室，接种室、发菌室和出菇室之间设有内隔门相连，每两个室之间有缓冲室，房内外地面及周围用水泥砖石铺设，栽培房内设有通风设备和控温控湿设备；b、栽培床：搭建栽培床架用不锈钢搭建，栽培床设有横梁托撑，能承受菌棒重压，床宽0.5‑0.8m，长1.8‑2.0m，床架层数以3‑4层，床架底层离地面0.1‑0.2m，最顶层离房顶1.2‑1.5m，上下层间距0.4‑0.5m，床架排与排之间留有0.5‑0.6m的走道；B、菌种的制备母种培养基配方(PDA培养基)：马铃薯200克，白砂糖20克，琼脂20克，MgSO4 1.5克，KH2PO4 1.5克，水1000毫升；原种、栽培种培养基配方：马铃薯200克，白砂糖20克，MgSO4 1.5克，KH2PO4 1.5克，水1000毫升；原种是由母种液体接种培养而成，栽培种则由原种放大发酵而成，本专利技术中桑黄菌种活化后，在无菌条件下将母种接种到液体培养基上培养，20℃‑30℃震荡培养获得桑黄原种；待菌丝成熟后在无菌条件下接种至液体发酵罐中，20℃‑30℃培养获得栽培种；C、菌棒的制备袋料培养基配方：桑黄栽培培养基的含水量为50‑70％，固相配方为：桑树枝木屑20‑60重量份，棉籽壳25‑60重量份，麸皮10‑25重量份，白糖0.5‑2重量份，石膏0.5‑2重量份，具体配置方法为：先将桑树枝条用粉碎机加工成粒度为0.5‑2cm的木屑；再按培养基配方称取白糖、石膏用水溶化；继续称取桑树枝木屑、棉籽壳、麸皮，加入溶化好的白糖、石膏充分混匀，并补充水分，使培养料含水量达到50‑70％；用17cm×33cm×0.05cm的聚乙烯菌袋装袋，每袋装湿料0.8‑1kg，套上菌环和菌盖封口；D、菌棒灭菌菌棒进行高压灭菌时压力为3‑5个大气压，温度120℃，灭菌时间为6‑8小时；常压灭菌时压力为为1个大气压，温度100℃，灭菌时间为24‑36小时，灭菌结束后冷却至室温；E、接种接种开始前，对接种箱进行清洗消毒，按常规的无菌接种法，在无菌条件下，打开菌盖，接入15‑30ml液体菌种迅速盖上菌盖，移入发菌室内培养；F、出菇管理发菌时温度控制在18‑30℃，湿度控制在40‑50％，培养30‑40天，待栽培袋内菌丝开始呈现黄色或出现突起的瘤状原基时，将菌袋移至出菇室进行出菇管理，在菌袋中部用手术刀开两个1‑1.5×4‑7cm长方形的小口，菌袋与菌袋之间留有10‑15cm空间，温度控制在20‑30℃，湿度控制在80‑95％，每天通风3次，每次1‑3小时，培养50‑60天，当桑黄子实体由橙黄色转成深黄色，边缘硬化，表明已经成熟，可采收。...
【技术特征摘要】
1.一种具有抗肿瘤活性的桑黄高效工厂化袋料栽培工艺，其特征在于：包括以下步骤：A、栽培设施a、栽培房：栽培房要求：高2.6-3.2m，长8-12m，宽5-6m，栽培房分为菌种室、接种室、发菌室、出菇室，接种室、发菌室和出菇室之间设有内隔门相连，每两个室之间有缓冲室，房内外地面及周围用水泥砖石铺设，栽培房内设有通风设备和控温控湿设备；b、栽培床：搭建栽培床架用不锈钢搭建，栽培床设有横梁托撑，能承受菌棒重压，床宽0.5-0.8m，长1.8-2.0m，床架层数以3-4层，床架底层离地面0.1-0.2m，最顶层离房顶1.2-1.5m，上下层间距0.4-0.5m，床架排与排之间留有0.5-0.6m的走道；B、菌种的制备母种培养基配方(PDA培养基)：马铃薯200克，白砂糖20克，琼脂20克，MgSO4 1.5克，KH2PO4 1.5克，水1000毫升；原种、栽培种培养基配方：马铃薯200克，白砂糖20克，MgSO4 1.5克，KH2PO41.5克，水1000毫升；原种是由母种液体接种培养而成，栽培种则由原种放大发酵而成，本发明中桑黄菌种活化后，在无菌条件下将母种接种到液体培养基上培养，20℃-30℃震荡培养获得桑黄原种；待菌丝成熟后在无菌条件下接种至液体发酵罐中，20℃-30℃培养获得栽培种；C、菌棒的制备袋料培养基配方：桑黄栽培培养基的含水量为50-70％，固相配方为：桑树枝...
【专利技术属性】
技术研发人员：钟石，李有贵，计东风，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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