心肌梗死生物标志物miR‑1283制造技术

本发明专利技术涉及心肌梗死生物标志物miR‑1283，具体涉及miR‑1283及其靶基因在诊治心肌梗死中的应用。miRNA在急性心肌梗死的表达和可能的作用研究较少，现有生物标志物远远不能满足临床诊断需求，本发明专利技术基于高通量技术挑选出miR‑1283及其靶基因HDAC4、PHC2、THOC5、IL17RA，验证实验表明他们可用于心肌梗死的临床诊断及预防检测，本发明专利技术为临床上心肌梗死相关诊断试剂研发奠定基础。

Myocardial infarction biomarker miR 1283

The present invention relates to biomarkers of myocardial infarction miR 1283, which relates to application of miR 1283 and its target gene in the diagnosis and treatment of acute myocardial infarction. Expression of miRNA in acute myocardial infarction and the possible effects of less existing biomarkers can not meet the clinical needs of the invention, a high-throughput technique selected miR 1283 and its target genes HDAC4, PHC2, THOC5, IL17RA based on the experiment of clinical diagnosis and prevention of myocardial infarction can be used to detect them, the invention to lay the foundation for the clinical diagnosis of myocardial infarction related research reagents.

【技术实现步骤摘要】
心肌梗死生物标志物miR-1283
本专利技术涉及疾病诊断治疗领域，具体的涉及心肌梗死生物标志物miR-1283，更具体的涉及miR-1283及其靶基因在诊治心肌梗死中的应用。
技术介绍
急性心肌梗死(AMI)是最严重的一种心血管疾病，早期、准确的诊断可以保证再灌注治疗的立即开始可能减少死亡率。一些生物标志物如心肌肌钙蛋白I已应用与诊断AMI，可提高目前诊断，为急性心肌梗死的新方法。然而，miRNA在急性心肌梗死的表达和可能的作用是研究较少，以往的研究表明miR-30a是与心肌肥厚相关，miR-195的靶基因调节细胞凋亡，细胞增殖和细胞周期，他们可作为诊断急性心肌梗死生物标志物的潜在临床价值，但是这些还远远不够，临床的精准诊断和治疗需要更多候选分子标志物。现有研究显示miR-1283的前体与HBV相关肝癌的易感性显著相关(miRNA-SNPs的遗传关联研究以及肝癌的整合生物学研究，2011博士论文，中国人民解放军军事医学科学院)，此外，miR-1283在非结核分枝杆菌感染者血浆中低表达，是潜在的用以鉴别结核分枝杆菌感染和结核分枝杆菌感染的分子标志物(结核与非结核分枝杆菌感染者血浆中差异表达microRNAs筛选，现代预防医学，2016)。本专利技术基于高通量测序方法，获得心肌梗死miRNA和mRNA的表达数据，同时，结合GEO数据库中心肌梗死相关miRNA和mRNA数据，进行生物信息学分析验证，从候选的miRNA和mRNA中挑选出miR-1283及其靶基因进行分子生物学验证，结果显示，miR-1283及其靶基因与心肌梗死密切相关。可用于心肌梗死的临床诊断及预防检测，为临床上相关诊断试剂研发奠定基础。
技术实现思路
检测miR-1283的制剂在制备诊断心肌梗死试剂中的应用。所述miR-1283的序列见序列表SEQIDNO1。进一步，诊断心肌梗死试剂包括基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测样本中miR-1283。优选采用northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测样本中miR-1283的转录。所述的样本为外周血。优选的，基于定量PCR方法包括特异性扩增miR-1283的引物，进一步优选，特异性扩增miR-1283的引物序列为SEQIDNO2；基于探针杂交方法包括与miR-1283的核酸序列杂交的探针。本专利技术的目的在于提供miR-1283的靶基因在制备诊断心肌梗死制剂中的应用。所述靶基因为DIANA-MICROT、MICRORNA.ORG、MIRDB、RNA22-HAS、TARGETMINER、TARGETSCAN-VERT数据库公开的miR-1283靶基因。优选的，所述靶基因为HDAC4、PHC2、THOC5、IL17RA。进一步，诊断心肌梗死试剂包括基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测样本miR-1283靶基因的转录或基于免疫检测方法检测样本中miR-1283靶基因的表达情况。优选采用northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测样本中miR-1283靶基因的转录；采用ELISA和/或胶体金试纸条检测样本中miR-1283靶基因的表达情况。本专利技术的目的在于提供上调miR-1283的转录和/或促进miR-1283的活性的试剂在制备防治心肌梗死制剂中的应用。优选的，采用基于RNA的microRNA功能获得性技术和/或基因特异性miRMimics技术上调miR-1283的转录和/或促进miR-1283的活性。优选人工合成短发夹RNA或通过调控启动子上调miR-1283。本专利技术的目的在于提供miR-1283的靶基因的抑制剂在制备防治心肌梗死制剂中的应用。本专利技术的目的在于提供一种心肌梗死诊断试剂，心肌梗死诊断试剂能够检测心肌梗死样本中miR-1283的转录或免疫检测方法检测心肌梗死样本中miR-1283调控的靶基因的表达情况。进一步，心肌梗死诊断试剂包括检测miRNA调控的靶基因HDAC4、PHC2、THOC5、IL17RA表达的特异性引物。本专利技术的目的在于提供上述防治心肌梗死的制剂在制备心肌梗死治疗药物或试剂中的应用。定义：现阶段检测miRNA的表达水平的方法主要包括基于高通量测序技术、基于核苷酸杂交和基于PCR的miRNA检测方法。基于探针杂交技术的miRNA检测方法是一种直接检测法，不需要对样本RNA进行预扩增，包括northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术等技术。(1)Northern杂交又称RNA印迹技术为最经典的检测真核生物RNA大小，估计其丰度的实验方法。基本原理如下：首先在载体(如硅片、微球或膜等)上固定miRNA样本，再与经过标记的探针杂交，洗涤多余的杂交探针后进行信号检测；也可以在载体上先固定与靶miRNA序列互补的DNA探针，然后与经过标记的样本miRNA杂交，再进行信号检测。信号标记的方法包括同位素标记、荧光标记和纳米金标记等。(2)miRNA表达谱芯片原理同样是使用标记探针检测固相支持物上的目标分子。通过设计芯片上miRNA基因及内参序列，可精确分析出样品中相应miRNA的表达水平。基因芯片具有高通量的优点，可以一次在同一样本中检测出几百个基因的全部表达。Luminex公司研制的液相芯片(Liquidchip)又称多功能悬浮点阵(Multianalytesuspensionarray，MASA)，是出的新一代生物芯片技术。液相芯片体系由许多小球体为主要基质构成，每种小球体上固定有不同的探针分子，为了区分不同的探针，每一种用于标记探针的球形基质都带有一个独特的色彩编号，将这些小球体悬浮于一个液相体系中，就构成了液相芯片系统。该系统可以对同一个微量样本中的多个不同分子同时进行快速的定性、定量分析，这种检测技术被称为FMAP(Flexiblemultianalyteprofiling)技术。分子杂交在悬浮溶液中进行，检测速度极快。(3)核酶保护分析技术(RPA)miRNA的检测还可以采用核酶保护分析技术，将标记好的探针和待测RNA样本混合，热变性后杂交，未杂交的RNA和多余的探针用单链核酸酶消化，热失活核酸酶后纯化受保护的RNA分子，最后通过变性PAGE电泳分离探针，显色。这种基于液相杂交的新方法简单快速，灵敏度高，但也只能用于分析已知miRNA。(4)RAKE法RAKE法(RNAprimedarraybasedKlenowemzyme)是在miRNAmicroarray的基础上利用DNA聚合酶I的Klenow片段，使miRNA与固定的DNA探针杂交的方法。RAKE可以敏感特异地检测miRNA，适用于大量快速的筛选所有己知的miRNA。能够在特定的细胞和肿瘤中检测miRNA表达谱情况。不仅如此，RAKE法还可以从由福尔马林固定了的石蜡包埋的组织中分离出miRNA并对其进行分析，为从存档标本中分析miRNA开启了希望之门。(5)原位杂交(insituhybridization)原位杂交技术可直观了解miRNA表达方式，是观测miRNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测miR‑1283的制剂在制备诊断心肌梗死试剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测miR-1283的制剂在制备诊断心肌梗死试剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，miR-1283的序列见序列表SEQIDNO1。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，诊断心肌梗死试剂包括基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测样本中miR-1283的转录，优选的，采用northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测样本中miR-1283的转录。4.miR-1283靶基因在制备诊断心肌梗死制剂中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述靶基因为DIANA-MICROT、MICRORNA.ORG、MIRDB、RNA22-HAS、TARGETMINER、TARGETSCAN-VERT数据库公开的miR-1283靶基因，优选的，靶基因为HDAC4、PHC2、THOC5、IL17...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙锦云，李曙光，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11