本发明专利技术属于医药和基因工程领域，涉及中药单体shizukaol D在制备Wnt通路抑制剂中的应用及其应用方法。本发明专利技术还提供了相应的测试Wnt通路活性的试剂盒、抑制体外细胞Wnt信号通路的方法及种抑制Wnt通路的药物组合物。本发明专利技术为Wnt通路抑制剂提供了新的先导化合物，为抑制细胞的Wnt通路提供新的方法和途径，为中药单体shizukaol D提供新的应用，提升了其植物来源——银线草的药用价值。
Application of ShizukaolD in preparation of inhibitors of Wnt pathway
The invention belongs to the field of medicine and genetic engineering, relates to the traditional Chinese medicine monomer shizukaol D in the preparation of the application of Wnt pathway inhibitors and its application in method. The invention also provides a kit for testing the activity of the Wnt pathway, a method for inhibiting an Wnt signaling pathway in vitro and a pharmaceutical composition for inhibiting the Wnt pathway. The present invention provides new lead compounds as inhibitors of the Wnt pathway provides a new approach to Wnt inhibitory cells, provide a new application for traditional Chinese medicine monomer shizukaol D, enhance the medicinal value of the plant source of silver grass.
【技术实现步骤摘要】
ShizukaolD在制备Wnt通路抑制剂中的应用
本专利技术属于医药和基因工程领域，具体而言，本专利技术涉及中药单体shizukaolD在制备Wnt通路抑制剂中的应用及其应用方法。
技术介绍
ShizukaolD最早由日本学者川端(Kawabata)从金粟兰科植物宽叶金粟兰(KawabataJ,MizutaniJ.DimericsesquiterpenoidestersfromChloranthusserratus.[J].Phytochemistry,1992,31(4):1293-6.)和银线草(KawabataJ.SesquiterpenedimersfromChloranthusjaponicus[J].Phytochemistry,1995,39,121-7.)中提取。金粟兰科植物主要分布在我国北方和日本、朝鲜等地(YimNH,HwangEI,YunBS,etal.SesquiterpenefurancompoundCJ-01,anovelchitinsynthase2inhibitorfromChloranthusjaponicusSIEB[J].BiolPharmBull,2008,31(5):1041-4.),家喻户晓的代表性植物就是银线草。银线草全株供药用，能祛湿散寒、活血止痛、散瘀解毒，主治风寒咳嗽、风湿痛、闭经，外用治跌打损伤、瘀血肿痛、毒蛇咬伤等。ShizukaolD是一种存在于金粟兰科植物的、典型的倍半萜二聚体；常温下为淡黄色粉末，极性溶液中溶解性差，可溶于DMSO、氯仿等有机溶剂，避光保存；分子式：C33H38O9；分子量：578.65；CAS号：142279-42-3。其活性报道较少。2009年10月13日申请的中国专利技术专利《乌药烷型二聚倍半萜类化合物,其制备方法及其在制药中的应用》(申请号为200910095051.6)中描述：shizukaolD明显增加L6细胞葡萄糖的消耗量，提示能够促进胰岛素的作用，促进糖的摄取和转运。Zhang等曾在2012年报道其抗炎症方面的作用(ZhangM，IMunekazu，WangJun-song，etal.TerpenoidsfromChloranthusserratusandTheirAnti-inflammatoryActivities[J].JournalofNaturalProducts,2012,75(4):694-8.)。直到2014年1月，Hu等在《PlosOne》杂志上发表了shizukaolD通过诱导线粒体功能失调抑制肝细胞中脂内容物的报道(HuR,YanH,HaoX,etal.ShizukaolDisolatedfromChloranthusjaponicasinhibitsAMPK-dependentlipidcontentinhepaticcellsbyinducingmitochondrialdysfunction[J].PLoSOne,2013,8(8):e73527.)。但是，到目前为止，尚无关于shizukaolD靶向抑制细胞信号通路方面的报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供shizukaolD的新用途。Shizukaol是一种存在于金粟兰科植物的、典型的倍半萜二聚体，其功能活性报道集中在抗炎症方面。本专利技术提供了shizukaolD在制备Wnt通路抑制剂中的应用。Wnt通路主要分为经典Wnt通路和非经典Wnt通路。前者的研究较多。经典Wnt通路即wnt/β-catenin通路，通过β-catenin介导。正常体细胞中β-catenin大部分结合在细胞膜上,少部分与Axin(轴蛋白)、APC(adenomatouspolyposiscoli，腺瘤性结肠息肉病蛋白)、CK(酪蛋白激酶)、GSK-3β(糖原合成酶-3β)结合形成降解复合物，并被其磷酸化，然后通过泛素蛋白酶体途径迅速降解，从而维持胞浆内游离β-catenin的低水平。当胞外wnt蛋白与FZDs(卷曲蛋白)受体以及LRP5/6(低密度脂蛋白相关受体)复合物结合后，激活了细胞内的Dsh(散乱蛋白)、抑制GSK-3β的活性,β-catenin从复合物中解离，其降解受到抑制并在细胞质中积累。β-catenin积累到一定程度进入细胞核，并与核内转录因子Tcf/Lef结合形成转录复合物，激活相关目的基因的表达，wnt通路被激活并引起细胞生物学活性的变化。第二代测序(NGS，Nextgenerationsequencing)表明，Wnt通路是一个重要的致癌因素，Wnt信号通路失调则可能导致肿瘤的发生、发展。shizukaolD能够降低Wnt通路信号，抑制β-catenin的表达，这可能是导致肿瘤细胞增殖受到抑制的重要因素。一方面，本专利技术提供了shizukaolD在制备Wnt通路抑制剂中的应用。本专利技术中，所述的shizukaolD常温下为淡黄色粉末，极性溶液中溶解性差，可溶于DMSO、氯仿等有机溶剂，避光保存；分子式：C33H38O9；分子量：578.65；CAS号：142279-42-3。本专利技术中，所述的Wnt通路通常是经典Wnt通路。本专利技术中，所述的Wnt通路抑制剂是靶向β-catenin的抑制剂。本专利技术提供了一种抑制体外培养细胞的Wnt通路的方法，即在细胞培养基中加入shizukaolD。其中，shizukaolD的终浓度范围是0-25微摩尔/升且不包含0或者25微摩尔/升。较好的，所述药剂的有效浓度范围是0-12.5微摩尔/升，例如，不大于6.25微摩尔/升。所述的细胞是肝源细胞或者肾源细胞。所述的抑制Wnt信号通路是靶向抑制β-catenin的表达水平。本专利技术还提供了一种测试Wnt通路活性的试剂盒，所述的试剂盒中含有中药单体shizukaolD。shizukaolD可以作为试剂盒中的Wnt通路抑制剂。所述的试剂盒中含有制作测定Wnt通路信号强度的标准曲线的试剂。另一方面，本专利技术提供了一种抑制Wnt通路的药物组合物，所述的抑制Wnt通路的药物组合物中的活性成分是shizukaolD。所述的药物组合物是粉剂、软膏剂、气雾剂、片剂或者液体制剂。所述的药物组合物含有药剂学上常用的辅料。本专利技术提供了中药单体shizukaolD在制备Wnt通路抑制剂中的应用。实验表明，shizukaolD能够抑制Top/Fop荧光素酶活性。加入shizukaolD处理的细胞样品，Wnt通路关键基因及下游基因表达水平明显下降，激活Wnt通路能够补偿shizukaolD抑制细胞增殖的作用。尤其是加入shizukaolD处理的细胞样品中，Wnt通路核心效应物β-catenin的表达水平显著下降。这些表明，shizukaolD能够抑制Wnt通路。本专利技术Wnt通路抑制剂提供了新的先导化合物，为抑制细胞的Wnt通路提供新的方法和途径，为中药单体shizukaolD提供新的应用，提升了其植物来源——银线草的药用价值。附图说明图1是shizukaolD对Top/Fopflash荧光素酶活性的影响。纵坐标为TOP和FOP的比值。横坐标为化合物的浓度。*表示0.01<p<0.05；**表示p<0.01。XAV939是tankryase酶抑制剂，可以间接抑制Wnt本文档来自技高网...
【技术保护点】
中药单体shizukaol D在制备药剂中的应用，其特征在于，所述的药剂是Wnt通路抑制剂。
【技术特征摘要】
1.中药单体shizukaolD在制备药剂中的应用，其特征在于，所述的药剂是Wnt通路抑制剂。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药剂的有效浓度范围是0-25微摩尔/升且不包含0或者25微摩尔/升。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药剂的有效浓度范围是0-12.5微摩尔/升。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药剂的有效浓度不大于6.25微摩尔/升。5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的Wnt通路是经典Wnt通路。6.如权...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐丽莎，朱波，杨鲜梅，祁美雁，余龙，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31
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