ShizukaolD在制备抗肿瘤靶点药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于医药和基因工程领域，涉及中药单体shizukaol D在制备药剂中的应用及其应用方法。本发明专利技术提供了中药单体shizukaol D在制备抗肿瘤靶点药物中应用，尤其是在制备Wnt通路抑制剂中的应用。本发明专利技术还提供了相应的测试Wnt通路活性的试剂盒、抑制体外肿瘤细胞Wnt信号通路的方法及种抑制Wnt通路的药物组合物。本发明专利技术为Wnt通路抑制剂提供了新的先导化合物，为抑制细胞的Wnt通路提供新的方法和途径，为中药单体shizukaol D提供新的应用，提升了其植物来源——银线草的药用价值。

Application of ShizukaolD in the preparation of antitumor target drugs

The invention belongs to the field of medicine and genetic engineering, relates to the traditional Chinese medicine monomer shizukaol D in preparing medicament application and application method thereof. The invention provides a traditional Chinese medicine monomer shizukaol D used in the preparation of antitumor drug target, especially the application of Wnt inhibitor in the system. The invention also provides a kit for testing the activity of the Wnt pathway, a method for inhibiting the Wnt signaling pathway of an in vitro tumor cell, and a pharmaceutical composition for inhibiting the Wnt pathway. The present invention provides new lead compounds as inhibitors of the Wnt pathway provides a new approach to Wnt inhibitory cells, provide a new application for traditional Chinese medicine monomer shizukaol D, enhance the medicinal value of the plant source of silver grass.

【技术实现步骤摘要】
ShizukaolD在制备抗肿瘤靶点药物中的应用
本专利技术属于医药和基因工程领域，具体而言，本专利技术涉及中药单体shizukaolD在制备抗肿瘤靶点药物中的应用及其应用方法。
技术介绍
由于生活习惯的改变和环境污染的加剧，世界各国癌症发病率在不断上升。中国从上世纪70年代至今，癌症发病率已翻倍。全国2010年新发恶性肿瘤病例逾三百万例,死亡病例近两百万。对于国家而言，肿瘤的预防和治疗消耗了大量的人力、物力和财力。对于个人而言，肿瘤的危害在于：阻塞和压迫，如食管癌癌肿可以堵塞食管，造成病人吞咽困难；破坏所在器官的结构和功能；侵袭破坏邻近器官；坏死、出血、感染；疼痛；发热；恶病质，即指机体严重消瘦、无力、贫血和全身衰竭的状态，它是癌症病人死亡的重要原因。开发全新来源的抗癌药物成为国内外药物学界的重要课题。全球约480亿美元的抗癌药物中，植物来源的抗癌药约占其中40％。与化学合成的抗癌药相比，植物抗癌药的毒副作用要小得多，植物抗癌药现已成为抗癌新药的重要来源。已经有一些中草药成分成功用于治疗肿瘤的实例。青蒿素的衍生物青蒿酯钠可诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡。紫杉醇是从紫衫中提取的天然抗癌药物，其衍生物多西紫杉醇对肿瘤细胞的抑制过程中，存在氧化应急以及氧化—抗氧化失衡。苦参碱是从苦参中提取的生物碱，苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制肝癌细胞增殖,促进其凋亡,并呈时间与剂量依赖性，其机制可能与下调stat3、stat5的基因表达,抑制细胞信号转导通路有关。随着对天然产物抗肿瘤活性的研究报道增加，中草药中具有抑制肿瘤细胞增殖的活性物质正逐步被解析。与传统的手术、放疗、化疗相比,中药具有多成分、多环节、多靶点效应的优势,可以通过作用于肿瘤的信号转导通路诱导肿瘤细胞的凋亡、减少肿瘤细胞的黏附、影响肿瘤血管生成。ShizukaolD最早由日本学者川端(Kawabata)从金粟兰科植物宽叶金粟兰(KawabataJ,MizutaniJ.DimericsesquiterpenoidestersfromChloranthusserratus.[J].Phytochemistry,1992,31(4):1293-6.)和银线草(KawabataJ.SesquiterpenedimersfromChloranthusjaponicus[J].Phytochemistry,1995,39,121-7.)中提取。金粟兰科植物主要分布在我国北方和日本、朝鲜等地(YimNH,HwangEI,YunBS,etal.SesquiterpenefurancompoundCJ-01,anovelchitinsynthase2inhibitorfromChloranthusjaponicusSIEB[J].BiolPharmBull,2008,31(5):1041-4.),家喻户晓的代表性植物就是银线草。银线草全株供药用，能祛湿散寒、活血止痛、散瘀解毒，主治风寒咳嗽、风湿痛、闭经，外用治跌打损伤、瘀血肿痛、毒蛇咬伤等。ShizukaolD是一种存在于金粟兰科植物的、典型的倍半萜二聚体；常温下为淡黄色粉末，极性溶液中溶解性差，可溶于DMSO、氯仿等有机溶剂，避光保存；分子式：C33H38O9；分子量：578.65；CAS号：142279-42-3。其活性报道较少。2009年10月13日申请的中国专利技术专利《乌药烷型二聚倍半萜类化合物,其制备方法及其在制药中的应用》(申请号为200910095051.6)中描述：shizukaolD明显增加L6细胞葡萄糖的消耗量，提示能够促进胰岛素的作用，促进糖的摄取和转运。Zhang等曾在2012年报道其抗炎症方面的作用(ZhangM，IMunekazu，WangJun-song，etal.TerpenoidsfromChloranthusserratusandTheirAnti-inflammatoryActivities[J].JournalofNaturalProducts,2012,75(4):694-8.)。直到2014年1月，Hu等在《PlosOne》杂志上发表了shizukaolD通过诱导线粒体功能失调抑制肝细胞中脂内容物的报道(HuR,YanH,HaoX,etal.ShizukaolDisolatedfromChloranthusjaponicasinhibitsAMPK-dependentlipidcontentinhepaticcellsbyinducingmitochondrialdysfunction[J].PLoSOne,2013,8(8):e73527.)。但是，到目前为止，尚无关于shizukaolD靶向抑制细胞信号通路方面的报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供shizukaolD的新用途。Shizukaol是一种存在于金粟兰科植物的、典型的倍半萜二聚体，其功能活性报道集中在抗炎症方面。本专利技术提供了shizukaolD在制备抗肿瘤靶点药物中的应用。近年来，肿瘤信号通路成为新的研究热点。细胞通路的激活或抑制与肿瘤的发生、发展、消退等存在着紧密的联系。肝癌的发生与发展是癌细胞增殖旺盛与凋亡减少的结果,其中,信号通路在其中扮演着重要角色。众所周知的鸡尾酒法中的三氧化二砷，能够通过活化JNK信号转导通路激活caspase3，启动HepG2的凋亡。据统计，在三分之一的肝细胞癌患者中Wnt通路呈激活状态。很多关于肿瘤的研究都证实，阻断wnt经典信号通路可以诱导相关病变细胞凋亡。例如，IL-α2b可以抑制癌前病变的肝组织中的wnt/β-catenin信号通路，并能促进细胞发生凋亡。Wnt信号通路抑制参与了姜黄素诱导的人端粒逆转酶引起的肝星状细胞凋亡。Wnt通路主要分为经典Wnt通路和非经典Wnt通路。前者的研究较多。经典Wnt通路即wnt/β-catenin通路，通过β-catenin介导。正常体细胞中β-catenin大部分结合在细胞膜上,少部分与Axin(轴蛋白)、APC(adenomatouspolyposiscoli，腺瘤性结肠息肉病蛋白)、CK(酪蛋白激酶)、GSK-3β(糖原合成酶-3β)结合形成降解复合物，并被其磷酸化，然后通过泛素蛋白酶体途径迅速降解，从而维持胞浆内游离β-catenin的低水平。当胞外wnt蛋白与FZDs(卷曲蛋白)受体以及LRP5/6(低密度脂蛋白相关受体)复合物结合后，激活了细胞内的Dsh(散乱蛋白)、抑制GSK-3β的活性,β-catenin从复合物中解离，其降解受到抑制并在细胞质中积累。β-catenin积累到一定程度进入细胞核，并与核内转录因子Tcf/Lef结合形成转录复合物，激活相关目的基因的表达，wnt通路被激活并引起细胞生物学活性的变化。第二代测序(NGS，Nextgenerationsequencing)表明，Wnt通路是一个重要的致癌因素，Wnt信号通路失调则可能导致肿瘤的发生、发展。shizukaolD能够降低Wnt通路信号，抑制β-catenin的表达，这可能是导致肿瘤细胞增殖受到抑制的重要因素。一方面，本专利技术提供了一种抑制体外肿瘤细胞Wnt信号通路的方法，在细胞培养液中加入shizukaolD；其中，shizukaolD的终本文档来自技高网...

【技术保护点】
中药单体shizukaol D在制备抗肿瘤靶点药物中的应用，其特征在于，所述的药剂是Wnt通路抑制剂。

【技术特征摘要】
1.中药单体shizukaolD在制备抗肿瘤靶点药物中的应用，其特征在于，所述的药剂是Wnt通路抑制剂。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的细胞是肝源细胞或者肾源细胞。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的抑制Wnt信号通路是靶向抑制β-catenin的表达水平。4.一种抑制体外肿瘤细胞Wnt信号通路的方法，其特征在于，在细胞培养液中加入shizukaolD；其中，shizukaolD的终浓度不超过25微摩尔/升。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的shizukaolD的...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐丽莎，朱波，杨鲜梅，祁美雁，余龙，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31