共表达疫苗和共刺激分子的载体制造技术

本文提供了尤其是从单一载体共表达分泌型疫苗蛋白(如gp96‑Ig)和T细胞共刺激分子的组合物和方法。还提供了使用gp96‑Ig接种和T细胞共刺激治疗受试者的临床病状(例如癌症)的材料和方法。

Vectors expressing vaccines and costimulatory molecules are co expressed

This paper provides especially from a single vector co expressing secreted protein vaccine (such as gp96 Ig) compositions and methods of costimulatorymolecules and T cells. Also provides clinical symptoms using the gp96 Ig inoculation and T cell co stimulation in the treatment of subjects (e.g. cancer) materials and methods.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】共表达疫苗和共刺激分子的载体相关申请本申请要求2015年2月6日提交的美国临时专利申请号62/113,153和2015年6月12日提交的62/174,942的优先权，两个申请的全部内容据此以引用的方式并入本文。
本文件尤其涉及使用接种和T细胞共刺激来治疗受试者的临床病状的材料和方法，包括用于从单一载体共表达疫苗(例如gp96-Ig)和T细胞共刺激分子的材料和方法。以电子方式提交的文本文件的说明随附以电子方式提交的文本文件的内容以引用的方式整体并入本文：序列表的计算机可读格式拷贝(文件名：HTB-021PC-SequenceListing.txt；记录日期：2016年2月4日；文件大小：73KB)。背景癌症是一种由长期的遗传不稳定引起的疾病，它延长了正常细胞的寿命。标记此时期开始的触发事件是在细胞类型之间的变异，但通常是获得肿瘤抑制基因如p53或Rb中的突变、原癌基因如KRAS或myc中的突变、或者细胞感染了致癌病毒如HPV16或EBV。不管来源如何，获得使它们能逃避正常生长控制或细胞死亡途径的基因突变的细胞变得更可能获得额外的突变。一旦细胞已获得“足够的”突变，通常认为是至少六个，其便不再对将阻止其生长或触发细胞凋亡的内部或外部信号有反应。由于肿瘤是由宿主细胞产生，所以人体的免疫系统最初对这些细胞耐受。致瘤突变的获得可能或可能不造成含有足够非自身以变得有免疫原性的表位的突变蛋白的产生。如果细胞获得免疫原性突变，那么其可被宿主免疫系统搜寻出并破坏，这是被称为免疫监视的过程(Smyth等人,AdvImmunol2006,90:1-50)。鼠科研究提供了关于免疫监视假说的支持(Dunn等人,NatImmunol2002,3:991-998；Shankaran等人,Nature2001,410:1107-1111；及Dunn等人,AnnuRevImmunol2004,22:329-360)，并且还提示除所谓的适应性免疫应答之外先天性免疫应答也可促进免疫原性肿瘤的排斥(Unni等人,ProcNatlAcadSciUSA2008,105:1686-1691；Taieb等人,NatMed2006,12:214-219；及Raulet和Guerra,NatRevImmunol2009,9:568-580)。先天性应答可通过诱导NK活化信号的表达如NKG2D配体表达或在由诱变或病毒过程引起的DNA损伤之后被诱发。获得免疫原性突变的一些细胞还获得参与正常免疫调节系统的能力，其减弱了抗自身免疫应答(Rabinovich等人,AnnuRevImmunol2007,25:267-296)。对驱使活化宿主调节机制的途径的了解非常贫乏。其它细胞也可获得许多致癌突变，而不曾产生免疫原性肽，所述肽导致宿主免疫系统的活化。因此，在其转化期间产生免疫原性肽的肿瘤细胞必须连续逃避抗肿瘤免疫应答以存活下来，而变得转化但不活化免疫系统的肿瘤则不能依靠这种免疫调节机制来存活。专利技术概要有可能包括一种或多种检查点抑制剂、一种或多种疫苗及一种或多种T细胞共刺激分子的组合或子组合的组合疗法可扩大可受益于免疫疗法的癌症患者的基础。疫苗可通过增加肿瘤抗原特异性CD8+T细胞的出现率以及由那些CD8+T细胞识别的肿瘤抗原的数量来促进此应答。T细胞共刺激分子可通过进一步提高肿瘤抗原特异性T细胞的出现率和/或增强其活化并且还通过增加CD8+T细胞对肿瘤杀伤效应分子的表达来增强应答。当与检查点抑制剂组合使用时，有可能产生广泛的高度活化的CD8+T细胞，其将能浸润肿瘤并且一旦发生浸润将不会受到各种检查点途径的抑制。然而，对组合疗法成功的障碍在于它们传统上需要施用至少三种不同的药物产品(疫苗、T细胞共刺激剂及检查点抑制剂)，其各自具有显著的成本且在一些情况下有毒性。本文件至少部分基于以下发现：接种(例如gp96-Ig接种)和T细胞共刺激与OX40、ICOS、4-1BB、TNFRSF25、CD40、CD27和/或GITR等的一种或多种激动剂的组合提供协同的抗肿瘤益处。临床前模型评估了gp96-Ig疫苗与靶向OX40、ICOS、4-1BB及TNFRSF25的激动性抗体组合的独立组合物，并且展现对机理及抗肿瘤互补性的可变作用。本文所述的材料和方法的有利之处尤其在于它们提供单一组合物，所述组合物可实现例如gp96-Ig的接种与T细胞共刺激，而无需独立产品。这些材料和方法通过生成单一疫苗蛋白(例如gp96-Ig)表达载体实现此目标，所述表达载体经遗传修饰以同时表达共刺激分子，包括但不限于融合蛋白，如ICOSL-Ig、4-1BBL-Ig、TL1A-Ig、OX40L-Ig、CD40L-Ig、CD70-Ig或GITRL-Ig，以便提供T细胞共刺激。所述载体及其使用方法可在无需额外抗体疗法的情况下提供共刺激益处以增强抗原特异性CD8+T细胞的活化。因此，组合免疫疗法可通过载体再工程化以使得不需要疫苗/抗体/融合蛋白方案来实现，这可降低疗法的成本及全身毒性的风险。一方面，本文件特征在于一种表达载体，其含有编码分泌型疫苗蛋白的第一核苷酸序列和编码T细胞共刺激融合蛋白的第二核苷酸序列，其中所述T细胞共刺激融合蛋白当向受试者施用时增加抗原特异性T细胞的活化。在一些实施方案中，本文件特征在于一种表达载体，其含有编码分泌型gp96-Ig融合蛋白的第一核苷酸序列和编码T细胞共刺激融合蛋白的第二核苷酸序列，其中所述T细胞共刺激融合蛋白当向受试者施用时增强抗原特异性T细胞的活化。表达载体可为哺乳动物表达载体。在一个实施方案中，分泌型gp96-Ig融合蛋白可缺乏gp96KDEL(SEQIDNO:3)序列。gp96-Ig融合蛋白中的Ig标签可包括人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA或IgE的Fc区。T细胞共刺激融合蛋白可为与OX40结合的OX40L-Ig或其一部分、与ICOS结合的ICOSL-Ig或其一部分、与4-1BBR结合的4-1BBL-Ig或其一部分、与TNFRSF25结合的TL1A-Ig或其一部分、与GITR结合的GITRL-Ig或其一部分、与CD40结合的CD40-Ig或其一部分、或者与CD27结合的CD70-Ig或其一部分等。T细胞共刺激融合蛋白中的Ig标签可包括人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA或IgE的Fc区。表达载体可含有DNA或RNA。另一方面，本文件特征在于一种含有表达载体的组合物，所述表达载体包含编码分泌型疫苗蛋白(如分泌型gp96-Ig融合蛋白)的第一核苷酸序列和编码T细胞共刺激融合蛋白的第二核苷酸序列，其中所述T细胞共刺激融合蛋白当向受试者施用时增强抗原特异性T细胞的活化。载体可为基于DNA的哺乳动物表达载体。在一个实施方案中，分泌型gp96-Ig融合蛋白可缺乏gp96KDEL(SEQIDNO:3)序列。gp96-Ig融合蛋白中的Ig标签可含有人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA或IgE的Fc区。T细胞共刺激融合蛋白可为与OX40结合的OX40L-Ig或其一部分、与ICOS结合的ICOSL-Ig或其一部分、与4-1BBR结合的4-1BBL-Ig或其一部分、与TNFRSF25结合的TL1A-Ig或其一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表达载体，其包含编码分泌型疫苗蛋白的第一核苷酸序列和编码T细胞共刺激融合蛋白的第二核苷酸序列，其中所述T细胞共刺激融合蛋白当向受试者施用时增强抗原特异性T细胞的活化。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.06 US 62/113,153;2015.06.12 US 62/174,9421.一种表达载体，其包含编码分泌型疫苗蛋白的第一核苷酸序列和编码T细胞共刺激融合蛋白的第二核苷酸序列，其中所述T细胞共刺激融合蛋白当向受试者施用时增强抗原特异性T细胞的活化。2.如权利要求1所述的表达载体，其中所述载体为哺乳动物表达载体。3.如权利要求1所述的表达载体，其中所述疫苗蛋白为分泌型gp96-Ig融合蛋白，其任选地缺乏gp96KDEL(SEQIDNO:3)序列。4.如权利要求3所述的表达载体，其中所述gp96-Ig融合蛋白中的Ig标签包含人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA或IgE的Fc区。5.如权利要求1所述的表达载体，其中所述T细胞共刺激融合蛋白为与OX40结合的OX40L-Ig或其一部分。6.如权利要求1所述的表达载体，其中所述T细胞共刺激融合蛋白为与ICOS结合的ICOSL-Ig或其一部分。7.如权利要求1所述的表达载体，其中所述T细胞共刺激融合蛋白为与4-1BBR结合的4-1BBL-Ig或其一部分。8.如权利要求1所述的表达载体，其中所述T细胞共刺激融合蛋白为与TNFRSF25结合的TL1A-Ig或其一部分。9.如权利要求1所述的表达载体，其中所述T细胞共刺激融合蛋白为与GITR结合的GITRL-Ig或其一部分。10.如权利要求1所述的表达载体，其中所述T细胞共刺激融合蛋白为与CD40结合的CD40L-Ig或其一部分。11.如权利要求1所述的表达载体，其中所述T细胞共刺激融合蛋白为与CD27结合的CD70-Ig或其一部分。12.如权利要求5-11中任一项所述的表达载体，其中在所述T细胞共刺激融合蛋白中的Ig标签包含人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA或IgE的Fc区。13.如权利要求1所述的表达载体，其中所述表达载体包括DNA。14.如权利要求1所述的表达载体，其中所述表达载体包括RNA。15.一种包含表达载体的组合物，所述表达载体包含编码分泌型疫苗蛋白的第一核苷酸序列和编码T细胞共刺激融合蛋白的第二核苷酸序列，其中所述T细胞共刺激融合蛋白当向受试者施用时增强抗原特异性T细胞的活化。16.如权利要求15所述的组合物，其中所述载体为基于DNA的哺乳动物表达载体。17.如权利要求15所述的组合物，其中所述分泌型疫苗蛋白为分泌型gp96-Ig融合蛋白，其任选地缺乏gp96KDEL(SEQIDNO:3)序列。18.如权利要求17所述的的组合物，其中在所述gp96-Ig融合蛋白中的Ig标签包含人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA或IgE的Fc区。19.如权利要求15所述的组合物，其中所述T细胞共刺激融合蛋白为与OX40结合的OX40L-Ig或其一部分。20.如权利要求15所述的组合物，其中所述T细胞共刺激融合蛋白为与ICOS结合的ICOSL-I...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·施赖伯，G·弗罗姆，
申请(专利权)人：热生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US