检测人DPP‑4的测定法制造技术

本公开内容提供稳健的、灵敏的和特异的用于检测和测量从人类患者获得的样品中的DPP‑4水平的测定法。本公开内容进一步提供识别人DPP‑4的新型抗DPP‑4单克隆抗体，和包含一种或多种这些抗体的测定试剂盒。

The detection method for the determination of 4 DPP

This disclosure provides a robust, sensitive and specific for the detection and measurement of samples obtained from human patients in DPP were measured in 4 levels. A new anti DPP the disclosure further provides an identification of human DPP 4 4 monoclonal antibody, and contains one or more of these antibody test kit.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测人DPP-4的测定法对电子提交的序列表的引用与本申请一起提交的以ASCII文本文件(名称DPP4-100P1_sequence_listing.txt；大小：26,741字节；和创建日期：2014年12月15日)电子提交的序列表的内容通过引用以其整体结合到本文中。专利技术背景二肽基肽酶IV(DPP-4)(也称为CD26或腺苷脱氨酶结合蛋白)为脯氨酰寡肽酶家族中的II型跨膜丝氨酸蛋白酶，其催化来自在第2位具有脯氨酸或丙氨酸的多肽的N端的N端二肽的水解(酶学委员会(EC)号3.4.14.5(BRENDA|IUBMB))。许多趋化因子和肽激素，包括GLP-1、GLP-2、胃抑制性多肽(GIP)、垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)和神经肽Y被DPP-4切割和灭活。参见，例如，YaronA.,NaiderF.Crit.Rev.Biochem.Mol.Biol.28,31–81(1993);MentleinR.RegulPept.85(1):9-24(1999)。因此，DPP-4通过其抑制趋化因子和肽激素的能力调节葡萄糖代谢、食欲和疼痛调节。除了作为调节性蛋白酶的作用，DPP-4还结合若干分子并诱导胞内信号转导。具体地，DPP-4通过结合至包括腺苷脱氨酶(ADA)在内的若干配体诱导T细胞共刺激/增殖和淋巴细胞-上皮细胞粘附。参见，例如，Gines等人,Biochem.J.361:203-209(2002)。还已经报道DPP-4增强T-细胞成熟和迁移、细胞因子分泌、抗体产生、B细胞的免疫球蛋白同种型转换，和细胞毒性T细胞活化。Ohnuma等人FrontBiosci.13:2299-310(2008)。DPP-4为110kDa的糖蛋白，由位于染色体2(2q24.3)上的基因编码(Abbott等人Immunogenetics.40(5):331-8(1994))，作为由776个氨基酸组成的同型二聚体起作用。每一单体由两个结构域组成：α/β水解酶结构域和8-片β-螺旋桨结构域。DPP-4在几种组织中广泛表达，包括肝、肺、肾、上皮细胞和淋巴细胞。Heike等人ClinExpImmunol.74:431–434(1988)；Gorrell等人ScandJImmunol.54:249–264(2001)。当T细胞活化时，DPP-4表达在静止T细胞上上调。还已经观察到DPP-4的可溶、活性形式，包含大部分的胞外结构域(残基39-766)，其包括关键催化结构域。IkushimaH等人CellImmunol.215(1):106-10(2002)。DPP-4基因敲除小鼠显示改善的对口服葡萄糖负荷的葡萄糖耐受性、增加的胰岛素和GLP-1活性、对饮食诱导的肥胖的抗性和高脂饮食之后增加的胰岛素敏感性。Marguet等人,ProcNatlAcadSciUSA.97(12):6874-9(2000);Conarello等人,ProcNatlAcadSciUSA.100(11):6825-30(2003)。除了其在代谢病症和血糖控制中的作用，DPP-4还牵涉控制免疫功能、细胞迁移、病毒进入细胞、癌症转移和炎症。参见，例如，Aytac等人,CurrDrugTargetsImmuneEndocrMetabolDisord4(1):11-8(2004)。最近，DPP-4表达经报道高度受白细胞介素-13(IL-13)诱导。参见，例如，Zhang等人,AmJRespirCritCareMed189:A4875(2014);Shiobara等人,AmJRespirCritCareMed189:A4239(2014);Brightling等人,AmJRespirCritCareMed189:A6670(2014);2014年1月27日提交的美国临时申请号61/931,878，和2014年5月9日提交的美国临时申请号61/990,932，对于所有目的其各自通过引用以其整体结合到本文中。IL-13为114个氨基酸的细胞因子，未修饰的分子量大约12kDa。McKenzie,A.N.等人JImmunol,1993.150:5436-44;Minty,A.等人Nature,1993.362:248-50。IL-13水平已经显示在许多疾病或病症中与疾病严重性相关联，包括，但不限于，哮喘、慢性阻塞性肺病、特发性肺纤维化和特应性皮炎。例如，在过敏性炎症的哮喘和啮齿动物模型中，提高的IL-13水平已经报道与疾病严重性相关联(参见美国专利申请公开号2012-0052060，2012年3月1日出版，并通过引用以其整体结合到本文中)。慢性阻塞性肺病(COPD)包括具有不同程度慢性支气管炎、小气道疾病和肺气肿的患者群体，特征在于进行性不可逆肺功能下降，其对当前基于哮喘的疗法响应差。Zheng等人(JClinInvest,2000.106:1081-93)证明在小鼠肺中IL-13的过表达引起肺气肿、提高的粘液产生和炎症，反映人COPD的方面。因此迹象为IL-13在COPD的发病机制中发挥重要作用，特别是在具有哮喘样特征的患者中。IL-13也可在炎症性肠疾病的发病机制中发挥作用，并且已经与纤维化病况例如特发性肺纤维化(IPF)联系在一起。参见，例如，Jovani,M.,等人CurrDrugTargets.2013.12:1444-52;和Rafii,R.,等人JThoracDis.2013.1:48-73。特应性皮炎是一种常见的慢性炎症性皮肤病，其常常与其它特应性病症例如过敏性鼻炎和哮喘相关(Bieber,NewEnglandJournalofMedicine,2008,358:1483-1494)。IL-13mRNA的上调已经在亚急性和慢性特应性皮炎损伤中观察到(Tazawa等人,Arch.Dermatol.Res.,2004,295:459-464;Purwar等人,J.Invest.Derm.,2006,126,1043–1051;Oh等人,JImmunol.,2011,186:7232-42)。提高的DPP-4水平已经在哮喘、COPD和AD患者中观察到(参见，例如，美国临时申请号61/931,878，2014年1月27日提交；和美国临时申请号61/990,932，2014年5月9日提交，各自通过引用以其整体结合到本文中)。另外，在涉及哮喘患者的2B期临床研究中，在用IL-13抗体拮抗剂(tralokinumab)治疗的患者中高血清DPP-4水平预测提高的响应率，将DPP-4鉴定为IL-13介导的疾病或病症，包括IL-13介导的肺疾病或病症(例如，哮喘、IPF或COPD)或IL-13介导的慢性炎症性皮肤疾病或病症(例如，特应性皮炎)的预测性生物标志。参见Brightling等人,AmJRespirCritCareMed189:A6670(2014)；和美国临时申请号61/931,878，2014年1月27日提交；和美国临时申请号61/990,932，2014年5月9日提交，其各自通过引用以其整体结合到本文中。因此，尽管已知增加的DPP-4水平与某些IL-13介导的疾病或病症相关联并且已知DPP-4血清水平预测患者对抗IL-13疗法的响应，但仍存在对测量患者(包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，其竞争性抑制从在保藏号PTA‑121870下保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)的杂交瘤产生的小鼠单克隆抗体m3B7.6、从在保藏号PTA‑121871下保藏在ATCC的杂交瘤产生的小鼠单克隆抗体m5B7.7、从在保藏号PTA‑121872下保藏在ATCC的杂交瘤产生的大鼠单克隆抗体R11A2.15或从在保藏号PTA‑121873下保藏在ATCC的杂交瘤产生的大鼠单克隆抗体R11A9.11的结合和/或结合与其相同的二肽基肽酶‑4 (DPP‑4)表位。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.09 US 62/1016971.一种分离抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，其竞争性抑制从在保藏号PTA-121870下保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)的杂交瘤产生的小鼠单克隆抗体m3B7.6、从在保藏号PTA-121871下保藏在ATCC的杂交瘤产生的小鼠单克隆抗体m5B7.7、从在保藏号PTA-121872下保藏在ATCC的杂交瘤产生的大鼠单克隆抗体R11A2.15或从在保藏号PTA-121873下保藏在ATCC的杂交瘤产生的大鼠单克隆抗体R11A9.11的结合和/或结合与其相同的二肽基肽酶-4(DPP-4)表位。2.一种分离抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物，其结合二肽基肽酶-4(DPP-4)，包含具有三个重链互补决定区(CDRs)VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的重链可变结构域(VH)和具有三个轻链CDRsVLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的轻链可变结构域(VL)，其中所述分离抗体或其片段、变体或衍生物的CDRs与从在保藏号PTA-121870下保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)的杂交瘤产生的小鼠单克隆抗体m3B7.6、从在保藏号PTA-121871下保藏在ATCC的杂交瘤产生的小鼠单克隆抗体m5B7.7、从在保藏号PTA-121872下保藏在ATCC的杂交瘤产生的大鼠单克隆抗体R11A2.15或从在保藏号PTA-121873下保藏在ATCC的杂交瘤产生的大鼠单克隆抗体R11A9.11的CDRs相同。3.权利要求2的分离抗体或其片段、变体或衍生物，包含与从在保藏号PTA-121870下保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)的杂交瘤产生的小鼠单克隆抗体m3B7.6、从在保藏号PTA-121871下保藏在ATCC的杂交瘤产生的小鼠单克隆抗体m5B7.7、从在保藏号PTA-121872下保藏在ATCC的杂交瘤产生的大鼠单克隆抗体R11A2.15或从在保藏号PTA-121873下保藏在ATCC的杂交瘤产生的大鼠单克隆抗体R11A9.11的VH和VL相同的VH和VL。4.权利要求1-3中任一项的分离抗体或其片段、变体或衍生物，其中所述抗体片段为Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段或单链抗体分子。5.一种杂交瘤，其选自在保藏号121870下保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)的杂交瘤、在保藏号121871下保藏在ATCC的杂交瘤、在保藏号121872下保藏在ATCC的杂交瘤、在保藏号121873下保藏在ATCC的杂交瘤和其组合。6.一种产抗体的细胞培养物，包含：在保藏号121870下保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)的杂交瘤、在保藏号121871下保藏在ATCC的杂交瘤、在保藏号121872下保藏在ATCC的杂交瘤、在保藏号121873下保藏在ATCC的杂交瘤或其组合。7.由权利要求5的杂交瘤或权利要求6的产抗体的细胞培养物产生的分离抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物。8.权利要求1-4或7中任一项的抗体或其片段、变体或衍生物，或由权利要求5的杂交瘤或权利要求6的细胞培养物产生的抗体或其片段、变体或衍生物，其中所述抗体或其片段、变体或衍生物进一步包含与其融合的异源多肽。9.权利要求8的抗体或其片段、变体或衍生物，其中所述异源多肽为稳定多肽、标签、标记或其组合。10.权利要求1-4或7中任一项的抗体或其片段、变体或衍生物，或由权利要求5的杂交瘤或权利要求6的细胞培养物产生的抗体或其片段，或其片段、变体或衍生物，其中所述抗体或其片段、变体或衍生物与异源部分缀合。11.权利要求10的抗体或其片段、变体或衍生物，其中所述异源部分包含以下一种或多种：肽、蛋白、酶、脂质、异源抗体或其片段、可检测标记或聚乙二醇(PEG)。12.权利要求11的抗体或其片段、变体或衍生物，其中所述异源部分包括生物素或钌螯合物。13.一种组合物，包含权利要求1-4或7-12中任一项的抗体或其片段、变体或衍生物，或由权利要求5的杂交瘤或权利要求6的细胞培养物产生的抗体，或其片段、变体或衍生物。14.一种组合物，包含至少两种权利要求1-4或7-12中任一项的抗体或其片段，或由权利要求5的杂交瘤或权利要求6的细胞培养物产生的抗体或其片段，或其片段、变体或衍生物的组合。15.一种分离多核苷酸，包含编码权利要求1-4或7-12中任一项的抗体或其亚基、片段、变体或衍生物，或由权利要求5的杂交瘤或权利要求6的细胞培养物产生的抗体或其片段，或其亚基、片段、变体或衍生物的核酸分子。16.一种组合物，包含两个或更多个编码权利要求1-4或7-12中任一项的抗体或其片段、变体或衍生物，或由权利要求5的杂交瘤或权利要求6的细胞培养物产生的抗体或其片段，或其片段、变体或衍生物的核酸分子。17.权利要求16的组合物，其中所述两个或更多个核酸分子位于同一载体内。18.包含权利要求15的分离多核苷酸或权利要求16或17中任一项的两个或更多个核酸分子的载体。19.权利要求16的组合物，其中所述两个或更多个核酸分子位于至少两个单独的载体中。20.权利要求19的载体。21.包含权利要求18的载体或权利要求20的载体的分离的宿主细胞。22.制备权利要求1-4或7-12中任一项的抗DPP-4抗体或其亚基、片段、变体或衍生物，或由权利要求5的杂交瘤或权利要求6的细胞培养物产生的抗体或其片段，或其亚基、片段、变体或衍生物的方法，包括(a)培养权利要求21的宿主细胞，和(b)回收抗体、其亚基、片段或衍生物。23.用于测量样品中的二肽基肽酶-4(DPP-4)水平的试剂盒，包含权利要求1-4或7-12中任一项的抗体或其片段、变体或衍生物，或由权利要求5的杂交瘤或权利要求6的细胞培养物产生的抗体，或其片段、变体或衍生物。24.用于测量样品中的二肽基肽酶-4(DPP-4)水平的试剂盒，包含至少两种权利要求1-4或7-12中任一项的抗体或其片段、变体或衍生物，或由权利要求5的杂交瘤或权利要求6的细胞培养物产生的抗体，或其片段、变体或衍生物。25.权利要求23或权利要求24的试剂盒，进一步包含固体支持物和检测试剂。26.权利要求23-25中任一项的试剂盒，包含捕获抗体或其片段、变体或衍生物和检测抗体或其片段、变体或衍生物。27.权利要求26的试剂盒，其中：(a)捕获抗体为从在保藏号PTA-121870下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的小鼠单克隆抗体m3B7.6或其抗原结合片段、变体或衍生物，并且检测抗体为从在保藏号PTA-121872下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的大鼠单克隆抗体R11A2.15或其抗原结合片段、变体或衍生物；(b)捕获抗体为从在保藏号PTA-121870下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的小鼠单克隆抗体m3B7.6或其抗原结合片段、变体或衍生物，并且检测抗体为从在保藏号PTA-121873下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的大鼠单克隆抗体R11A9.11或其抗原结合片段、变体或衍生物；(c)捕获抗体为从在保藏号PTA-121871下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的小鼠单克隆抗体m5B7.7或其抗原结合片段、变体或衍生物，并且检测抗体为从在保藏号PTA-121872下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的大鼠单克隆抗体R11A2.15或其抗原结合片段、变体或衍生物；(d)捕获抗体为从在保藏号PTA-121871下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的小鼠单克隆抗体m5B7.7或其抗原结合片段、变体或衍生物，并且检测抗体为从在保藏号PTA-121873下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的大鼠单克隆抗体R11A9.11或其抗原结合片段、变体或衍生物；(e)捕获抗体为从在保藏号PTA-121872下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的大鼠单克隆抗体R11A2.15或其抗原结合片段、变体或衍生物，并且检测抗体为从在保藏号PTA-121870下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的小鼠单克隆抗体m3B7.6或其抗原结合片段、变体或衍生物；(f)捕获抗体为从在保藏号PTA-121872下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的大鼠单克隆抗体R11A2.15或其抗原结合片段、变体或衍生物，并且检测抗体为从在保藏号PTA-121871下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的小鼠单克隆抗体m5B7.7或其抗原结合片段、变体或衍生物；(g)捕获抗体为从在保藏号PTA-121873下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的大鼠单克隆抗体R11A9.11或其抗原结合片段、变体或衍生物，并且检测抗体为从在保藏号PTA-121870下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的小鼠单克隆抗体m3B7.6或其抗原结合片段、变体或衍生物；或(h)捕获抗体为从在保藏号PTA-121873下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的大鼠单克隆抗体R11A9.11或其抗原结合片段、变体或衍生物，并且检测抗体为从在保藏号PTA-121871下保藏在ATCC的杂交瘤所产生的小鼠单克隆抗体m5B7.7或其抗原结合片段、变体或衍生物。28.权利要求23-27中任一项的试剂盒，其中所述检测抗体包含可检测标记。29.权利要求28的试剂盒，其中所述可检测标记为生物素并且检测试剂包括链霉亲和素-辣根过氧化物酶(HRP)缀合物和HRP的比色底物。30.权利要求29的试剂盒，其中所述可检测标记为钌螯合物。31.检测一个或多个样品中的二肽基肽酶-4(DPP-4)水平的方法，包括至少两种抗DPP-4抗体或其抗原结合片段，其中一种抗DPP-4抗体包括竞争性抑制从在保藏号PTA-121870下保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)的杂交瘤产生的小鼠单克隆抗体m3B7.6或从在保藏号PTA-121871下保藏在ATCC的杂交瘤产生的小鼠单克隆抗体m5B7.7的结合和/或结合与其相同DPP-4表位的分离抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物；并且其中一种抗DPP-4抗体包括竞争性抑制从在保藏号PTA-121872下保藏在ATCC的杂交瘤产生的大鼠单克隆抗体R11A2.15或从在保藏号PTA-121873下保藏在ATCC的杂交瘤产生的大鼠单克隆抗体R11A9.11的结合和/或结合与其相同DPP-4表位的分离抗体或其抗原结合片段、变体或衍生物。32.权利要求31的方法，其中两种或更多种抗DPP-4抗体的一种为包含具有三个重链互补决定区(CDRs)VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的重链可变结构域(VH)和具有三个轻链CDR...

【专利技术属性】
技术研发人员：张建瑛，X肖，P乔杜里，
申请(专利权)人：免疫医疗有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US