The present invention provides a method for rapidly extracting purified prealbumin (PA) from normal human plasma. Includes the following steps: 1) joined NaCl, in human plasma is fully dissolved; 2) with phenol solution, extraction with prealbumin (PA) group; 3) containing prealbumin (PA) component of the dialysis buffer exchange; 4) the rapid purification of PA AKTA chromatography moderate ion exchange; 5) AKTA Sephacryl series of molecular sieve chromatography purification chromatography PA; 6) PA AKTA system for fine purification of Superdex molecular sieve; the method of the invention can be well separated by PA, the prepared PA has very high purity and activity, more than 98% purity, was twice diluted 64 times and still have clear precipitation the reaction with the antiserum, and the operation is safe and convenient, short extraction period, suitable for industrial production.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物技术,具体涉及一种快速从正常人血浆中提取纯化前白蛋白(PA)的方法。
技术介绍
前白蛋白(Prealbumin,PA)是肝脏细胞合成的一种血清蛋白质,由4个相同的亚基组成,分子量约55KD,消光系数(E280nm)13.6,半衰期1.9天,电泳时迁移在白蛋白之前,故称为前白蛋白,主要生理功能是参与血清中甲状腺和视黄醇的运输,并具有胸腺激素活性,可通过促进篱淋巴细胞的成熟来增加机体免疫力。血清中前白蛋白的测定结果在临床上是反应肝功能和机体营养状态的重要指标,常见于营养不良者。由于前白蛋白半衰期很短,可以反映肝脏合成和分解代谢的轻微改变,其血清浓度降低的幅度与肝实质损害的程度密切相关,因此在临床上也常见于肝功能损伤、肝硬化、外伤及感染患者。临床上,把检测前白蛋白含量的变化作为衡量肝功能损害和营养不良的一种敏感可靠的指标。因此前白蛋白的提取纯化,在诊断中拥有良好的应用前景。对于前白蛋白已报道的分离纯化方法,大多是需要大量的血浆,步骤繁琐,操作复杂,难以用于生产用的常规操作和临床研究。EP0711786A2、US5310878A公开了一种纯化人血浆前白蛋白的方法,这一方法在特定环境下运用离子交换、免疫扩散、亲和层析、分子排阻层析以及多步缓冲液置换、浓缩等共计11步提取方法。然而,改方法步骤繁琐而复杂,从而目的蛋白得率降低,并且提取流程耗时较长,难于满足大规模工业化生产的需要。
技术实现思路
...
【技术保护点】
一种从正常人血浆中提取纯化前白蛋白PA的方法,其特征在于,该方法包括下列步骤:1)人血浆中加入NaCl,充分溶解;2)用酚溶液处理,萃取富集含前白蛋白PA的组分;3)含前白蛋白PA的组分透析置换缓冲液;4)GE AKTATM快速蛋白层析仪purifier100系统离子交换层析快速中度纯化PA;5)AKTA系统Sephacryl系列分子筛层析后续纯化PA;6)AKTA系统Superdex系列分子筛层析精细纯化PA,得到高纯度的PA。
【技术特征摘要】
1.一种从正常人血浆中提取纯化前白蛋白PA的方法,其特征在于,该方
法包括下列步骤:
1)人血浆中加入NaCl,充分溶解;
2)用酚溶液处理,萃取富集含前白蛋白PA的组分;
3)含前白蛋白PA的组分透析置换缓冲液;
4)GEAKTATM快速蛋白层析仪purifier100系统离子交换层析快速中度纯
化PA;
5)AKTA系统Sephacryl系列分子筛层析后续纯化PA;
6)AKTA系统Superdex系列分子筛层析精细纯化PA,得到高纯度的PA。
2.根据权利要求1所述的从正常人血浆中提取纯化前白蛋白PA的方法,其
特征在于,所述步骤1)加入NaCl的浓度为5%~30%w/v,优选10~25%,最
优选20%。
3.根据权利要求1所述的从正常人血浆中提取纯化前白蛋白PA的方法,其
特征在于,所述步骤2)中所使用的酚溶液选自甲酚、萘酚、氯酚、苯酚或石炭
酸;酚溶液的浓度范围为0.5%~10%w/v,优选2%~7%,最优选5.5%。
4.根据权利要求1所述的从正常人血浆中提取纯化前白蛋白PA的方法,其
特征在于,所述步骤2)中萃取PA的方法步骤为将待处理血浆在磁力搅拌器的
持续搅拌的条件下逐滴加入酚溶液,酚溶液的滴入速度为1~10毫升/分钟;血
浆与酚溶液混合物在4℃下静置0.5~2小时,用高速离心机离心取出沉淀,留上
清液,离心力为3000~12000g。
5.根据权利要求1所述的从正常人血浆中提取纯化前白蛋白PA的方法,其
特征在于,所述步骤3)中所使用的透析液为磷酸缓冲液,浓度范围10~100mM,
优选50mM;pH范围7-10,优选pH7.4。
6.根据权利要求1所述的从正常人血浆中提取纯化前白蛋白PA的方法,其
特征在于,所述步骤3)含前白蛋白PA的组分透析方法为将所述组分装入截留
分子量为8000~20000道尔顿的透析袋,浸入上述磷酸缓...
【专利技术属性】
技术研发人员:张海涛,张跃建,孙卫兵,高晓猛,
申请(专利权)人:上海复星医药集团股份有限公司,上海复星长征医学科学有限公司,
类型:发明
国别省市:上海;31
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