The invention relates to a method for the extraction and separation of protein, biological products technology, in particular relates to a preparation method of Human Albumin, followed by the steps of preparation, separation of component i + II + III and IV fractions, fraction V, purification; ultrafiltration, pasteurization, sterilization and filling, product verification the qualified products, labeling, packing box etc.. The invention adopts relatively mild pressure filtration separation method had no effect on the molecular structure of protein, to ensure that the preparation of high quality Human Albumin; greatly improve product yield, and can provide low aluminum content even containing aluminum ions to clinical Human Albumin, improve the quality of Human Albumin.
【技术实现步骤摘要】
一种人血白蛋白的制备方法
本专利技术涉及一种生物制品技术中蛋白质的分离、提取方法,具体涉及人血白蛋白的制备方法。
技术介绍
人血浆白蛋白(HPA)是有585个氨基酸组成的单链非糖蛋白,分子量为66KD,是血浆中含量最多的一种蛋白质,在人体内HPA主要生理功能是维持血液渗透压和携带血液中多种配基(包括脂肪酸、氨基酸、类固醇、金属离子及药物)与组织进行交换等生理功能,临床上主要用于手术输血和危重病人补液,治疗创伤休克、发烧、水肿、低白蛋白血症和红细胞过多症等,而且能增强人体抵抗能力,是重要的临床药物,也是迄今为止产量最大、用量最大的蛋白质药物。当前,HPA的临床使用量巨大,国际上年使用量约达600吨,我国临床使用量也已达100吨左右,并将随着农村生活水平和医疗条件的改善不断增加。现有技术中多采用低温乙醇工艺分离血浆蛋白,分离各组分多采用离心分离的方法,它存在如下缺点:一是离心剪切力对蛋白质的影响,离心分离转速每分钟一般在14000转以上,超高速剪切力对蛋白质沉淀颗粒造成的破坏,可能造成蛋白质立体结构的变化;二是离心分离采用超高速离心,一般达到14000转以上,机器产热需要接近—30℃以下的工艺冷媒在离心机转鼓周围提供冷环境,以降低转鼓超高速旋转产生的热量,防止蛋白受热而变性。同时离心操作间温度也要求—5℃以下,加上离心机本身的高耗电(3KW/台),整体上能耗特别大,而且要求低温的操作条件;三是离心操作由于单台离心机转鼓容量有限,需要多台设备同时开启,不易进行管道自动化,人员劳动强度大,安全风险高,制品“跑、冒、滴、漏”不可避免,此法产品收率一般在2.5g/ml ...
【技术保护点】
人血白蛋白的制备方法,包括以下步骤:第一步,分离组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ:将低温冰冻人血浆融化为液体状态,加入药用乙醇,至最终乙醇的体积达到人血浆和药用乙醇混合液总体积的22%,同时用1mol/L醋酸溶液调节人血浆和药用乙醇混合液的pH至6.4~6.6,并调节血浆蛋白质使其质量分数达到5.5%,调控温度至-5.5℃,搅拌2小时以上,静置4小时以上后,往混合液中按25g/L加入硅藻土或珍珠岩或二者组合作为助滤剂,采用加压过滤分离方法分离组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀;第二步,分离组分Ⅳ:将第一步收集的压滤上清液,用1mol/L醋酸溶液调节pH至6.2~6.4,加入药用乙醇至乙醇的体积达到第一步收集的压滤上清液和药用乙醇混合液总体积的40%,调控温度至-5℃,搅拌2小时以上,静置6小时以上,往混合液中按20g/L加入硅藻土或珍珠岩或二者组合作为助滤剂,采用加压过滤分离方法分离组分Ⅳ沉淀;第三步:分离组分Ⅴ:将第二步收集的压滤上清液,用pH为4.0的缓冲液调节pH至4.9~4.95,加入药用乙醇至上一步收集的压滤上清液和药用乙醇混合液总体积的40%,调控温度至-9℃,搅拌2小时以上,静置8小时以上,采用加压过滤分 ...
【技术特征摘要】
1.人血白蛋白的制备方法,包括以下步骤:第一步,分离组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ:将低温冰冻人血浆融化为液体状态,加入药用乙醇,至最终乙醇的体积达到人血浆和药用乙醇混合液总体积的22%,同时用1mol/L醋酸溶液调节人血浆和药用乙醇混合液的pH至6.4~6.6,并调节血浆蛋白质使其质量分数达到5.5%,调控温度至-5.5℃,搅拌2小时以上,静置4小时以上后,往混合液中按25g/L加入硅藻土或珍珠岩或二者组合作为助滤剂,采用加压过滤分离方法分离组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀;第二步,分离组分Ⅳ:将第一步收集的压滤上清液,用1mol/L醋酸溶液调节pH至6.2~6.4,加入药用乙醇至乙醇的体积达到第一步收集的压滤上清液和药用乙醇混合液总体积的40%,调控温度至-5℃,搅拌2小时以上,静置6小时以上,往混合液中按20g/L加入硅藻土或珍珠岩或二者组合作为助滤剂,采用加压过滤分离方法分离组分Ⅳ沉淀;第三步:分离组分Ⅴ:将第二步收集的压滤上清液,用pH为4.0的缓冲液调节pH至4.9~4.95,加入药用乙醇至上一步收集的压滤上清液和药用乙醇混合液总体积的40%,调控温度至-9℃,搅拌2小时以上,静置8小时以上,采用加压过滤分离方法分离组分Ⅴ沉淀;第四步:精制纯化,采用用pH4.0缓冲液调节组分Ⅴ沉淀的pH4.60~4.70,调控温度至-2~-3℃,静置4小时以上,深层过滤,收集过滤液进入下一工序;第五步,超滤:将...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐建生,田健生,王珍,
申请(专利权)人:武汉中原瑞德生物制品有限责任公司,
类型:发明
国别省市:湖北,42
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