本发明专利技术公开了用于提取人凝血酶原复合物的平衡液以及提取人凝血酶原复合物的方法。所述用于提取人凝血酶原复合物的平衡液包括：0.10mol/L～0.15mol/L的氯化钠；以及0.01mol/L～0.02mol/L的枸橼酸钠，所述平衡液的pH值为6.8～7.2。利用本发明专利技术的平衡液能够有效地提取人凝血酶原复合物，且收率及纯度较高，尤其是凝血因子Ⅶ(FⅦ)的收率较高。此外，得到的人凝血酶原复合物稳定性较好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物领域。具体地，本专利技术涉及提取人凝血酶原复合物的方法。
技术介绍
人凝血酶原复合物(prothrombin complex concentrate,PCC)主要包含凝血因子Ⅱ(Factor Ⅱ,FⅡ)、凝血因子Ⅶ(Factor Ⅶ,FⅦ)、凝血因子Ⅸ(Factor Ⅸ,FⅨ)、凝血因子Ⅹ(Factor Ⅹ,FⅩ)四种凝血因子，传统上其主要用于乙型血友病的治疗。随着临床应用的认可，PCC在止血方面的作用也日益受到临床医生的重视，而其止血作用的发挥很大程度上依赖于FⅦ。PCC中FⅦ含量越高，则止血效果越好。CN 101439047A公开了一种提高人凝血酶原复合物稳定性FVII得率的工艺方法，包括：新鲜低温冰冻健康人的血浆→澄清过滤→调整离子强度→凝胶吸附→洗涤、洗脱→超滤→S/D病毒灭活→凝胶吸附→洗涤、洗脱→超滤→除菌过滤、分装→冻干→干热灭活。然而，目前获得人凝血酶原复合物的方法仍有待改进。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出了用于提取人凝血酶原复合物的平衡液以及提取人凝血酶原复合物的方法。需要说明的是，本专利技术是基于专利技术人的下列发现而完成的：专利技术人发现，专利CN 101439047A中，如将1000L去冷沉淀血浆调节电导至2～12ms/cm，经计算大约需加入100～5600L注射用水。这种方法不仅增加了下游工作的麻烦，而且会对白蛋白、静注人免疫球蛋白等主产品的生产造成不利影响，同时由于分离容量大幅度增加而造成生产成本的增加。有鉴于此，专利技术人发现，在不调节血浆离子强度的前提下，通过提高平衡液的离子强度能够达到提高人凝血酶原复合物吸附率的目的，尤其是FⅦ。进一步地，通过提高氯化钠的浓度，以提高平衡液的离子强度。为此，在本专利技术的一个方面，本专利技术提出了一种用于提取人凝血酶原复合物的平衡液。根据本专利技术的实施例，所述平衡液包括：0.10mol/L～0.15mol/L的氯化钠；以及0.01mol/L～0.02mol/L的枸橼酸钠，所述平衡液的pH值为6.8～7.2。专利技术人发现，在不调节血浆离子强度的前提下，通过提高平衡液的离子强度能够达到提高人凝血酶原复合物吸附率的目的，尤其是FⅦ。进一步地，通过提高氯化钠的浓度，以提高平衡液的离子强度。由此，利用根据本专利技术实施例的用于提取人凝血酶原复合物的平衡液能够有效地提取人凝血酶原复合物，且收率及纯度较高，尤其是FⅦ的收率较高。此外，得到的人凝血酶原复合物稳定性较好。在本专利技术的另一方面，本专利技术提出了一种提取人凝血酶原复合物的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：(1)利用前面所描述的平衡液对凝胶进行平衡，得到第一湿胶；(2)将所述第一湿胶与血浆进行接触；(3)用第一洗涤液洗涤步骤(2)所得到的凝胶，弃滤液；以及(4)利用第一洗脱液洗脱步骤(3)所得到的凝胶，收集滤液，以便得到所述人凝血酶原复合物。专利技术人发现，利用前面所描述的平衡液对凝胶进行平衡，使得到的湿胶的离子强度接近平衡液的离子强度，由此，将湿胶与血浆接触后，凝胶能够充分吸附血浆中的人凝血酶原复合物，尤其是FⅦ。接着，利用洗涤液洗涤凝胶，以除去吸附力弱的杂蛋白以及黏附的其他成分。然后，利用洗脱液洗脱下人凝血酶原复合物。由此，利用根据本专利技术实施例的方法能够有效地提取人凝血酶原复合物，且收率及纯度较高，尤其是FⅦ的收率较高。此外，得到的人凝血酶原复合物稳定性较好。而且，该方法操作简便、成本低，适于工业化生产。根据本专利技术的实施例，所述第一洗涤液包括：0.15mol/L～0.20mol/L的氯化钠；以及0.01mol/L～0.02mol/L的枸橼酸钠，所述第一洗涤液的pH值为6.8～7.2。由此，利用该洗涤液能够充分除去吸附力弱的杂蛋白以及黏附的其他成分，使得到的人凝血酶原复合物纯度较高。根据本专利技术的实施例，所述第一洗脱液包括：1.5mol/L～2.0mol/L的氯化钠；以及0.02mol/L～0.03mol/L的枸橼酸钠，所述第一洗脱液的pH值为6.8～7.2。由此，利用该洗脱液能够充分洗脱下人凝血酶原复合物，尤其是FⅦ，使其收率较高。根据本专利技术的实施例，所述血浆为去冷沉淀血浆。由此，所得到的人凝血酶原复合物的稳定性较好。根据本专利技术的实施例，基于1L所述血浆，所述凝胶的用量为0.5g～2.5g，优选1.5g。由此，能够充分吸附血浆中的人凝血酶原复合物，尤其是FⅦ，使其收率较高。根据本专利技术的实施例，所述去冷沉淀血浆是通过采用下列方式获得的：用水将冰冻血浆进行化浆，得到浆液；将所述浆液在0℃～4℃下进行离心，收集上清液，以便得到所述去冷沉淀血浆。由此，利用根据本专利技术实施例的方法能够有效地提取人凝血酶原复合物，且收率及纯度较高，尤其是FⅦ的收率较高。根据本专利技术的实施例，步骤(2)进一步包括：(2-1)将所述第一湿胶与血浆在15℃～20℃下搅拌40～60min，优选在17℃下搅拌40min，得到混合液；以及(2-2)将所述混合液置于层析柱中，弃流出液，收集凝胶。由此，利用根据本专利技术实施例的方法能够有效地提取人凝血酶原复合物，且收率及纯度较高，尤其是FⅦ的收率较高。根据本专利技术的实施例，步骤(4)进一步包括：(4-1)将所述滤液进行病毒灭活，得到灭活产物；(4-2)利用第二平衡液对凝胶进行第二平衡，得到第二湿胶；(4-3)将所述灭活产物与所述第二湿胶进行接触；(4-4)用第二洗涤液洗涤步骤(4-3)所得到的凝胶，弃滤液；(4-5)利用第二洗脱液洗脱步骤(4-4)所得到的凝胶，收集第二滤液；以及(4-6)将所述第二滤液与抑制剂混合，并将所得到的混合液进行冻干及干热，以便得到所述人凝血酶原复合物。由此，能够除去所得到的人凝血酶原复合物中的病毒，且能够防止人凝血酶原复合物的活化。根据本专利技术的实施例，所述第二平衡液包括：0.05mol/L～0.10mol/L的氯化钠；以及0.01mol/L～0.02mol/L的枸橼酸钠，所述第二平衡液的pH值为6.8～7.2。由此，能够使灭活产物充分吸附于凝胶上。根据本专利技术的实施例，所述第二洗涤液包括：0.05mol/L～0.10mol/L的氯化钠；0.01mol/L～0.02mol/L的枸橼酸钠，所述第二洗涤液的pH值为6.8～7.2。由此，能够有效地除去杂质。根据本专利技术的实施例，所述第二洗脱液包括：1.5mol/L～2.0mol/L的氯化钠；以及0.02mol/L～0.03mol/L枸橼酸钠，所述第二洗脱液的pH值为6.8～7.2。由此，能够有效地将人凝血酶原复合物洗脱下来。根据本专利技术的实施例，所述抑制剂包括：0.2IU肝素/IU FⅨ；以及22g/L甘氨酸。由此，能够有效地防止人凝血酶原复合物活化。根据本专利技术的实施例，步骤(4-3)进一步包括：(4-3-1)将所述灭活产物与第二湿胶在15℃～20℃下搅拌40～60min，优选在17℃下搅拌50min，得到第二混合液；以及(4-3-2)将所述第二混合液置于层析柱中，弃流出液，收集凝胶。由此，能够使灭活产物中的人凝血酶原复合物充分附着于凝胶上，使得人凝血酶原复合物的收率及纯度较高，尤其是FⅦ的收率较高。本专利技术的附加方面和优点将本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于提取人凝血酶原复合物的平衡液，其特征在于，包括：0.10mol/L～0.15mol/L的氯化钠；以及0.01mol/L～0.02mol/L的枸橼酸钠，所述平衡液的pH值为6.8～7.2。
【技术特征摘要】
1.一种用于提取人凝血酶原复合物的平衡液，其特征在于，包括：0.10mol/L～0.15mol/L的氯化钠；以及0.01mol/L～0.02mol/L的枸橼酸钠，所述平衡液的pH值为6.8～7.2。2.一种提取人凝血酶原复合物的方法，其特征在于，包括：(1)利用权利要求1所述的平衡液对凝胶进行平衡，得到第一湿胶；(2)将所述第一湿胶与血浆进行接触；(3)用第一洗涤液洗涤步骤(2)所得到的凝胶，弃滤液；以及(4)利用第一洗脱液洗脱步骤(3)所得到的凝胶，收集滤液，以便得到所述人凝血酶原复合物。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一洗涤液包括：0.15mol/L～0.20mol/L的氯化钠；以及0.01mol/L～0.02mol/L的枸橼酸钠，所述第一洗涤液的pH值为6.8～7.2，任选地，所述第一洗脱液包括：1.5mol/L～2.0mol/L的氯化钠；以及0.02mol/L～0.03mol/L的枸橼酸钠，所述第一洗脱液的pH值为6.8～7.2。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述血浆为去冷沉淀血浆，任选地，所述去冷沉淀血浆是通过采用下列方式获得的：用水将冰冻血浆进行化浆，得到浆液；以及将所述浆液在0℃～4℃下进行离心，收集上清液，以便得到所述去冷沉淀血浆。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，基于1L所述血浆，所述凝胶的用量为0.5g～2.5g，优选1.5g。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)进一步包括：(2-1)将所述第一湿胶与血浆在15℃～20℃下搅拌40～60min，优选在17℃下搅拌40min，得到混合液；以及(2-2)将所述混...
【专利技术属性】
技术研发人员：辛叶，梁华，肖雷，王玉兵，徐建生，
申请(专利权)人：武汉中原瑞德生物制品有限责任公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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