一种用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒。该用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒包括一盒体，该盒体内至少设有缓冲液放置区、明胶放置区、培养基放置区。采用本实用新型专利技术所提供的试剂盒能够实现脐带间充质干细胞的分离和培养，具有结构简单、使用方便的特点，有助于实现脐带间充质干细胞的高纯度和高效分离培养。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
—种用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒
本技术涉及一种用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒，属于生物工程
。
技术介绍
间充质干细胞是广泛存在于结缔组织和器官间质中的多能干细胞，具有良好增殖能力和多向分化潜能，在特定条件下可向成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、造血细胞、肝细胞等功能性细胞分化。因为MSCs来源方便，易于分离、体外扩增和纯化，且在传代扩增后仍可保持干性，因此是组织工程、基因工程和细胞治疗的理想种子细胞来源。此外，MSCs具有强大的免疫调节功能，在移植中具有低免疫原性的特点，在终末期肝病等终末期疾病以及系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病治疗中具有广阔的应用前景。目前已经进行的临床试验研究证实，在终末期肝病治疗中，MSCs移植能够明显改善患者的肝功能；而将皮肤角质细胞与MSCs混合后进行移植，可有效延长移植皮肤的存活时间并减少异体移植物抗免疫疾病(graft vs host disease, GVHD)。对于MSCs免疫调节机制的研究认为，MSCs主要通过旁分泌作用，产生多种免疫调节因子，作用于免疫细胞后，诱导免疫耐受，从而发挥调控机体的免疫的作用。此外，通过将MSCs进行基因修饰，把IFN β、EPO等基因导入其基因组中，可获得能够在体内长时间稳定表达该蛋白或细胞因子的功能性细胞。吴祖泽等人把HGF的基因导入MSCs中，体内外实验证实HGF基因转染的人骨髓MSC仍维持原有的增殖和分化能力，而对体外细胞免疫反应具有更强的抑制效果，因此在组织器官移植中存在更大的潜在应用价值(边莉，郭子宽，艾辉胜，王华，孟二红，吴祖泽，王立生；HGF基因修饰增强间充质干细胞的免疫抑制作用；军事医学科学院院刊；2006，30(4):323-328)。正因如此，目前各国均投入大量人力物力经费进行广泛和深入的研究。但所有的研究或治疗方案都必须建立在足够量MSCs获取的基础上，因此建立稳定有效快速的MSCs分离、扩增、质量控制的技术体积具有重要的意义。在人体组织中，骨髓中存在大量的MSCs，然而随着年龄老化，自体骨髓中的MSCs的数目会显著降低、且增殖能力也会大幅衰退。同时，为保证自体或供体安全，对骨髓MSCs的采集技术要求严格，配套仪器精密、成本高，不宜应用推广。因此，对于骨髓以外来源的研究越来越被重视。目前，不同的研究已经从围产期的胎盘、脐带、脐带血，抽脂术来源的脂肪以及流产胎儿中分离获得增殖能力好、低免疫原性的MSCs。而这些组织中，脐带属于医疗废弃物，具有易于获得、来源稳定可控、无伦理争议问题的特点，具有良好的研究价值和应用前景。但是，目前还没有能够较好地实现脐带间充质干细胞的原代分离和传代扩增培养的方法及试剂盒，这是本领域亟待解决的问题之一。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本技术的目的在于提供一种用于分离和培养脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,MSCs)的试剂盒,该试剂盒包含各种试剂和器皿，便于脐带间充质干细胞的分离和培养。为了达到上述目的，本技术提供了一种用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒，其特征在于，该用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒包括一盒体，该盒体内至少设有缓冲液放置区、明胶放置区、培养基放置区。在上述用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒中，优选地，所述缓冲液放置区设有第一缓冲液瓶。在上述用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒中，优选地，所述明胶放置区设有盛装明胶的容器。在上述用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒中，优选地，所述培养基放置区设有第一广口瓶。该第一广口瓶用于盛装培养基，例如BPS-SFM无血清培养基。在上述用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒中，优选地，所述盒体内还设有酶放置区和生理盐水放置区。在上述用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒中，优选地，所述酶放置区设有棕色塑料瓶和透明广口瓶。棕色塑料瓶用于盛装胶原酶A或者胶原酶A与中性蛋白酶的混合液。透明广口瓶用于盛装胰酶。在上述用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒中，优选地，所述生理盐水放置区设有第二广口瓶。该第二广口瓶用于盛装生理盐水。在上述用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒中，优选地，所述缓冲液放置区设有第二缓冲液瓶。该第二缓冲液瓶用于盛装PBS缓冲液，例如含青霉素-链霉素且无Ca2+、Mg2+的 PBS 缓冲液。本技术提供的上述试剂盒可以按照以下步骤进行脐带间充质干细胞的分离和培养:取出缓冲液放置区中盛装PBS缓冲液的第一缓冲液瓶，用含青霉素和链霉素的PBS缓冲液将健康的新生儿脐带组织充分洗净，去除血污；将脐带剪成长度均匀的小段，进行机械法分离，钝性剥离华通氏胶，同时去除脐动脉和脐静脉；将剥离的华通氏胶均匀剪碎，得到华通氏胶组织块；取出盛装明胶的容器，利用明胶对培养皿进行铺被，用培养基重悬剪碎的华通氏胶组织块，接种于明胶铺被的培养皿中，置于CO2培养箱培养，然后离心分离获得组织块和细胞重悬液。当本技术提供的上述试剂盒包括酶放置区和生理盐水放置区时，可以按照以下步骤进行脐带间充质干细胞的分离和培养: ( I)取出缓冲液放置区中盛装PBS缓冲液的第一缓冲液瓶，用含青霉素和链霉素的PBS缓冲液将健康的新生儿脐带组织充分洗净，去除血污；(2)将脐带剪成长度均匀的小段，进行机械法分离，钝性剥离华通氏胶，同时去除脐动脉和脐静脉；将剥离的华通氏胶均匀剪碎；取出棕色塑料瓶，向剪碎的华通氏胶中加入胶原酶A或者胶原酶A与中性蛋白酶的混合液，置于CO2培养箱中消化处理；(3)消化处理之后，进行离心处理并收集细胞和残余组织，利用PBS缓冲液洗去残留酶，再次进行离心分离，弃去上层清液；(4)取出透明广口瓶和第二广口瓶，向弃去上层清液后的剩余物中加入胰酶，置于CO2培养箱中消化处理，加入生理盐水混匀，离心分离，弃去上层清液；(5)取出盛装无血清培养基的第一广口瓶和盛装明胶的容器，利用明胶对培养皿进行铺被，用MSCs培养基重悬组织和细胞，接种于明胶铺被的培养皿中，置于CO2培养箱培养，然后离心分离获得组织块和细胞重悬液。当本技术提供的上述试剂盒包括盛装明胶的容器和第二缓冲液瓶时，可以按照以下步骤进行脐带间充质干细胞的分离和培养:( I)取出缓冲液放置区中盛装PBS缓冲液的第一缓冲液瓶，用含青霉素和链霉素的PBS缓冲液将健康的新生儿脐带组织充分洗净，去除血污；(2)将脐带剪成长度均匀的小段，进行机械法分离，钝性剥离华通氏胶，同时去除脐动脉和脐静脉；将剥离的华通氏胶均匀剪碎；取出棕色塑料瓶，向剪碎的华通氏胶中加入胶原酶A或者胶原酶A与中性蛋白酶的混合液，置于CO2培养箱中消化处理；(3)消化处理之后，进行离心处理并收集细胞和残余组织，利用PBS缓冲液洗去残留酶，再次进行离心分离，弃去上层清液；(4)取出透明广口瓶和第二广口瓶，向弃去上层清液后的剩余物中加入胰酶，置于CO2培养箱中消化处理，加入生理盐水混匀，离心分离，弃去上层清液；(5)取出盛装无血清培养基的第一广口瓶和盛装明胶的容器，利用明胶对培养皿进行铺被，用MSCs培养基重悬组织和细胞，接种于明胶铺被的培养皿中，置于CO2培养箱培养，然后离心分离获得组织块和细胞重悬液；(6本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒，其特征在于，该用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒包括一盒体，该盒体内至少设有缓冲液放置区、明胶放置区、培养基放置区。2.根据权利要求1所述的用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液放置区设有第一缓冲液瓶。3.根据权利要求1所述的用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒，其特征在于，所述明胶放置区设有盛装明胶的容器。4.根据权利要求1所述的用于分离和培养脐带间充质干细胞的试剂盒，其特征在于，所述培养基放置区设有第一广口瓶。5.根据权利要求1所述的用于分离和...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘湘连，王春有，赵宇，李莉莉，
申请(专利权)人：北京东方华辉生物医药科技有限公司，
类型：新型
国别省市：