一种流式细胞术用红细胞裂解试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种流式细胞术用红细胞裂解试剂盒。该流式细胞术用红细胞裂解试剂盒包括一盒体，该盒体内至少设有一个裂解试剂放置区和一个洗涤试剂放置区。本实用新型专利技术提供的流式细胞术用红细胞裂解试剂盒为实验室检测及临床诊断中“生物样本前处理-红细胞裂解”这一关键技术环节提供普遍适用、效果稳定的系统化解决方案，这不仅提高了执行这一步骤的便捷程度，更有助于提高分析检验实验室内部质量控制的可实施性和室间质量评价（External?Quality?Assessment,EQA）中的表现，以保证检验结果可以最佳地符合受检对象的实际情况，为进一步实验操作和医疗行为提供更为准确的依据。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本技术涉及一种流式细胞术用红细胞裂解试剂盒。该流式细胞术用红细胞裂解试剂盒包括一盒体，该盒体内至少设有一个裂解试剂放置区和一个洗涤试剂放置区。本技术提供的流式细胞术用红细胞裂解试剂盒为实验室检测及临床诊断中“生物样本前处理-红细胞裂解”这一关键技术环节提供普遍适用、效果稳定的系统化解决方案，这不仅提高了执行这一步骤的便捷程度，更有助于提高分析检验实验室内部质量控制的可实施性和室间质量评价（External?Quality?Assessment,EQA）中的表现，以保证检验结果可以最佳地符合受检对象的实际情况，为进一步实验操作和医疗行为提供更为准确的依据。【专利说明】一种流式细胞术用红细胞裂解试剂盒
本技术涉及一种流式细胞术用红细胞裂解试剂盒，属于生物材料
。
技术介绍
流式细胞术(Flow Cytometry Method, FCM)在免疫功能评价、血液肿瘤的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、药物敏感性筛选和发病机理研究等方面都发挥着重要作用；特别是干细胞研究及临床应用中，FCM检测与监测CD34+细胞群比例是最为常规和必需的技术手段。FCM技术在为实验室和临床提供重要参数的同时，其自身作为检测方法的准确性，特别是其在诊断应用中的质量控制成为了关键环节。卫生部临床检验中心专家在《分子诊断质量控制面临的问题》(胡丽涛等，临床检验杂志，2012，30(6):466-467.) 一文中详细阐释了这一问题。此外,美国病理学家学会(College of American Pathologists, CAP)作为诊断检验的权威机构，制定了一整套较为完整的检测技术质量控制程序指南和实验室质量监控条例，该指南和条例从取材送材，到样本前处理、上机等，对检测所涉及技术的各个环节都作了详细规定。FCM检测结果的准确性依赖于对实验操作的过程实施全面质量控制，而分析样本的制备则是其中非常重要的环节，也是最困难的环节之一。分析样本制备的主要内容是样本前处理。所谓样本前处理，是指在实施FCM检测之前，必须对生物样本在体外进行适宜的前处理操作，这一操作是保证这些技术实施效果的关键性步骤，将对检测结果的准确性产生较大影响。样本前处理包含的概念十分广泛，其中应用最为普遍的一项前处理方案是红细胞去除。目前去除红细胞的主要途径是红细胞裂解法、密度梯度离心法等。根据已发表文献表明，使用后者执行这一步骤不仅费时费力，而且可能会丢失部分细胞，造成实验误差。而红细胞裂解法由于其操作简便，并能够最大程度保持原始白细胞各项生物学参数和形态，目前应用最为广泛。红细胞裂解需要使用红细胞裂解试剂，而红细胞裂解试剂的选择，以及红细胞裂解的实验操作对检测结果存在较大影响。选择红细胞裂解试剂品种的研究实例例如，巩文玉等在研究骨髓移植前动员外周血⑶34+细胞相对计数时发现，使用Becton Dikinson公司的产品FACS Lysing Solution裂解处理后的粒细胞和淋巴细胞的FSC、SSC信号强度均弱于Beckman Coulter公司的产品IOTest，且前者处理的标本⑶45+细胞在所有收集的信号中的百分比要高于后者，这提示IOTest的裂解作用较为温和，但其会导致红细胞污染，IOTest的配方为氯化铵、碳酸氢钾和乙二胺四乙酸；此外，该研究还发现裂解后所得总白细胞数与CD34+细胞数并不存在相关关系，这些现象均提示裂解试剂的配方对于预测输注给受者的CD34+细胞量存在重大影响，主要原因在于CD34+细胞含量很低，其检测结果可能对任何可能造成微小变异的因素均很敏感，特别是红细胞裂解这一操作(巩玉文等，红细胞裂解液对⑶34+细胞相对计数的影响，中国实验血液学杂志，2010，18(3):762-765.)。红细胞裂解实验操作对检测结果影响的实例例如，ALDAGEN公司的干细胞检测产品ALDEFLU0R说明书中明确提示使用氯化铵配方的红细胞裂解试剂对外周血进行红细胞裂解时需要执行两次，以确保红细胞被完全去除，不影响后续试验；然而，本领域技术人员所熟知的是，执行两次裂解及相应的洗涤，将会造成部分细胞丢失，进而造成实验误差，例如刘艳荣等(刘艳荣等，流式细胞术计数CD34阳性细胞标准化与质量控制，中国实验血液杂志，2000，8 (4):302-306)明确指出了这一问题，并提出样本制备过程的这些差异将会影响CD34阳性细胞标准化检测与质量控制。此外，现有的红细胞裂解试剂在有效性和样本兼容性上也存在一定问题，不同类型的血液样本对红细胞裂解试剂的表现相差迥异，例如ALDAGEN公司的干细胞检测产品ALDEFLU0R说明书中明确指出，为保证红细胞的有效去除，使用氯化铵配方的红细胞裂解试剂对骨髓和脐带血样本进行处理时，条件是不同的，应严格按产品配套的不同实验方案进行操作。再例如瑞士 Lonza公司的著名产品ACK lysing buffer的产品说明书中明确指出，这一产品是针对人或小鼠的淋巴细胞制备液设计，而不是针对全血设计的；Lonza公司的产品ACK lysing buffer的配方是氯化铵-碳酸氢钾-乙二胺四乙酸二钠,Lonza对其产品做出明确的适用性限制是有其原因的，这一配方的红细胞裂解试剂很难同时满足有效性和样本兼容性。又例如Bautista ML等在研究红细胞渗透脆性的研究中，发现丙三醇诱发的溶血试验中，脐带血比成年人外周血发生50%溶解的时间要显著更长，P〈0.0001 (BautistaML 等，Cord blood red cell osmotic fragility:a comparison between preterm andfull-term newborn infants, Early Hum Dev, 2003，72 (I):37-46);这提不对于不同生物样本，红细胞裂解的难易程度存在较大差异，脐带血中的红细胞比外周血可能更难于发生裂解，这不仅在红细胞裂解试剂的品种选择上引入了困难，也为实验操作的标准化带来了障碍。试剂盒是实现实验操作标准化的一个良好解决方案。专利申请201110097316.3中记载了一种体外分离有核细胞且能除去红细胞的方法和试剂盒，其中起到裂解红细胞作用的是7.47g/L的氯化铵+2.6g/L的三羟甲氨基甲烷，如上文所述，这种配方对于样本的兼容性不够好。综上，目前技术的问题在于:(a)进口在售产品价格昂贵，货期长，不利于广泛使用，且各品牌试剂配方不同、作用机制和标准各异，导致红细胞裂解的标准化操作很难实现；(b)裂解试剂配方对红细胞裂解不完全，或裂解时间很难控制(操作可控制性差)，对于后续实验产生不利影响；(C)裂解试剂配方对红细胞以外的细胞造成较大影响，特别对于丰度较低的细胞研究而言是非常不利的，例如⑶34+造血干细胞；(d)裂解试剂的兼容性差，对于脐带血等难于裂解的样本表现不佳，缺乏普遍通用的配方可供选择。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本技术的目的在于提供一种流式细胞术用红细胞裂解试剂盒，该试剂盒是一种包含红细胞裂解试剂的配套试剂盒。为达到上述目的，本技术提供了一种流式细胞术用红细胞裂解试剂盒，其中，该流式细胞术用红细胞裂解试剂盒包括一盒体，该盒体内本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种流式细胞术用红细胞裂解试剂盒，其特征在于，该流式细胞术用红细胞裂解试剂盒包括一盒体，该盒体内至少设有一个裂解试剂放置区和一个洗涤试剂放置区。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：赵侃，王春有，刘湘连，甘朝，李莉莉，
申请(专利权)人：北京东方华辉生物医药科技有限公司，
类型：实用新型
国别省市：