富马酸酯在制备治疗肝病药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了富马酸酯在制备治疗肝病药物中的应用，包括富马酸二甲酯(dimethyl fumarate,DMF)和富马酸单甲酯(monomethyl fumarate,MMF)在治疗多种肝脏疾病中的应用。本发明专利技术中，采用DMF、MMF激活多种人类肝癌细胞、小鼠肝细胞内核因子E2相关因子2(nuclear factor‑E2‑related factor 2,Nrf2)及其下游抗氧化基因的表达，启动细胞抗氧化机制中最重要的Keap1‑Nrf2‑ARE通路，不仅如此，还可防治小鼠肝病模型中氧化应激对肝脏的损伤，有良好的护肝作用。具有开发成针对氧化应激损伤相关的肝病治疗药物的潜能，在脂肪性肝病、药物性肝病、胆汁淤积性肝病、病毒性肝炎、肝硬化、肝癌等多种肝脏疾病的治疗中具有重要的开发应用前景。

Use of fumaric acid ester in preparing medicine for treating liver disease

The invention discloses a fumaric acid ester in preparation for the application of liver disease drugs, including two methyl fumarate (dimethyl fumarate, DMF) and Monomethyl Fumarate (Monomethyl Fumarate, MMF) used in the treatment of a variety of liver diseases. In the invention, using DMF and MMF activation in human hepatocellular carcinoma cells and the kernel of mouse liver cells E2 related factor 2 (nuclear factor E2 related factor 2, Nrf2) and its downstream antioxidant gene expression, the most important antioxidant mechanism in Keap1 cell Nrf2 ARE pathway, not only that, but also oxidative stress can damage the prevention of mouse liver disease in the liver, improve liver function. With the development for oxidative stress in liver disease treatment related potential, has an important development and application prospect in the treatment of fatty liver disease, drug-induced hepatitis, cholestatic liver disease, viral hepatitis, liver cirrhosis, liver cancer and other diseases of the liver.

【技术实现步骤摘要】
富马酸酯在制备治疗肝病药物中的应用
本专利技术涉及化学医药领域。具体涉及富马酸酯在制备治疗多种肝脏疾病药物中的应用。
技术介绍
氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时，体内高活性分子如活性氧自由基(ROS)和活性氮自由基(RNS)产生过多，氧化程度超出氧化物的清除，而导致组织损伤。肝脏作为重要的代谢器官，常暴露在较高浓度的外源物和其他化学物质中。虽然肝脏具备一系列抵御有害化学物质及其代谢产物的机制，但仍易受到中间活性物质引起的氧化损伤。氧化应激是诸多肝脏疾病共同的发病机制，氧化损伤与多数肝病密切相关，包括：脂肪性肝病、药物性肝病、胆汁淤积性肝损伤、病毒性肝炎、肝硬化，甚至于肝癌，所以抗氧化治疗对防治肝脏疾病有着重要的作用。Nrf2是近年来新发现的一种由氧化应激介导的核转录因子，以Keap1-Nrf2-ARE信号通路介导II相解毒酶和抗氧化基因的转录，被认为是细胞抗氧化机制中最重要的通路。Nrf2与其下游多种保护性基因的激活表达，可诱导一系列解毒酶、生物转化酶、外源物质排外转运体的表达，增加机体的抗氧化能力。研究表明，Nrf2的激活在对抗肝脏氧化应激损伤中具有重要作用。RobertH.等研究发现DMF和MMF均可通过激活细胞内的Nrf2信号途径，增强对细胞的保护作用，使其更好的耐受氧化应激。DMF，是一种NF-KappaB的激活抑制剂，可发挥免疫调节和神经保护作用，临床上主要用于治疗多发性硬化症(multiplesclerosis,MS)。临床研究表明DMF可通过激活Nrf2通路发挥减轻细胞炎症及氧化应激反应能力的作用。DMF经口服后，可迅速被体内酯酶水解为最具生物活性的代谢物——MMF，随后MMF在小肠被安全吸收。在DMF口服5-6小时，MMF血浆浓度达峰值；DMF半衰期为12分钟，而MMF的半衰期为36小时，MMF生物学效应可持续更长时间。虽然DMF、MMF具有激活Nrf2通路发挥减轻细胞炎症及氧化应激反应能力的作用，且Nrf2在对抗肝脏氧化应激中具有重要意义，但DMF和MMF在治疗与氧化应激损伤相关的肝脏疾病中是否存在作用尚未报道，且目前世界上尚未见有人进行深入研究。
技术实现思路
本专利技术对富马酸二甲酯(dimethylfumarate,DMF)和富马酸单甲酯(monomethylfumarate,MMF)在肝细胞中对Nrf2信号途径的影响，及其对与氧化应激损伤相关的肝脏疾病的治疗情况进行深入研究。研究表明：包括DMF、MMF在内的富马酸酯可用于制备治疗多种肝病(包括脂肪性肝病、药物性肝病、胆汁淤积性肝病、病毒性肝炎、肝硬化、肝癌等)的药物。研究人员经过大量的科学研究证实了该两种药物均能够激活多种人肝癌细胞及小鼠肝细胞内的Nrf2信号途径，不仅如此，还可防治小鼠肝病模型中氧化应激对肝脏的损伤，有良好的护肝作用。其中，上述的人肝癌细胞为HepG2细胞、Huh7细胞，小鼠肝细胞为AML-12细胞。优选地，所述药物的剂型为粉剂。所述药物的给药途径包括局部外用，静脉和腹腔注射等。总之，本专利技术经过大量的实验研究发现DMF和MMF均能激活多种人肝癌细胞及小鼠肝细胞内的Nrf2信号途径，还可防治小鼠肝病模型中氧化应激对肝脏的损伤，有良好的护肝作用，说明DMF和MMF可用于制备治疗肝病的药物。因此，本专利技术在用于多种肝脏疾病(包括脂肪性肝病、药物性肝病、胆汁淤积性肝病、病毒性肝炎、肝硬化、肝癌等)的治疗方面具有重要的开发应用前景。附图说明图1：DMF对人肝癌HepG2细胞内Nrf2及其抗氧化靶基因表达的影响(10uMDMF处理HepG2细胞WB/PCR)；图2：DMF对人肝癌Huh7细胞内Nrf2及其抗氧化靶基因表达的影响(DMF处理Huh7细胞WB/PCR)；图3：DMF对小鼠肝细胞AML-12细胞内Nrf2及其抗氧化靶基因表达的影响(10uMDMF处理AML-12细胞WB/PCR)；图4：MMF对人肝癌HepG2细胞内Nrf2及其抗氧化靶基因表达的影响(10uMMMF处理HepG2细胞WB/PCR)；图5：MMF对人肝癌Huh7细胞内Nrf2及其抗氧化靶基因表达的影响(10uMMMF处理Huh7细胞WB/PCR)；图6：MMF对小鼠肝细胞AML-12细胞内Nrf2及其抗氧化靶基因表达的影响(10uMMMF处理AML-12细胞WB/PCR)；图7：空白对照组的正常肝组织在光镜下的表现(左图放大100倍，右图放大200倍)；图8：未予以DMF治疗的酒精性肝病模型对照组的小鼠肝组织在光镜下的表现(左图放大100倍，右图放大200倍)；图9：予以小剂量的DMF口服灌胃给药的模型小鼠肝组织在光镜下的表现(左图放大100倍，右图放大200倍)；图10：予以大剂量的DMF口服灌胃给药的模型小鼠肝组织在光镜下的表现(左图放大100倍，右图放大200倍)。具体实施方式实施例1DMF体外激活细胞Nrf2信号的通路实验所选的细胞株包括人肝癌HepG2细胞、人肝癌Huh7细胞、小鼠肝细胞AML-12。取对数生长期细胞接种于6孔板中，细胞分别加入DMF培养0、2、4、6、12、24小时后，取出培养板，提取细胞总蛋白和细胞总RNA，采用Westernblot、QPCR技术，检测细胞内Nrf2及其抗氧化靶基因(GCLC、HO1)的表达。结果如图1-3所示，DMF可以增强肝细胞内Nrf2及其抗氧化靶基因(GCLC、HO1)的表达。实施例2MMF体外激活细胞Nrf2信号的通路实验所选的细胞株包括人肝癌HepG2细胞、人肝癌Huh7细胞、小鼠肝细胞AML-12。取对数生长期细胞接种于6孔板中，细胞分别加药(MMF)培养0、2、4、6、12、24小时后，取出培养板，提取细胞总蛋白和细胞总RNA，采用Westernblot、QPCR技术，检测细胞内Nrf2及其抗氧化靶基因(GCLC、HO1)的表达。结果如图4-6所示，MMF可以增强肝细胞内Nrf2及其抗氧化靶基因(GCLC、HO1)的表达。实施例3DMF在防治酒精性肝病小鼠肝脏氧化应激损伤中的作用研究实验所选择的小鼠为上海斯莱克公司提供的C57BL/6小鼠(雄性、8周龄、体重为18-21g)。随机分为4组，饲养于普通屏障环境内，采用NIAAA法构建小鼠酒精性肝病模型。模型构建成功后随机选取两组小鼠分别给予不同剂量的DMF口服灌胃给药，每日1次，共给药10天。10天后对4组小鼠予以安乐死，取肝组织浸泡于福尔马林中，对各组肝组织采用HE染色，并于100倍及200光镜下进行观察。结果如图7-10所示，DMF可以防治小鼠肝病模型中氧化应激对肝脏的损伤，有良好的护肝作用。本文档来自技高网...

【技术保护点】
富马酸酯在制备治疗肝病药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.富马酸酯在制备治疗肝病药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述富马酸酯包括DMF和MMF。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肝病包括脂肪性肝病、药物性肝病、胆...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈永恒，刘霆，严璐，陈娅琦，张桂英，陈主初，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：湖南,43