一种PHBA对映异构体杂质检测方法技术

本发明专利技术公开了一种PHBA对映异构体杂质检测方法，采用正相高效液相色谱法，其中色谱条件：色谱柱：AD‑H或AS‑H，流动相组成：正己烷：异丙醇=85:15‑80:20（v/v），流动相流速：0.8‑1.2 mL/min，检测波长：220‑280nm，柱温：20‑40℃，检测器：紫外线检测器或二级管阵列检测器；本发明专利技术提供的一种PHBA的对映异构体检测方法，实现了PHBA与其对映异构体的分离，具有较高的灵敏度和专属性，操作简便，分离度符合药典规定，即分离度大于1.50，可用于PHBA的质量控制，具有很好的工业实用性。

Method for detecting PHBA enantiomer impurity

The invention discloses a PHBA enantiomer impurity detection method by normal phase HPLC, the chromatographic conditions: column: AD H or AS H, mobile phase composition: n-hexane: isopropanol =85:15 80:20 (v/v), mobile phase flow rate: 0.8 1.2 mL/min detection wavelength: 220, 280nm, column temperature: 20 40 C, or two level detector: ultraviolet detector tube array detector; the invention provides a PHBA enantiomer detection method to achieve the PHBA and separation of enantiomers, with high sensitivity and specificity, simple operation. The degree of separation with the pharmacopeia, namely the separation degree is greater than 1.50, it can be used in quality control of PHBA, the industry has good practicability.

【技术实现步骤摘要】
一种PHBA对映异构体杂质检测方法
本专利技术涉及药物分析检测
，尤其涉及一种PHBA对映异构体杂质检测方法。
技术介绍
PHBA，即(S)-α-羟基-γ-N-邻苯二甲酰亚氨基丁酸，是作为合成药物阿米卡星的重要中间体。阿米卡星俗称丁胺卡那霉素、阿米卡霉素，是第三代半合成氨基糖苷类抗生素，对大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属、变形杆菌属、志贺菌属、沙门菌属、铜绿假单胞菌及其他假单胞菌、不动杆菌属、产碱杆菌属等具有较强的药理作用；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌、耶尔森菌属、胎儿弯曲菌、结核杆菌及某些非结核分枝杆菌属等据有较强的药理作用。阿米卡星又具有低耳毒性、低肾毒性等优势，在氨基糖苷类抗生素中所占的份额已由1999年5％上升到现在的12％，无论是非典型肺炎的治疗还是禽流感的预防，阿米卡星都起到了重要作用，是我国临床广泛应用的抗生素之一。PHBA的结构式如下：由于PHBA具有一个手性碳原子，而该手性碳原子的取代基在空间中的不同取向使其具有S构型和R构型两种化合物，互为对映异构体；其对映异构体杂即(R)-α-羟基-γ-N-邻苯二甲酰亚氨基丁酸，其结构式如下：其中，S构型才能用于合成阿米卡星，R构型则为其杂质。由于对映异构体具有相同的物理性质(如熔点、沸点、溶解度、密度等)和化学性质，仅在特殊手性环境下才能体现出差异。因此，一般普通的反相液相色谱法无法分离，需要一种新的方法对这个R构型的杂质进行质量监控。从目前公开的技术文献来看，PHBA多数采用旋光仪来测定其比旋度，由此来判定其是否具有较高光学纯度。但比旋度法容易受配样溶剂、配样温度、配样浓度以及仪器稳定等多方面影响；而且需要高光学纯度单一对映体作为对照物，所以现有的这种比旋度法存在准确性、稳定性较差，对仪器、操作人员和对照品的要求高等缺点。另外，《中国药典》规定，杂质与主要成分之间，以及杂质与杂质之间分离度(R)应大于1.5。分离度(R)为相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值，也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。分离度计算公式：R＝2(tR2-tR1)/(W1+W2)。R值越大，表明相邻两组分分离越好。一般说当R＜1时，两峰有部分重叠；当R＝1.0时，分离度可达98％；当R＝1.5时，分离度可达99.7％。通常用R＝1.5作为相邻两组分已完全分离的标志。当R＝1时，称为4σ分离，两峰基本分离，裸露峰面积为95.4％，内侧峰基重叠约2％。R＝1.5时，称为6σ分离，裸露峰面积为99.7％。R≥1.5称为完全分离。
技术实现思路
本专利技术的目的就在于提供一种PHBA对映异构体杂质检测方法，以解决上述问题。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是这样的：一种PHBA对映异构体杂质检测方法，采用正相高效液相色谱法，其中色谱条件如下：色谱柱：AD-H或AS-H流动相组成：正己烷：异丙醇＝85:15-80:20(v/v)流动相流速：0.8-1.2mL/min检测波长：220-280nm柱温：20-40℃检测器：紫外线检测器或二级管阵列检测器。作为优选的技术方案：所述流动相中还含有三氟乙酸。作为优选的技术方案：所述流动相流速为1.0mL/min。作为优选的技术方案：所述检测波长为280nm。作为优选的技术方案：所述柱温为30℃。作为优选的技术方案：溶解供试品的溶剂为乙醇。作为优选的技术方案：供试品溶液浓度为0.2-1mg/mL，进一步优选为0.2mg/mL。作为优选的技术方案：单针进样量为5-40μL，进一步优选为20μL。通过实验证明，AD-H(5μmx4.6mmx25cm)手性柱能实现PHBA与其对映异构体很好的分离效果。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术采用手性色谱法的对映体过剩值(即ee值)测定，实现了PHBA与其对映异构体的分离，具有较高的灵敏度和专属性，具有快速、灵敏、操作简便和准确、不需要高纯度单一对映体作为对照物等优点，分离度符合药典规定，即分离度大于1.50，可用于PHBA的质量控制，本方法特别适合就高ee值对映体产物纯度的准确测定。附图说明图1是实施例2中液相色谱图；图2是实施例3中液相色谱图；图3是实施例4中液相色谱图；图4是实施例5中液相色谱图；图5是实施例6中液相色谱图；图6是实施例7中液相色谱图；图7是实施例8中液相色谱图；图8是实施例9中液相色谱图；图9是实施例10中液相色谱图；图10是实施例11中液相色谱图；图11是实施例13中S-PHBA的线性回归图；图12是实施例13中R-PHBA的线性回归图。具体实施方式下面将结合附图对本专利技术作进一步说明。实施例1溶剂的选择及溶液浓度的选择正相色谱一般采用正己烷或乙醇溶解样品，选择取决于样品的溶解性。PHBA在乙醇中溶解性较好，而在正己烷中溶解性较差，为了避免样品溶出的情况，使用乙醇溶解样品。实施例2仪器与检测条件美国Agilent1200高效液相色谱仪，手动进样器；DaicelAD-H柱(4.6×250mm,5μm)；流动相：正己烷：异丙醇＝80:20(v/v)；进样量为20μL；检测波长为220nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃。实验步骤取PHBA消旋体适量，用乙醇溶解并稀释制成每1mL含有PHBA消旋体1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液按上述条件进样测定，记录色谱图，结果见图1。图1表明消旋体有分离，但分离度和峰形均达不到要求。实施例3仪器与检测条件美国Agilent1200高效液相色谱仪，手动进样器；DaicelAD-H柱(4.6×250mm,5μm)；流动相：正己烷：异丙醇＝85:15(v/v)；进样量为20μL；检测波长为220nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃。实验步骤取PHBA消旋体适量，用乙醇溶解并稀释制成每1mL含有PHBA消旋体1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液按上述条件进样测定，记录色谱图，结果见图2。图2表明消旋体有分离，但分离度和峰形均达不到要求。实施例4仪器与检测条件美国Agilent1200高效液相色谱仪，手动进样器；DaicelAS-H柱(4.6×250mm,5μm)；流动相：正己烷：异丙醇＝80:20(v/v)；进样量为20μL；检测波长为220nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃。实验步骤取PHBA消旋体适量，用乙醇溶解并稀释制成每1mL含有PHBA消旋体1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液按上述条件进样测定，记录色谱图，结果见图3。图3表明消旋体有分离，但分离度和峰形均达不到要求。实施例5仪器与检测条件美国Agilent1200高效液相色谱仪，手动进样器；DaicelOD-H柱(4.6×250mm,5μm)；流动相：正己烷：异丙醇＝80:20(v/v)；进样量为20μL；检测波长为220nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃。实验步骤取PHBA消旋体适量，用乙醇溶解并稀释制成每1mL含有PHBA消旋体1mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液按上述条件进样测定，记录色谱图，结果见图4。图4表明消旋体未能达到分离。实施例6仪器与检测条件美国Agilent1200高效液相色谱仪，手动进样器；DaicelAD-H柱(4.6×250mm,5μm)；流动相：正己烷：异丙醇：三氟醋酸＝80:20:0.1(v/v)；进样量为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种PHBA对映异构体杂质检测方法，其特征在于：采用正相高效液相色谱法，其中色谱条件如下：色谱柱：AD‑H或AS‑H流动相组成：正己烷：异丙醇=85:15‑80:20（v/v）流动相流速：0.8‑1.2 mL/min检测波长：220‑280 nm柱温：20‑40 ℃检测器：紫外线检测器或二级管阵列检测器。

【技术特征摘要】
1.一种PHBA对映异构体杂质检测方法，其特征在于：采用正相高效液相色谱法，其中色谱条件如下：色谱柱：AD-H或AS-H流动相组成：正己烷：异丙醇=85:15-80:20（v/v）流动相流速：0.8-1.2mL/min检测波长：220-280nm柱温：20-40℃检测器：紫外线检测器或二级管阵列检测器。2.根据权利要求1所述的PHBA对映异构体杂质检测方法，其特征在于：所述流动相中还含有三氟乙酸。3.根据权利要求1所述的PHBA对映异构体杂质检测方法，其特征在于：所述流动相流速为1.0mL/min。4.根据权利要求1所述的PHBA对映异构体杂质检测方法，其特征在于：所述检测波长为280nm。5.根据权利要求1所述的PHBA对映异构体杂质...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁伟成，葛真真，徐小英，周鸣强，刘斌，
申请(专利权)人：成都丽凯手性技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51