一种大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定试剂盒及鉴定方法技术

本发明专利技术提供了一种大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定试剂盒，所述试剂盒包括特异性扩增大肠杆菌K99菌毛抗原的引物对。还公开了应用该试剂盒的鉴定方法。所述试剂盒可用于大肠杆菌K99菌毛抗原的鉴定，操作简单，鉴定时间快，且试验材料易于获取。

【技术实现步骤摘要】
一种大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定试剂盒及鉴定方法
本专利技术涉及细菌鉴定
，特别涉及一种新型的大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定试剂盒，以及该试剂盒的鉴定方法。
技术介绍
肠道产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)是引起犊牛腹泻病的最主要细菌病原，其毒素能提高宿主肠道上皮细胞内环状AMP或GMP，使电解质液分泌增多，从而导致腹泻发生。新生犊牛在出生后的最初4d内对ETEC高度敏感，如果感染就会发展为水样腹泻。迄今为止，从犊牛分离到的肠致病性大肠杆菌已发现的纤毛抗原有K88、K99、987p、F41等，其中以K99和F41最为常见。针对不同菌毛抗原类型的大肠杆菌，需要采用不同的预防和治疗方法。传统大肠杆菌菌毛类型的鉴定方法主要采用快速凝集方法，需要将菌毛抗原提取，再与特定菌毛抗体凝集，根据凝集结果进行判定。该方法操作步骤多，过程繁琐，且菌毛抗体来源不便。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新型大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定试剂盒，当所鉴定的大肠杆菌样品的菌毛抗原类型为K99时，通过PCR扩增后，在电泳结果中可得到特异性阳性条带；当所鉴定的大肠杆菌样品的菌毛抗原类型不为K99时，通过本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括特异性扩增大肠杆菌K99菌毛抗原的引物对，所述引物对包括上游引物5’‑CCAATGCTTCTGCGAATACAGG‑3’，以及下游引物5’‑CCGGGCGCTGGTTTTAGTTT‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括特异性扩增大肠杆菌K99菌毛抗原的引物对，所述引物对包括上游引物5’-CCAATGCTTCTGCGAATACAGG-3’，以及下游引物5’-CCGGGCGCTGGTTTTAGTTT-3’。2.根据权利要求1所述的大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定试剂盒，其特征在于：还包括PCR预混液、双蒸水、阳性对照模板和阴性对照模板。3.一种大肠杆菌K99菌毛抗原PCR鉴定方法，其特征在于包括以下步骤：a)挑取大肠杆菌样品的单菌落，置入装有双蒸水的离心管中，在95～100℃水中热变性10min，然后在8000rpm条件下离心5min，取上清液作为DNA模板；b)分别往...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭沈涛，李华，于辉，林旭埜，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东,44