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一株重组大肠杆菌及其在制备抗O157:H7的N-糖蛋白疫苗中的应用制造技术

技术编号:9964253 阅读:134 留言:0更新日期:2014-04-24 14:58
本发明专利技术公开了一株重组大肠杆菌,命名为重组大肠杆菌CBEB,是将构建的重组质粒p-pglB-malEM和p-rfb共转化大肠杆菌CLM24中获得,其基因型是W3110 Δwaal/p-pglB-malEM+p-rfb。利用本发明专利技术所述重组大肠杆菌发酵制备抗O157:H7 N-糖蛋白疫苗,生产步骤简单,生产周期短,产量高,生产成本低,可以应用于抗O157:H7 N-糖蛋白疫苗的大规模生产;且本发明专利技术方法生产的抗O157:H7 N-糖蛋白疫苗具有良好的免疫效果,为抗细菌感染的免疫治疗提供了新的选择,提示具有良好的工业开发和应用前景。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一株重组大肠杆菌,该菌命名为重组大肠杆菌CBEB,其特征在于:所述重组大肠杆菌由如下方法制得:构建含malEM和pglB基因的共表达载体p‑pglB‑malEM,再构建含rfb基因簇的表达载体p‑rfb,然后将上述构建的重组质粒p‑pglB‑malEM和p‑rfb共转化大肠杆菌CLM24中,得到能同时表达pglB、malEM基因和rfb基因簇的重组大肠杆菌CBEB,其基因型是W3110Δwaal/p‑pglB‑malEM+p‑rfb;其中,所述malEM来源于质粒pMAL‑p5X,所述pglB基因来源于空肠弯曲杆菌NCTC11168,共表达malEM和pglB基因的载体为pBAD24;所述rfb基因簇来源于大肠杆菌O157:H7;表达rfb基因簇的载体为pYES1L;上述malEM为malE基因突变体,是通过在malE基因的3’末端插入一段核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的表达糖基化序列的基因所得;上述大肠杆菌CLM24是通过敲除出发菌株大肠杆菌W3110的waal基因而构建的大肠杆菌工程菌,其基因型为W3110Δwaal,命名为大肠杆菌CLM24。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:陈敏马中瑞张化杰商文静王鹏
申请(专利权)人:山东大学
类型:发明
国别省市:山东;37

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