儿童自闭症肠道菌群多样性的分析方法及特异性引物对技术

本发明专利技术提供了一种基于二代高通量测序技术的肠道菌群多样性的分析方法及特异性引物对。其中，该方法包括如下步骤：1)提取待测粪便样本的DNA；2)配置PCR反应体系，进行细菌16S rDNA V1‑V2区的PCR扩增反应；上述PCR反应体系中包含PCR扩增模板、通用引物对等；3)将PCR产物进行目标片段的检测以及PCR产物的纯化；4)将纯化后的PCR产物进行二代高通量测序，检测粪便样本中的微生物的种类；5)利用Illumina MiSeq测序系统进行测序；6)利用FLASH，QIIME，usearch61进行生物信息学分析。本方法通过二代高通量测序技术，对疾病患者肠道菌群多样性及差异性进行检测，与传统菌群检测方法相比，应用新一代高通量技术能够更详细、更深层地解析菌群的组成与功能。

【技术实现步骤摘要】
儿童自闭症肠道菌群多样性的分析方法及特异性引物对
本专利技术涉及生物技术检测领域，具体地，本专利技术提供了一种基于二代高通量测序技术的检测疾病患者体内肠道菌群多样性的技术和方法。
技术介绍
肠道内数以亿计的微生物及其代谢产物在人体能量代谢、营养物质吸收、先天和获得性免疫、胃肠道功能等方面发挥着重要作用,一旦宿主与肠道微生物之间共栖共生的稳态被打破,就会诱发多种人类疾病。目前已经认识到肠道微生物与人类健康和疾病的密切关系,仅仅从人类自身角度出发来研究人类疾病远远不够,必须考虑到与人类共栖共生的肠道微生物的作用。目前应用于人体肠道微生物的多样性及差异化的研究方法较多，主要有传统检测方法、构建基因文库法、遗传指纹图谱技术、分子杂交技术和DNA测序技术等方法。其中传统微生物检测方法是用各种培养基培养分离微生物，并通过革兰染色、生物化学和血清学试验等方法来确定微生物种类，通过倍比稀释、菌落计数等方法来测定微生物数量。但由于传统微生物培养技术中，菌株的富集或衰减不可避免，原始的微生态结构被改变，这会导致研究结果存在较大偏差。综上所述，应用和开发针对疾病患者肠道菌群的多样性及差异性的检测方法，能够本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对于检测待测样品中微生物种类的16S rDNA V1‑V2区特异性引物对，其特征在于，所述引物对是能够特异性扩增所有需要检验的微生物来源的引物对。

【技术特征摘要】
1.一种对于检测待测样品中微生物种类的16SrDNAV1-V2区特异性引物对，其特征在于，所述引物对是能够特异性扩增所有需要检验的微生物来源的引物对。2.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于所述引物对是由两条单链DNA分子序列组成的引物对。3.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于所述引物对的上游引物为：5’-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’；下游引物为：5’-GCTGCCTCCCGTAGGAGT-3’。4.权利要求1-3中任一权利要求所述的引物对，其特征在于所述引物对用于生物技术检测领域，通过二代高通量测序技术，精准检测疾病患者粪便样本中微生物的种类。5.一种肠道菌群多样性的分析方法，其特征在于包括以下步骤，(1)提供一待测粪便样品；(2)从所述粪便样品中，提取其样本DNA；(3)配置PCR反应体系，进行PCR反应；(4)对于PCR反应产物进行目标片段的检测；(5)对于有目的片段的PCR产物进行PCR产物...

【专利技术属性】
技术研发人员：盖中涛，张磊，刘毅，杨俊杰，王莹，
申请(专利权)人：济南市儿童医院山东大学齐鲁儿童医院，
类型：发明
国别省市：山东,37