一种肿瘤细胞检测方法技术

本发明专利技术提供一种肿瘤细胞检测方法，包括如下步骤：1）制备环状模板；2）向肿瘤细胞悬液中加入适体‑引物复合探针，反应得到结合有适体‑引物复合探针的细胞团，配制含有步骤1）所得环状模板的滚环扩增体系，将所述细胞团与滚环扩增体系混合，使得适体‑引物复合探针识别并触发靶细胞表面滚环扩增，得反应液；3）测定步骤2）所得反应液的比色信号。本发明专利技术成功构建了可用于检测实际样本中肿瘤细胞的比色分析法，应用本发明专利技术对稀有事件的肿瘤细胞进行检测，具有灵敏度高、特异性好、抗干扰能力强等特点。

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤细胞检测方法
本专利技术涉及细胞检测
，特别是涉及一种肿瘤细胞检测方法。
技术介绍
循环肿瘤细胞(circulatingtumorcells，CTCs)是指原发的实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞；播散肿瘤细胞(disseminatedtumorcells,DTCs)是指播散到体液如骨髓、腹水、胸腔积液、尿液等中的肿瘤细胞。CTCs/DTCs检测作为一种新型无创的非侵入性检测方式越来越得到重视。其在肿瘤复发与转移、临床评估、个体化治疗及预后观察等方面的应用价值已逐渐体现出来。2007年美国临床肿瘤学会还将CTCs和DTCs作为乳腺癌的新型肿瘤标志物，并引入到国际肿瘤分期系统。对于一些难以获得组织标本的恶性肿瘤类型，如肺癌、乳腺癌、结肠癌等，CTCs/DTCs检测是唯一可获得的肿瘤细胞的方式。因此，CTCs/DTCs的检测可作为肿瘤的早期诊断、预后评估及个体化治疗的重要疾病标志物。但是，CTCs和DTCs的共同特点是往往在外周血和体液中含量非常低。目前，临床检测DTCs方法主要是化学染色、免疫组化及流式细胞技术。化学染色灵敏度低，无法满足临床对CTCs及稀有DTC本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肿瘤细胞检测方法，其特征在于，包括如下步骤：1)制备环状模板；2)向肿瘤细胞悬液中加入适体‑引物复合探针，反应得到结合有适体‑引物复合探针的细胞团，配制含有步骤1)所得环状模板的滚环扩增体系，将所述细胞团与滚环扩增体系混合，使得适体‑引物复合探针识别并触发靶细胞表面滚环扩增，得反应液；3)测定步骤2)所得反应液的比色信号。

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤细胞检测方法，其特征在于，包括如下步骤：1)制备环状模板；2)向肿瘤细胞悬液中加入适体-引物复合探针，反应得到结合有适体-引物复合探针的细胞团，配制含有步骤1)所得环状模板的滚环扩增体系，将所述细胞团与滚环扩增体系混合，使得适体-引物复合探针识别并触发靶细胞表面滚环扩增，得反应液；3)测定步骤2)所得反应液的比色信号。2.根据权利要求1所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤1)中，环状模板序列如SEQIDNO.1所示。3.根据权利要求1所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤1)中，包括环状模板的连接反应和剪切纯化。4.根据权利要求3所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤1)中，环状模板的连接反应包括：将引物链与锁式探针结合，得到环状模板，所述锁式探针为5’磷酸化的锁式探针，其序列如SEQIDNO.1所示。5.根据权利要求4所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤1)中，引物链序列如SEQIDNO.2所示。6.根据权利要求1所述的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，步骤2)中，适体-引物复合探针序列如SEQIDNO.3所示；和/或，步骤2)中，适体-引物复合探针识别结合靶细胞时，将肿瘤细胞悬液与适体...

【专利技术属性】
技术研发人员：程伟，丁世家，徐璐璐，李剑波，袁睿，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：重庆,50