一种mRNA的正义链的整体扩增方法技术

本发明专利技术涉及一种整体扩增mRNA的正义链的方法，解决了常规的mRNA提取方法不足以满足实验所需用量的问题，步骤如下：a.合成12种寡核苷酸，每种寡核苷酸的序列为4部分，从5’端开始，第1部分为一段通用模板序列，作为后续扩增反应时引物结合的模板，第2部分为A、C两个碱基，第3部分为重复T寡核苷酸，第4部分2个碱基为G或A或C与G或A或C或T的随机组合；b.将12种寡核苷酸混合；c.将总RNA与寡核苷酸混合液、逆转录酶和逆转录缓冲液混合，进行逆转录反应，并在反应过程中间阶段加入寡核苷酸Cap，继续进行逆转录反应；d.逆转录产物为模板，寡核苷酸P1、P2为引物进行扩增。

【技术实现步骤摘要】
一种mRNA的正义链的整体扩增方法
本专利技术涉及RNA的扩增
，具体指一种mRNA的正义链的整体扩增方法。
技术介绍
众所周知，信使核糖核酸(MessengerRNA，mRNA)是从脱氧核糖核酸(DNA)转录合成的带有遗传信息的一类单链核糖核酸(RNA)，它在核糖体上作为蛋白质合成的模板指导蛋白质合成，决定肽链的氨基酸排列顺序，是承载生物遗传信息的重要载体，是参与生命活动多重要分子。但是，当科学研究过程中需要获得非常大量的mRNA时，或可用于提取mRNA的标本量极少时，常规的mRNA提取方法不足以满足实验所需用量，这种情况下，为了获得足够量的mRNA，需要对从标本中提取获得的mRNA进行整体扩增。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种整体扩增mRNA的正义链的方法，在保证mRNA分子完整性的同时解决了常规的mRNA提取方法不足以满足实验所需用量的问题。本专利技术的目的通过以下技术方案实现：一种整体扩增mRNA的正义链的方法，包括如下步骤：a.分别合成以下寡核苷酸：12种寡核苷酸Oligo-1～Oligo-12，其每种寡核苷酸的序列分为4个部分，从5’端开始，第1部分为一段通用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种mRNA的整体扩增方法，其特征在于包括如下步骤：a.分别合成以下寡核苷酸：12种寡核苷酸Oligo‑1～Oligo‑12，其每种寡核苷酸的序列分为4个部分，从5’端开始，第1部分为一段通用模板序列，可以作为后续扩增反应时引物结合的模板，第2部分为A、C两个碱基，第3部分为重复T寡核苷酸，第4部分2个碱基为G或A或C与G或A或C或T的随机组合；寡核苷酸Cap，其寡核苷酸的序列分为3个部分，从5’端开始，第1部分为RNA聚合酶的启动子序列，第2部分为C，第3部分为GGG；寡核苷酸P1，其寡核苷酸的序列分为3个部分，从5’端开始，第1部分为一段通用模板序列，第2部分为RNA聚合酶的启动子序列，第...

【技术特征摘要】
1.一种mRNA的整体扩增方法，其特征在于包括如下步骤：a.分别合成以下寡核苷酸：12种寡核苷酸Oligo-1～Oligo-12，其每种寡核苷酸的序列分为4个部分，从5’端开始，第1部分为一段通用模板序列，可以作为后续扩增反应时引物结合的模板，第2部分为A、C两个碱基，第3部分为重复T寡核苷酸，第4部分2个碱基为G或A或C与G或A或C或T的随机组合；寡核苷酸Cap，其寡核苷酸的序列分为3个部分，从5’端开始，第1部分为RNA聚合酶的启动子序列，第2部分为C，第3部分为GGG；寡核苷酸P1，其寡核苷酸的序列分为3个部分，从5’端开始，第1部分为一段通用模板序列，第2部分为RNA聚合酶的启动子序列，第3部分为C；寡核苷酸P2；其寡核苷酸的序列，从5’端开始，为RNA聚合酶的启动子序列；b.将步骤a制备的12种寡核苷酸Oligo-1～Oligo-12分别取相同摩尔量混合，配制成每种寡核苷酸浓度含量相同的寡核苷酸混合液；c.将从标本中提取的总RNA与步骤b制得的寡核苷酸混合液、逆转录酶和逆转录缓冲液混合，进行逆转录反应，并在反应过程总时间的中间点加入步骤a制备的寡核苷酸Cap，继续进行逆转录反应；d.以步骤c获得的逆转录产物为模板，以步骤a中制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨麒巍，张桂珍，杜珍武，宋旸，赵冠杰，任明，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22