从人微量B细胞中扩增人抗体重链及轻链基因片段的方法技术

技术编号:1736751 阅读:309 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及从人微量B细胞中扩增人抗体重链及轻链基因片段的方法,该方法应用独创的RT-Nest-PCR技术和基于生物信息学基础上的集群引物的设计,从人的微量(10个)B细胞中扩增出人抗体重链和轻链可变区基因片段能涵盖目前所有已报导的人抗体的基因。本发明专利技术有利于克隆,表达和重组出人抗各类肿瘤相关抗原和传染病抗原的人单克隆抗体,是一条创新的用基因工程方法研制人单克隆抗体的关键技术。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
从人微量B细胞中扩增人抗体重链及轻链基因片段的方法,其特征在于,该方法包括以下步骤: (1)从人全血中分离B细胞及B细胞的保存 1)人全血预处理 EDTA或柠檬酸进行抗凝处理的人全血加入二倍体积的缓冲液(含有0.1%BSA ,2mM EDTA的PBS缓冲液)离心后,去上清,在血细胞中加入等体积上述溶液混匀后,用于B细胞的分离; 2)人B细胞的分离 用包被抗CD19抗体的磁珠方法从人全血中分离人B细胞; 3)人B细胞的保存 分离得到的B细 胞用冻存液(含10%胎牛血清,10%DMSO的DMEM)冻存于液氮中,该冻存方...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:龚祖埙吴鸿菲吴建华张祖传张奉武沈菊英姚亚媄
申请(专利权)人:上海凯勃生物技术有限公司
类型:发明
国别省市:31[中国|上海]

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