一种马立克氏病毒的悬浮培养方法技术

本发明专利技术公开了一种马立克氏病毒的悬浮培养方法，包括步骤：1)鸡胚源DF‑1细胞系的传代与培养；2)细胞毒种的繁殖：用稀释液将马立克氏病毒种稀释，将病毒和DF‑1细胞一起接入含细胞培养液的培养瓶中培养，收获病毒作为毒种；3)制苗用病毒的吸附培养：将毒种稀释为病毒液，和新的鸡胚源DF‑1细胞一起接入含有微载体和悬浮培养液的培养瓶中，进行悬浮吸附培养；4)病毒的增殖培养及收获：弃去悬浮培养液，加入病毒增殖培养液进行悬浮增殖培养；当接入的细胞病变率达80％以上时，收获病毒液并保存；该方法用微载体结合悬浮的方式对马立克氏病毒进行培养，克服了传统疫苗生产受制于鸡胚的供应的缺点，避免了感染外源病毒的风险。

【技术实现步骤摘要】
一种马立克氏病毒的悬浮培养方法
本专利技术涉及一种马立克氏病毒的悬浮培养方法，属于兽用生物制品

技术介绍
马立克氏病(Marek’sdisease，MD)是由疱疹病毒科、细胞结合性马立克氏病病毒(Marek’sdiseasevirus，MDV)引起的一种高度接触传染性、淋巴组织增生性肿瘤疾病。1907年，匈牙利病理学家JosephMarek首先报道此病。1970年随着疫苗的使用，该病首次得以控制。直到目前，疫苗接种仍是预防MD最有效的方式之一，而使用疫苗近50年来，传统疫苗的生产方式一直都是以原代鸡胚成纤维细胞作为制苗材料，采用转瓶的方式培养。但是传统的马立克氏病毒培养方法存在诸多缺陷：原代细胞制备费时费力、操作程序繁琐、易污染外源病毒、十分依赖SPF种胚的供应、且疫苗产量及质量不稳定。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种马立克氏病毒的悬浮培养方法，该方法用微载体结合悬浮的方式对马立克氏病毒进行培养，操作简便，稳定性强的特点，同时克服了传统疫苗生产受制于鸡胚的供应的缺点，避免了感染外源病毒的风险。实现本专利技术的目的可以通过采取如下技术方案达到：本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种马立克氏病毒的悬浮培养方法，其特征在于包括以下步骤：1)鸡胚源DF‑1细胞系的传代与培养：以鸡胚源DF‑1细胞系作为制备病毒用细胞；将鸡胚源DF‑1细胞经胰酶‑EDTA细胞分散液消化成单个均匀细胞，然后置于细胞生长液继续培养，当细胞长成单层时，用于继续传代或接种病毒；2)细胞毒种的繁殖：用稀释液将马立克氏病毒种稀释，将病毒和经步骤1)处理的DF‑1细胞一起接入含细胞培养液的培养瓶中进行培养，当细胞病变时收获细胞毒作为毒种；3)制苗用病毒的吸附培养：将从步骤2)得到的毒种稀释为病毒液，将病毒和新的鸡胚源DF‑1细胞一起接入含有微载体和悬浮培养液的培养瓶中，进行悬浮吸附培养；4)病毒的增殖培养...

【技术特征摘要】
1.一种马立克氏病毒的悬浮培养方法，其特征在于包括以下步骤：1)鸡胚源DF-1细胞系的传代与培养：以鸡胚源DF-1细胞系作为制备病毒用细胞；将鸡胚源DF-1细胞经胰酶-EDTA细胞分散液消化成单个均匀细胞，然后置于细胞生长液继续培养，当细胞长成单层时，用于继续传代或接种病毒；2)细胞毒种的繁殖：用稀释液将马立克氏病毒种稀释，将病毒和经步骤1)处理的DF-1细胞一起接入含细胞培养液的培养瓶中进行培养，当细胞病变时收获细胞毒作为毒种；3)制苗用病毒的吸附培养：将从步骤2)得到的毒种稀释为病毒液，将病毒和新的鸡胚源DF-1细胞一起接入含有微载体和悬浮培养液的培养瓶中，进行悬浮吸附培养；4)病毒的增殖培养及收获：弃去悬浮培养液，加入病毒增殖培养液进行悬浮增殖培养；当接入的细胞病变率达80％以上时，收获病毒液并保存。2.如权利要求1所述的马立克氏病毒的悬浮培养方法，其特征在于，所述马立克氏病毒为马立克氏病血清Ⅰ型CVI988/Rispens株、814株、血清Ⅱ型SB-1株、血清Ⅲ型火鸡疱疹病毒Fc-126株中的至少一种。3.如权利要求1所述的马立克氏病毒的悬浮培养方法，其特征在于，步骤2)中，接种病毒的...

【专利技术属性】
技术研发人员：温良海，李延鹏，陈瑞爱，赵兵，罗琼，
申请(专利权)人：华南农业大学，肇庆大华农生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44