一株用于防治对虾副溶血弧菌病的噬菌体及其扩培方法技术
Bacteriophage for preventing and controlling prawn Vibrio parahaemolyticus and its culture method
The present invention discloses a strain for phage control of Vibrio parahaemolyticus in prawn disease and its spreading cultivation method, the invention uses Whiteleg Shrimp Vibrio parahaemolyticus infection in seawater successfully screened a strong lytic phage and the phage titer up to 10
【技术实现步骤摘要】
一株用于防治对虾副溶血弧菌病的噬菌体及其扩培方法
本专利技术属于生物
，涉及一株用于防治对虾副溶血弧菌病的噬菌体及其扩培方法。
技术介绍
目前控制、消除致病菌的主要手段仍是各种物理或化学的方法，包括各种抗生素的使用。物理或化学的方法都存在着明显的弊端。首先，物理的方法对各种致病菌的消除作用只能应用于相关领域的某一环节，不能实现整个领域所有环节的应用，其次，化学方法中的酸碱处理虽可以取得一定防治效果，但在有害菌形成生物膜后，这些方法的效果就极不理想；最后，抗生素虽然开始使用效果显著，但是长期使用，不仅会增强病原菌的抗药性，而且抑制有益菌群，最终不能有效地控制、消除致病菌。近年来，微生物生态制剂的研究开发受到各方关注，特别是噬菌体的研究受到人们的青睐。噬菌体自1896年被发现以来，因其高效裂解其宿主，且对人和动物无害，而备受关注。噬菌体是一种细菌病毒，它能够对宿主细菌产生特异性的裂解作用，并在细菌培养板上形成空斑，因而将其命名为噬菌体。噬菌体分为温和噬菌体和烈性噬菌体，其中烈性噬菌体对宿主菌具有很强的裂解效率，其复制效率和繁殖能力远远高于宿主菌；烈性噬菌体在宿主...
【技术保护点】
一株用于防治对虾副溶血弧菌病的噬菌体，其特征在于包括如下步骤：步骤A：宿主菌的分离纯化，本专利技术的副溶血弧菌从大量南美白对虾的病虾肠道中分离获得；步骤B：宿主菌的扩大培养，在NB或LB液体培养基中加入1‑5％的NaCl，121℃高压灭菌20min，冷却至室温，采用如下两种接种方法，第一种接种方法是单菌落接种，在无菌条件下挑取保种平板上的单菌落接种，发酵温度为28‑35℃，转速为50‑200rpm，发酵时间14‑18h；第二种接种方法是液体接种，加入培养基体积10‑20％的CFU为10
【技术特征摘要】
1.一株用于防治对虾副溶血弧菌病的噬菌体，其特征在于包括如下步骤：步骤A：宿主菌的分离纯化，本发明的副溶血弧菌从大量南美白对虾的病虾肠道中分离获得；步骤B：宿主菌的扩大培养，在NB或LB液体培养基中加入1-5％的NaCl，121℃高压灭菌20min，冷却至室温，采用如下两种接种方法，第一种接种方法是单菌落接种，在无菌条件下挑取保种平板上的单菌落接种，发酵温度为28-35℃，转速为50-200rpm，发酵时间14-18h；第二种接种方法是液体接种，加入培养基体积10-20％的CFU为106-108pfu/mL的副溶血弧菌菌液至NB液体培养基中进行发酵，发酵温度为28-35℃，转速为50-200rpm，发酵时间10-16h；步骤C：噬菌体分离，从大量海水中分离获得；步骤D：噬菌体扩培，对分离出来的噬菌体进行扩培；步骤E：将所得的发酵液，在2-10℃下1000-8000rpm离心5-20min，使得宿主菌沉降于底部，取上层澄清部分，即得噬菌体微生态制剂，其效价为1010-1012pfu/mL；步骤F：噬菌体用于防治对虾副溶血弧菌病的裂解生长曲线测定；步骤G：南美白对虾攻毒实验，取大小规格为50尾/斤的健康南美白对虾，每缸60尾，分别养殖在15个玻璃缸内，其中9个为实验缸，分为A、B、C组；剩余6个为对照缸，分为阴性对照D和空白对照E组，每组3个重复，每个玻璃缸内加120L盐度为25的海水；对虾染病的方法采用浸泡感染，即在28℃条件下，使用步骤B发酵好的副溶血弧菌菌液，根据菌液浓度和玻璃缸体积计算出每组需要加入菌液的体积，分别加入A、B、C和阴性对照D组，最终使玻璃缸内水体含菌量达...
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