一种用于制备感受态细胞的缓冲液及制备感受态细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种用于制备感受态细胞的缓冲液及制备感受态细胞的方法，属于生物技术领域。所述缓冲液为包括哌嗪‑1,4‑二乙磺酸、N,N‑(2‑羟乙基)‑2‑氨基乙磺酸、氯化钙、氯化钾和氯化锰的水溶液，所述缓冲液的pH值为6.0～7.0，所述缓冲液中哌嗪‑1,4‑二乙磺酸、N,N‑(2‑羟乙基)‑2‑氨基乙磺酸、氯化钙、氯化钾和氯化锰的浓度分别为5～30mM、3～20mM、5～25mM、50～300mM和10～50mM。本发明专利技术实施例提供的缓冲液，通过添加N,N‑(2‑羟乙基)‑2‑氨基乙磺酸能够增加细胞膜的通透性，从而使制备的感受态细胞的转化效率大大提高，且所得感受态细胞能够适用于长片段的转化，同时，本发明专利技术实施例提供的制备方法能够高效快速地制备感受态细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种用于制备感受态细胞的缓冲液及制备感受态细胞的方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种用于制备感受态细胞的缓冲液及制备感受态细胞的方法。
技术介绍
外源DNA转化受体菌的方法是分子生物学研究中最常用的方法之一，外源DNA包括质粒和连接载体。外源DNA必须转入适当的受体菌进行繁殖，才能获得大量的阳性重组子克隆或表达目的基因产物。现有的是将受体菌培养于LB平板培养基中，挑取单菌落接种于SOB(SuperOptimalBroth)摇瓶培养基中发酵，实现单菌落的繁殖，18℃振荡培养至OD600值为0.6，冰浴10min，4℃下离心10min，菌体悬浮于预冷的TB缓冲液中，冰浴10min，4℃下离心10min，菌体悬浮于预冷的TB缓冲液中，并加入1.5m浓度为7％的二甲亚砜，冰浴10min后，得到感受态细胞并分装保存。其中，TB缓冲液为包括哌嗪-1,4-二乙磺酸、氯化钙、氯化钾和氯化镁的水溶液，且TB缓冲液包括：浓度为10mM的哌嗪-1,4-二乙磺酸，浓度为15mM的氯化钙、浓度为250mM的氯化钾和浓度为55mM的氯化镁。TB缓冲液中的Ca2+的作用主要是破坏细胞膜上的脂质阵列，并与本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于制备感受态细胞的缓冲液，其特征在于，所述缓冲液为包括哌嗪‑1,4‑二乙磺酸、N,N‑(2‑羟乙基)‑2‑氨基乙磺酸、氯化钙、氯化钾和氯化锰的水溶液，所述缓冲液的pH值为6.0～7.0，所述缓冲液中哌嗪‑1,4‑二乙磺酸、N,N‑(2‑羟乙基)‑2‑氨基乙磺酸、氯化钙、氯化钾和氯化锰的浓度分别为11～30mM、3～20mM、5～25mM、50～300mM和10～50mM。

【技术特征摘要】
1.一种用于制备感受态细胞的缓冲液，其特征在于，所述缓冲液为包括哌嗪-1,4-二乙磺酸、N,N-(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸、氯化钙、氯化钾和氯化锰的水溶液，所述缓冲液的pH值为6.0～7.0，所述缓冲液中哌嗪-1,4-二乙磺酸、N,N-(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸、氯化钙、氯化钾和氯化锰的浓度分别为11～30mM、3～20mM、5～25mM、50～300mM和10～50mM。2.根据权利要求1所述的缓冲液，其特征在于，所述缓冲液中哌嗪-1,4-二乙磺酸、N,N-(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸、氯化钙、氯化钾和氯化锰的浓度分别为12～20mM、5～15mM、10～20mM、150～250mM和30～40mM，所述缓冲液的pH值为6.7。3.根据权利要求2所述的缓冲液，其特征在于，所述缓冲液中哌嗪-1,4-二乙磺酸、N,N-(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸、氯化钙、氯化钾和氯化锰的浓度分别为15mM、10mM、15mM、200mM和35mM。4.一种采用如权利要求1所述的缓冲液制备感受态细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：繁殖受体菌的单克隆并离心，得到第一沉淀物；将所述第一沉淀物用所述缓冲液重悬，得到第一重悬菌液；将所述第一重悬液冰浴后离心，去上清液，得到第二...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑瑜，刘晶晶，常文文，
申请(专利权)人：江汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42