一种疫苗组合物、试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种疫苗组合物，其中，该疫苗组合物包括免疫有效量的犬副流感病毒抗原及免疫有效量的犬支气管败血波氏杆菌抗原以及佐剂；其中，该犬副流感病毒抗原选自灭活的犬副流感病毒抗原或F蛋白、HN蛋白、M蛋白、NP蛋白、P蛋白、L蛋白中的至少一种，该支气管败血波氏杆菌抗原选自灭活的犬支气管败血波氏杆菌抗原或p68蛋白。本发明专利技术的疫苗组合物较现有技术中的疫苗免疫效果更好且没有副反应，降低了兽医工作者或接触者感染的风险。本发明专利技术还涉及一种试剂盒，所述试剂盒含有灭活的犬副流感病毒抗原或亚单位抗原以及减毒的活的犬支气管败血波氏杆菌抗原或减毒的活的犬副流感病毒抗原以及灭活的犬支气管败血波氏杆菌抗原或p68蛋白。

Vaccine composition, reagent kit, preparation method and application thereof

The present invention provides a vaccine composition, wherein the composition comprises an effective amount of vaccine immune canine parainfluenza virus antigen and immune effective amount of canine Bordetella bronchiseptica antigen and adjuvant; wherein, at least one of the canine parainfluenza virus antigen from inactivated canine parainfluenza virus antigen protein, or F HN protein, M protein, NP protein, P protein, L protein, the Bordetella bronchiseptica antigen from inactivated canine Bordetella bronchiseptica antigen or P68 protein. The vaccine composition of the invention has better immunity effect than the prior art vaccine, and has no side effect, thereby reducing the risk of infection among veterinary workers or contacts. The invention also relates to a kit, the kit containing canine parainfluenza virus antigen inactivated or subunit antigen and attenuated live canine Bordetella bronchiseptica antigen or attenuated live canine parainfluenza virus antigen and inactivated canine Bordetella bronchiseptica antigen or P68 protein.

【技术实现步骤摘要】
一种疫苗组合物、试剂盒及其制备方法和应用
本专利技术属于兽药领域，具体涉及一种含有犬副流感病毒抗原及犬支气管败血波氏杆菌抗原的疫苗组合物，试剂盒，以及其制备方法和应用。
技术介绍
犬传染性支气管炎(CanineInfectiousTracheobronchitis,ITB)又称犬窝咳(Kennelcough)，是犬的一种急性高度接触性呼吸道传染病，具有高传染性、危害严重、影响范围广、易引发其他高致死性病原体感染等特点，仅在甘肃省2004-2009年的调查中该病的整体发病率高达34.26％(卢旺银.甘肃省犬窝咳的流行病学调查与防治.畜牧兽医杂志,2010,29(3):49-52)。该病主要引起幼犬突发性阵发性咳嗽并伴有不定量的鼻腔分泌物，常于春秋季节多发，由于犬群中一旦发病，很快引起整窝幼犬发病、咳嗽，故被称为“犬窝咳”。目前，普遍认为该病主要是由犬副流感病毒(Canineparainfluenzavirus，CPIV)、犬支气管败血波氏杆菌(CanineBordetellabronchiseptica，或Bordetellabronchisepticaindogs,Bb)病原定殖在鼻腔、喉、气管、支气管等部位而引起(Ettinger,StephenJ.,Feldman,EdwardC.Texkbookofveterinaryinternalmedicine(4thEdition).1995,WBSaunderscompany)。CPIV属于副粘液病毒亚科副粘病毒属，是单股负链RNA病毒，可感染各种年龄、性别的犬科动物，特别是幼龄犬，主要通过病犬的眼分泌物、唾液、呼吸道分泌物等散播，经呼吸道途径感染，通过损坏犬的上呼吸道组织，引起干咳、尖咳、鼻塞等症状，严重者会引起犬的支气管炎和支气管肺炎，并给其它病原体的感染创造条件。Bb为波氏杆菌属成员之一，为一种革兰氏阴性、需氧球杆菌，是在患有支气管炎的犬中最常分离出的细菌，易感染不同品种、年龄、性别的犬科动物，尤其易感4-12周龄犬，并且已有文献报道该细菌可由犬传染给其他种类动物如猫(DwightCH,NigelJM,RichardLW,etal.Veterinarymicrobiology(2ndEdition).2004,Blackwellpublishing)。该菌潜伏期有2-14日，如不与其他病原体共同感染作用，此菌的临床症状通常会持续10日，然而即使感染症状已消失，但此细菌可继续在自然环境中生存6-14周，期间可再传染至易感动物。此菌通过鼻液、唾液、呼吸道分泌物等传播，可通过直接或间接接触感染。此菌感染的临床症状包括黏液鼻塞、深咳、尖咳、干咳、不适，在运动或情绪激动时会加重。若感染第二病毒原体，经常会引起严重支气管肺炎。国内家庭饲养宠物的数量与日俱增，据不完全统计我国目前仅宠物犬的数量已超过1.5亿只，在许多经济发达城市的宠物数量与居民比例为1:10。因此，对宠物的健康要求越来越高。由于现有疫苗保护率不高，免疫效果不理想，究其原因是因为个别疫苗毒种的免疫原性不强，有的甚至存在毒性恢复、毒力返强、副反应等现象(见中国专利CN103153337A、CN1876181A)。因此，急需研制更为安全有效的抗犬窝咳的疫苗制品。专利申请CN102343088A公开了一种犬传染性气管支气管炎二联活疫苗及其制备方法，利用分离得到的有较好免疫原性的犬副流感病毒及犬支气管败血波氏菌，纯化后进行传代致弱，获得弱毒株CPIV-CY-c株与菌株Bb-SD25d，作为生产用毒株，制备出二联活疫苗。然而其存在毒性恢复、毒力返强的危险。专利申请CN101035558A公开了对抗布拉迪斯拉发钩端螺旋体和其他病原体的多联犬疫苗，含犬支气管败血波氏杆菌p68蛋白与其他多种犬病毒的联苗。然而该专利技术针对犬多种疾病，不能针对犬窝咳(2种疾病)进行针对性治疗。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种疫苗组合物及其制备方法和应用，该疫苗组合物可以预防和/或治疗犬窝咳。本专利技术涉及一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫有效量的犬副流感病毒抗原及免疫有效量的犬支气管败血波氏杆菌抗原以及兽医学上可接受的载体；其中，所述犬副流感病毒抗原选自灭活的犬副流感病毒抗原或F蛋白、HN蛋白、M蛋白、NP蛋白、P蛋白、L蛋白中的至少一种，所述犬支气管败血波氏杆菌抗原选自灭活的犬支气管败血波氏杆菌抗原或p68蛋白。本专利技术另一方面涉及一种试剂盒，所述试剂盒含有犬副流感病毒抗原及犬支气管败血波氏杆菌抗原以及佐剂；其中，所述犬副流感病毒抗原为灭活的犬副流感病毒抗原或F蛋白、HN蛋白、M蛋白、NP蛋白、P蛋白、L蛋白中的至少一种，所述犬支气管败血波氏杆菌抗原为减毒的活的犬支气管败血波氏杆菌抗原；或所述犬副流感病毒抗原为减毒的活的犬副流感病毒抗原，所述犬支气管败血波氏杆菌抗原为灭活的犬支气管败血波氏杆菌抗原或p68蛋白。本专利技术另一方面涉及本专利技术的疫苗组合物的制备方法。本专利技术另一方面涉及本专利技术的试剂盒的制备方法。本专利技术还涉及所述的疫苗组合物在制备预防和/或治疗犬传染性支气管炎的药物中的应用。本专利技术还涉及所述的试剂盒在制备预防和/或治疗犬传染性支气管炎的药物中的应用。本专利技术所述疫苗组合物免疫后无副反应发生，且免疫效果优于现有二联活疫苗；且本专利技术疫苗组合物免疫后无发喷嚏、咳嗽、流鼻涕等临床症状，从而避免了将病原暴露给兽医工作者或接触者的可能，并降低了犬传染性支气管炎的发病率。具体实施方式以下说明本专利技术的实施方式。本专利技术主要涉及一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫有效量的犬副流感病毒抗原及免疫有效量的犬支气管败血波氏杆菌抗原以及兽医学上可接受的载体；其中，所述犬副流感病毒抗原选自灭活的犬副流感病毒抗原或F蛋白、HN蛋白、M蛋白、NP蛋白、P蛋白、L蛋白中的至少一种，所述犬支气管败血波氏杆菌抗原选自灭活的犬支气管败血波氏杆菌抗原或p68蛋白。术语“疫苗组合物”又称免疫原性组合物，是指一种含免疫原的制剂，包括如蛋白质、肽、全细胞、灭活的、亚单位或减毒的活的病毒或细菌，或者多糖，或其组合，其被施用来刺激受体对存在于免疫原性组合物中一种或多种抗原的体液和细胞免疫反应。免疫接种是施用疫苗组合物并在宿主中刺激对抗原的免疫或免疫原性反应的过程。优选的宿主为哺乳动物诸如犬。术语“免疫有效量”又称免疫保护量或产生免疫应答的有效量，为可在接受者体内有效诱导免疫应答的抗原量，该量足以预防或改善疾病的体征或症状，包括不利的健康影响或其并发症。所述免疫应答可能足以用于诊断目的或其它试验，或可能适合用于预防疾病的征兆或症状，包括由病原体引起的感染所造成的不利的健康结果或其并发症。体液免疫力或由细胞介导的免疫力或此二者均可被诱导。动物对免疫原性组合物的免疫应答可通过例如测量抗体效价、淋巴细胞增殖分析而间接评估，或在以野生型毒株攻击后通过监测征兆或症状来直接评估，而该由疫苗提供的保护性免疫力可通过测量例如受试者的临床征兆如死亡率、发病率的减少、温度数值、受试者总体生理状况及总体健康和表现来评估。所述免疫应答可包括但不限于诱导细胞性和/或体液免疫力。术语“犬副流感病毒抗原”是指至少含有一种犬副流感病毒(Caninep本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫有效量的犬副流感病毒抗原及免疫有效量的犬支气管败血波氏杆菌抗原以及兽医学上可接受的载体；其中，所述犬副流感病毒抗原选自灭活的犬副流感病毒抗原或F蛋白、HN蛋白、M蛋白、NP蛋白、P蛋白、L蛋白中的至少一种，所述犬支气管败血波氏杆菌抗原选自灭活的犬支气管败血波氏杆菌抗原或p68蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括免疫有效量的犬副流感病毒抗原及免疫有效量的犬支气管败血波氏杆菌抗原以及兽医学上可接受的载体；其中，所述犬副流感病毒抗原选自灭活的犬副流感病毒抗原或F蛋白、HN蛋白、M蛋白、NP蛋白、P蛋白、L蛋白中的至少一种，所述犬支气管败血波氏杆菌抗原选自灭活的犬支气管败血波氏杆菌抗原或p68蛋白。2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述犬副流感病毒抗原选自灭活的犬副流感病毒抗原D008株抗原、以及F蛋白、HN蛋白、NP蛋白中的至少一种；所述犬支气管败血波氏杆菌抗原选自灭活的犬支气管败血波氏杆菌D-2株抗原、以及p68蛋白。3.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述犬副流感病毒抗原含量为所述减毒的活的犬副流感病毒抗原102.0-107.0TCID50/头份，灭活的犬副流感病毒抗原102.0-108.0TCID50/头份或亚单位抗原9-260μg/头份；以及所述犬支气管败血波氏杆菌抗原为减毒的活的犬支气管败血波氏杆菌抗原103.5-108.0CFU/头份，灭活的犬支气管败血波氏杆菌抗原107.0-1011.0CFU/头份或亚单位抗原8-300μg/头份；优选地，其中，所述犬副流感病毒抗原含量为所述减毒的活的犬副流感病毒抗原102.5-104.5TCID50/头份，灭活的犬副流感病毒抗原105.0-107.0TCID50/头份或亚单位抗原12-100μg/头份；以及所述犬支气管败血波氏杆菌抗原为减毒的活的犬支气管败血波氏杆菌抗原104.0-107.0CFU/头份，灭活的犬支气管败血波氏杆菌抗原108.0-1010.0CFU/头份或亚单位抗原10-120μg/头份。4.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述兽医学上可接受的载体为佐剂；其中，所述佐剂包括明矾、氢氧化铝、磷酸铝、磷酸钙，非离子嵌段聚合物表明活性剂、病毒颗粒、皂苷、蛋白体、免疫刺激复合物、蜗形体、季胺、阿夫立定avridine、维生素A、维生素E，RIBI佐剂系统、草分枝杆菌的细胞壁骨架、胞壁酰基二肽类MDP、三肽类MTP、单磷酰脂质A、卡介苗、热不稳定的大肠杆菌肠毒素、霍乱毒素、海藻糖二霉菌酸酯、CpG寡脱氧核苷酸，白介素IL-1、IL-2、IL-6、...

【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，韩水仲，田克恭，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41