对FAP和DR5特异性的双特异性抗体和化疗剂的组合疗法制造技术

本发明专利技术涉及包含至少一个对DR5特异性的抗原结合位点和至少一个对FAP特异性的抗原结合位点的双特异性抗体，对DR5特异性的抗体，特别是采用此类双特异性抗体和化疗剂的组合疗法，及这些组合疗法用于治疗癌症的用途。

Bispecific antibody combination therapy and chemotherapy agent of FAP and specific DR5

The present invention relates to contain at least one of the DR5 specific antigen binding sites and at least one of the FAP specific antigen binding sites of bispecific antibodies, antibodies specific for DR5, especially the use of combination therapy of such bispecific antibody and chemotherapeutic agents, and the combination therapy use for treating cancer.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对FAP和DR5特异性的双特异性抗体和化疗剂的组合疗法专利
本专利技术涉及采用包含对死亡受体5(DR5)特异性的第一抗原结合位点和对成纤维细胞活化蛋白(FAP)特异性的第二抗原结合位点的双特异性抗体和化疗剂的组合疗法，及这些组合疗法用于治疗癌症的用途。专利技术背景单克隆抗体是癌症治疗中有力的治疗剂，因为它们选择性靶向癌症细胞上差异表达的抗原。用激动性单克隆抗体靶向癌细胞上的TRAIL(TNF相关凋亡诱导性配体)死亡受体代表新一代单克隆抗体疗法，因为它们能够直接诱导靶定细胞凋亡。在结合TRAIL后，TNFR-SF家族的死亡受体诸如DR4和DR5变成三聚化。三聚化诱导外在的凋亡途径和复杂的事件级联，包括胱天蛋白酶活化，其最终导致杀死靶细胞。如果发生DR5超聚簇(即多个三聚体聚簇)的话，凋亡诱导得到进一步增强。虽然死亡受体在多种细胞类型上广泛表达，但是经外在途径的凋亡诱导局限于肿瘤细胞。既然激动性DR4或DR5结合抗体能够交联死亡受体及由此诱导凋亡，那么这些受体就是癌症疗法中感兴趣的靶物。至少八种死亡受体靶向性分子进入了临床开发且已经在临床试验中评估不同适应症的可能治疗，诸如晚期实体瘤，像结直肠或肺癌。另外，已经尝试治疗其它适应症，诸如淋巴瘤和多发性骨髓瘤。US2007/0031414和WO2006/083971中记载的完全人的DR5激动性抗体Drozitumab在高浓度在交联缺失下显示一些体外凋亡活性。然而，体内数据揭示了一种不同的作用模式：在FcγR突变型小鼠中(或当使用FcγR结合受到抑制的抗体变体时)，Drozitumab没有活性，指示这种分子的体内活性主要依赖于FcγR介导的交联。这种分子测试到临床II期，看来是安全的(直到20mg/kg没有达到MTD)，但是没有展现任何显著功效。EP1922337A中记载的Conatumumab是另一种完全人的DR5激动性抗体。Conatumumab的活性严格依赖于经Fc受体的交联。与Drozitumab形成对比，这种抗体是非配体阻断性的。同样，这种分子在临床试验中只显示非常有限的功效。嵌合DR5抗体LBY-135展现就交联依赖性活性和非配体阻断性特性而言与Conatumumab类似的特征，而且在单一疗法中没有展现任何显著功效。另外，LBY-135在部分登记I期试验的患者中显示免疫原性的迹象。DR4和DR5(TRAIL)的重组生产天然配体Dulanermin在临床试验中只显示有限的客观响应。天然配体的使用不知何故是不利的：TRAIL靶向多种受体，包括死亡受体和诱饵受体二者，因此，选择性堪忧。另外，TRAIL具有与单克隆抗DR抗体相比短得多的血液半衰期，这个因素影响剂量和时间表参数。与单克隆抗DR抗体相比，TRAIL很短的血液半衰期要求大和频繁的剂量。另外，重组TRAIL的生产非常困难且冗长。上文所述三种DR5激动性抗体和配体的开发均已中止。另外两种完全人的抗体，Mapatumumab(抗DR4)和Lexatumumab(抗DR5)，仍在开发中，虽然这些分子也没有在单一疗法中展现有希望的功效。Tigatuzumab是一种人源化DR5激动性抗体，据记载在体外在次级交联缺失下(在低浓度已经)有活性，这当然带来系统性毒性问题的风险。然而，正如所有其它记载的激动性DR5抗体，这种分子也至今没有在I/II期研究中展现令人信服的功效，而且最大耐受剂量MTD证明只有8mg/kg。用分子TAS266，一种四聚体DR5结合性纳米抗体(WO2011/098520)，从事通过靶向死亡受体来诱导凋亡的一种不同办法。由于DR5结合模块的四价构造，认为DR5交联与标准二价抗体相比升高，这可导致活性升高。然而，由于它们的尺寸较小，这些分子具有(与抗体相比)半衰期相当短的缺点。另外，既然这种四聚体分子没有靶向肿瘤，那么系统性毒性的风险升高。本申请的专利技术人已经将在双特异性抗体平台中组合DR5抗体Drozitumab与肿瘤抗原结合模块或肿瘤周围的基质中存在的抗原描述为实现两项效果的一种新办法：第一，可以将DR5结合抗体靶向肿瘤部位，这可避免潜在的系统性毒性问题(尤其当使用展现交联不依赖性活性的DR5抗体时)。第二，这种肿瘤或肿瘤基质靶向性模块然后也充当交联单元来诱导DR5超聚簇和随后的肿瘤部位特异性凋亡。已经使用靶向不同肿瘤类型的Drozitumab_scFv融合分子证明了基本概念(参见WO2011/039126)。已经提议能够结合DR5和人成纤维细胞活化蛋白(FAP；GenBank登录号AAC51668)的双特异性抗体。人FAP最初是使用单克隆抗体(mAb)F19(记载于WO93/05804，ATCC编号HB8269)在培养的成纤维细胞中鉴定的。在数个物种中发现了该蛋白质的同系物，包括小鼠(Niedermeyeretal.，IntJCancer71，383-389(1997)；Niedermeyeretal.，EurJBiochem254，650-654(1998)；GenBank登录号AAH19190)。FAP具有独特的组织分布：发现它的表达在超过90％的所有原发性和转移性上皮肿瘤，包括肺，结直肠，膀胱，卵巢和乳腺癌的反应性基质成纤维细胞上高度上调，而它通常在正常成年组织中缺失(Rettigetal.，ProcNatlAcadSciUSA85，3110-3114(1988)；Garin-Chesaetal.，ProcNatlAcadSciUSA87，7235-7239(1990))。后续报告显示FAP不仅在基质成纤维细胞中表达，而且在一些类型的上皮起源的恶性细胞中表达，而且FAP表达与恶性表型直接相关(Jinetal.，AnticancerRes23，3195-3198(2003))。上文所述常规DR5靶向性分子的活性依赖于Fc受体(FcR)介导的超聚簇，而且受肿瘤中的免疫浸润和活化状态影响(Li和Ravetch，PNAS2012；Wilson，CancerCell2011；WO2011/098520)。Fc/FcR相互作用可受生理性人IgG水平削弱。因此，常规DR5靶向性分子的活性常常限于少数浸润细胞(Moessner，Blood2010)。通过使用靶向DR5和FAP二者的双特异性抗体，敏感性肿瘤细胞的百分比可通过经FAP的超交联显著增大，而且针对DR5激动剂的内在抗性的风险降低。新颖的DR5结合模块只在与FAP交联后有活性，这可导致与DR5结合物Drozitumab和Tigatuzumab相比改善的安全性和毒性概况。至今已经测试的DR5激动剂在临床中是安全的，然而这些临床程序受到DR5靶向性分子的低功效阻碍。找到使用DR5激动性抗体靶向癌症的有效疗法仍然是本领域的一个问题。专利技术概述宽泛地，本专利技术涉及组合死亡受体5(DR5)靶向性抗原结合位点与靶向成纤维细胞活化蛋白(FAP)的第二抗原结合位点的双特异性抗体及它们与别的化疗剂组合的用途。依照本专利技术采用的双特异性抗体使得死亡受体变成交联的且对靶定的肿瘤细胞诱导凋亡。胜过常规死亡受体靶向性抗体的优势在于只在表达FAP的部位诱导凋亡的特异性以及这些双特异性抗体因诱导DR5超聚簇所致的更高效力。因而，在一个方面，本专利技术提供一种供作为组合疗法在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种供作为组合疗法在治疗癌症的方法中使用的包含至少一个对DR5特异性的抗原结合位点和至少一个对FAP特异性的抗原结合位点的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该双特异性抗体与选自伊立替康，多柔比星，奥沙利铂，5‑FU，MDM2抑制剂，Bcl‑2抑制剂，Abraxane，帕利他赛，吉西他滨，硼替佐米，环巴胺，PARP抑制剂，异磷酰胺或抗VEGF抗体的化疗剂组合使用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.08 EP 14188176.3;2015.01.15 EP 15151221.7;1.一种供作为组合疗法在治疗癌症的方法中使用的包含至少一个对DR5特异性的抗原结合位点和至少一个对FAP特异性的抗原结合位点的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该双特异性抗体与选自伊立替康，多柔比星，奥沙利铂，5-FU，MDM2抑制剂，Bcl-2抑制剂，Abraxane，帕利他赛，吉西他滨，硼替佐米，环巴胺，PARP抑制剂，异磷酰胺或抗VEGF抗体的化疗剂组合使用。2.权利要求1的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该化疗剂选自伊立替康，多柔比星，奥沙利铂，异磷酰胺或抗VEGF抗体。3.权利要求1或权利要求2的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该化疗剂选自抗VEGF抗体。4.权利要求1至3任一项的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该双特异性抗体与伊立替康组合使用。5.权利要求3或4的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该癌症为结直肠癌。6.权利要求1的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该双特异性抗体与吉西他滨和Abraxane组合使用。7.权利要求6的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该癌症为胰腺癌。8.权利要求1的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该双特异性抗体与多柔比星或异磷酰胺组合使用。9.权利要求8的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该癌症为肉瘤。10.权利要求1-4，6和8的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该癌症为结直肠癌，肉瘤，头和颈癌，鳞状细胞癌，乳腺癌，胰腺癌，胃癌，非小细胞肺癌，小细胞肺癌和间皮瘤。11.权利要求9或10的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该肉瘤为软骨肉瘤，平滑肌肉瘤，胃肠基质肿瘤，纤维肉瘤，骨肉瘤，脂肪肉瘤或恶性纤维组织细胞瘤。12.权利要求1至11任一项的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该双特异性抗体和该化疗剂一起施用，任选作为组合配制剂。13.权利要求1至11任一项的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该双特异性抗体和该化疗剂交替施用。14.权利要求13的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该化疗剂在该双特异性抗体之前施用。15.权利要求13的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该化疗剂在该双特异性抗体之后施用。16.权利要求1至15任一项的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该组合以约一周至三周的间隔施用。17.权利要求1至16任一项的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该对DR5特异性的抗原结合位点包含：(a)SEQIDNO.:1的重链互补决定区1(CDR1)；(b)SEQIDNO.:2的重链互补决定区2(CDR2)；(c)SEQIDNO.:3的重链互补决定区3(CDR3)；(d)SEQIDNO.:4的轻链互补决定区1(CDR1)；(e)SEQIDNO.:5的轻链互补决定区2(CDR2)；和(f)SEQIDNO.:6的轻链互补决定区3(CDR3)。18.权利要求1至17任一项的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该对FAP特异性的抗原结合位点包含：(a)SEQIDNO.:9的重链互补决定区1(CDR1)；(b)SEQIDNO.:10的重链互补决定区2(CDR2)；(c)SEQIDNO.:11的重链互补决定区3(CDR3)；(d)SEQIDNO.:12的轻链互补决定区1(CDR1)；(e)SEQIDNO.:13的轻链互补决定区2(CDR2)；和(f)SEQIDNO.:14的轻链互补决定区3(CDR3)。19.权利要求1至18任一项的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该对DR5特异性的抗原结合位点包含包含选自下组的氨基酸序列的可变重链和可变轻链：SEQIDNO.:7和SEQIDNO.:8。20.权利要求1至19任一项的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该对FAP特异性的抗原结合位点包含包含选自下组的氨基酸序列的可变重链和可变轻链：SEQIDNO.:15和SEQIDNO.:16。21.权利要求1至20任一项的供治疗方法中使用的与化疗剂组合的结合死亡受体5(DR5)和成纤维细胞活化蛋白(FAP)的双特异性抗体，其中该对DR5特异性的抗原结合位点包含：(a)SEQIDNO.:1的重链CDR1；(b)SEQIDNO.:2的重链CDR2；(c)SEQIDNO.:3的重链CDR3；(d)SEQIDNO.:4的轻链CDR1；(e)SEQIDNO.:5的轻链CDR2；(f)SEQIDNO.:6的轻链CDR3，且该对FAP特异性的抗原结合位点包含：(a)SEQIDNO.:9的重链CDR1；(b)SEQIDNO.:10的重链CDR2；(c)SEQIDNO.:11的重链CDR3；(d)SEQIDNO.:12的轻链CDR1；(e)SEQIDNO.:13的轻链CDR2；(f)SEQIDNO.:14的轻链CDR3。...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·弗里斯，O·柯莱特，M·马耶迪，K·瓦尔塔，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH