The present invention provides a blue latex microspheres labeled antibody preparation method and test strip, the invention selects norfloxacin as a target, will be added to the blue latex microspheres norfloxacin antibody solution prepared microspheres labeled antibody, was established for the determination of norfloxacin blue latex microspheres labeled immunochromatographic analysis method, and applied to the visualization of norfloxacin residues in animal derived food detection. Blue latex microspheres labeled antibodies of the invention comprises the preparation method and test strip, has the following advantages: (1) blue latex microspheres labeled antibodies of the invention comprises the preparation, use the marking materials blue latex microspheres, far less than the cost of gold chloride acid, reduce the detection cost of existing pesticides. (2) the test paper strip of the invention has little amount of antibody and saves cost. (3) the latex microsphere used by the invention has the advantages of good dispersibility, narrow particle size distribution, and bright color, etc..
【技术实现步骤摘要】
一种蓝色乳胶微球标记抗体的制备方法及其试纸条
本专利技术属于兽药残留快速检测领域,尤其是涉及一种蓝色乳胶微球标记抗体的制备方法及其制备的试纸条。
技术介绍
免疫层析分析方法具有灵敏度高、操作简便、省时省力、成本低廉,适用于大量样本的快速现场筛选等优势,近年来在兽药残留检测领域得到了快速的发展。胶体金具有生物兼容性好,不同粒径可呈现不同的颜色,易于通过改性提高信号强度等优势,成为免疫层析分析方法中最常用的标记材料。但是胶体金价格昂贵,批间差异大,不利于实现试纸条的批量生产。胶体金免疫层析技术对抗体、包被原等材料的要求比较高,而且胶体金的信号较弱,限制了其应用。乳胶微球又名聚苯乙烯微球,外观为蓝色液体状,其基本粒子尺寸在100-1000nm之间,表面功能化聚合物微球由于表面羧基、氨基或者羟基等活性基团的存在而易于与酶、蛋白质、核酸等结合反应,使之在生物、化学、材料、医学等方面应用广泛。当前,应用粒径可控、单分散性功能化聚合物微球已成为高分子材料领域的一个研究热点。单分散纳米级聚苯乙烯微球具有形貌规则、粒径均一、良好的表面反应能力和易于功能化等优点,在免疫技术和疾病早期诊断等领域具有很高的研究和应用价值。彩色乳胶微球具有分散性好、粒径分布窄、色彩鲜艳等特性,在免疫层析试纸技术中得到了有效的应用,蒋韬等建立口蹄疫O、Asia1分型彩色胶乳试纸条诊断方法,此免疫层析试纸条有很好的灵敏度,可检测到病毒含量为3.9×104LD50,特异性好,无交叉反应。荧光乳胶微球需要紫外激发,崔浩等基于免疫竞争层析法原理,建立了莱克多巴胺的荧光胶乳颗粒免疫层析快速检测技术,用于猪肉组 ...
【技术保护点】
一种蓝色乳胶微球标记抗体的制备方法,其特征在于:包括如下步骤,1)用mes缓冲液洗涤50mg﹒mL
【技术特征摘要】
1.一种蓝色乳胶微球标记抗体的制备方法,其特征在于:包括如下步骤,1)用mes缓冲液洗涤50mg﹒mL-1的蓝色乳胶微球,重复2次,于14000r/min,4℃,离心15min;将沉淀用mes缓冲液稀释至1~5mg﹒mL-1,4℃保存备用;2)取200μLmg﹒mL-1的蓝色乳胶微球,依次加入0.5~1mg﹒mL-1的EDC与NHS,在摇床反应15min;3)用磷酸盐缓冲液洗涤已活化乳胶微球,重复2~5次,于10000~14000r/min,4℃,离心15~20min,将沉淀用磷酸盐缓冲液稀释至1mg﹒mL-1,0~25℃保存备用;4)在搅拌速度50~150rpm条件下将诺氟沙星抗体加入到上述蓝色乳胶微球溶液中,在0~25℃下,于摇床反应1~2h,得蓝色乳胶微球标记抗体;5)加入1~5μL的20%BSA封闭15min;6)于14000r/min,4℃,离心15min;将最终沉淀用工作液重悬至40μL,4℃保存备用。2.根据权利要求1所述的蓝色乳胶微球标记抗体的制备方法,其特征在于:步骤1)中,所述缓冲液均为mes缓冲液,且其pH为5;步骤3)中,所述缓冲液均为磷酸盐缓冲液,且其pH为7.4;步骤6)中,所述工作液为100mL的水中加入1.21gTris,5g蔗糖,0.5gBSA,0.5gPVP,0.5gF68,0.5mLPEG200,0.5mLTritonX-100,1mL的吐温20配制的缓冲液。3.根据权利要求1或2所述的蓝色乳胶微球标记抗体的制备方法,其...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘冰,孙晓,生威,张燕,王硕,
申请(专利权)人:天津科技大学,
类型:发明
国别省市:天津,12
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