一种沙门氏菌快速检测方法技术

本发明专利技术公开了一种沙门氏菌快速检测方法，利用沙门氏菌特征酶的酶解特性，开发出沙门氏菌特征显色液体培养基，将选择性增菌与显色鉴定合二为一，利用TTB增菌液作为单一的增菌液配方，配合预增菌步骤，使增菌培养时间大大缩短，以此为基础建立了沙门氏菌快速检测方法，具有：不需特殊仪器设备，仅凭肉眼判断结果，可操作性强，适合于大通量样品的检测等优点。

A rapid method for detection of Salmonella

The invention discloses a method for rapid detection of Salmonella, Salmonella using characteristics of enzyme characteristics, the development characteristics of Salmonella chromogenic medium, the selective enrichment and color identification be made one broth as a single, broth formulation with TTB, with the pre enrichment step. The culturing time is greatly reduced, so as to establish a method for rapid detection of Salmonella, has no need of special devices, the naked eye judgment, strong operability, detection and advantages suitable for high flux sample.

【技术实现步骤摘要】
一种沙门氏菌快速检测方法
本专利技术涉及沙门氏菌检测用培养基成分配比，具体是一种沙门氏菌快速检测方法。
技术介绍
沙门氏菌（Salmonellaenterica）是一种全球性的人畜共患的食源性致病菌。全球每年有2亿人到13亿人感染非伤寒沙门氏菌，其中估计有300万人死亡。沙门氏菌菌型繁多，全球已经发现2500多个菌型以上，其中鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌对人类健康威胁最大。目前国内外的大多数研究一般使用人工接种法制备样品，其中的沙门氏菌往往较多，检出较容易。但在实际生产和产品中，沙门氏菌感染食品时数量往往是很低的，一般认为的极低数量为1～10cfu/50g（每50g样品中1～10个沙门氏菌)。虽然目前开发了很多快速检测方法，但是食品中的沙门氏菌常常数量极低且受亚致死性损伤，造成了漏检的情况发生，因此增菌步骤是不可缺少的。但现有的增菌步骤采用多种增菌液培养，检测周期长，造成增菌步骤长达四至五天。如国家知识产权局于2008.5.28公开了一件申请号为200710032778.0，名称为“沙门氏菌显色培养基、检测试剂盒及检测方法”的专利技术专利，通过加入0.1～0.5g细菌特异性酶的混合显色底物M-galactoside的显色培养基与增菌液A缓冲蛋白胨水培养基、B四硫磺酸钠煌绿增菌液组成；检测时，对食品样品进行前处理，先后利用增菌液A、B进行增菌培养，最后将二次增菌液接种至显色培养基上培养，若出现光滑、略凸起、直径1～3mm、边缘整齐的品红色菌落，说明样品存在沙门氏菌。因为使用了两种标准的增菌液，因而检测时间长，不利于快速出检测结果。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种沙门氏菌快速检测方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供以下步骤：（1）配制BPW培养基；（2）培养基冷却至室温后，对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟,关灯60min后使用；（3）预增菌；（4）配制TTB增菌液；（5）增菌；（6）配制沙门氏菌显色培养基平板。作为本专利技术进一步的方案：所述BPW培养基采用如下方法配备：称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15min，冷至常温。作为本专利技术进一步的方案：所述预增菌操作步骤的方法为：称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶，并及时盖上盖子，150rpm下振荡10min，于36℃±1℃培养18h左右。作为本专利技术进一步的方案：所述TTB增菌液采用如下方法配备：取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。作为本专利技术进一步的方案：所述增菌步骤操作方法为：轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于9mLTTB增菌液内，于42℃±1℃培养18h～24h。作为本专利技术进一步的方案：所述沙门氏菌显色培养基平板采用如下方法配备：取瓶内干粉4.75g，用100mL蒸馏水溶解，可按比例扩大或者缩小，随后混合加热至100℃，搅拌加热至完全溶解，冷却至50℃倒平板，最后，样品用画线或者涂布法接种，37℃培养24小时。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术利用沙门氏菌特征酶的酶解特性，开发出沙门氏菌特征显色液体培养基，将选择性增菌与显色鉴定合二为一，利用TTB增菌液作为单一的增菌液配方，配合预增菌步骤，使增菌培养时间大大缩短，以此为基础建立了沙门氏菌快速检测方法，具有：不需特殊仪器设备，仅凭肉眼判断结果，可操作性强，适合于大通量样品的检测等优点。本专利技术操作方便、特异性强、准确度高，检测周期由传统检测方法的4～7d缩短为2～3d，减少了大量人力、物力消耗，检测效率大大提高，可广泛应用于食品卫生、环境监测等领域。具体实施方式下面本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术实施例中，一种沙门氏菌快速检测方法，包括以下步骤：（1）配制BPW培养基；称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15min，冷至常温；（2）培养基冷却至室温后，对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟,关灯60min后使用；（3）预增菌；称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶，并及时盖上盖子，150rpm下振荡10min，于36℃±1℃培养18h左右。（4）配制TTB增菌液；取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。（5）增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于9mLTTB增菌液内，于42℃±1℃培养18h～24h。表1：培养现象（6）配制沙门氏菌显色培养基平板取瓶内干粉4.75g，用100mL蒸馏水溶解，可按比例扩大或者缩小，随后混合加热至100℃，搅拌加热至完全溶解，冷却至50℃倒平板，最后，样品用画线或者涂布法接种，37℃培养24小时。菌名菌号生长状况培养特征伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071良好品红色或者紫红色菌落大肠埃希氏菌ATCC25922生长蓝-绿色菌落其他革兰氏阴性菌生长/不生长无色对于本领域技术人员而言，显然本专利技术不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本专利技术的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本专利技术。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本专利技术的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本专利技术内。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种沙门氏菌快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤：S1：配制BPW培养基；S2：培养基冷却至室温后，对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟,关灯60min后使用；S3：预增菌；S4：配制TTB增菌液；S5：增菌；S6：配制沙门氏菌显色培养基平板。

【技术特征摘要】
1.一种沙门氏菌快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤：S1：配制BPW培养基；S2：培养基冷却至室温后，对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟,关灯60min后使用；S3：预增菌；S4：配制TTB增菌液；S5：增菌；S6：配制沙门氏菌显色培养基平板。2.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌快速检测方法，其特征在于：所述BPW培养基采用如下方法配备：称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15min，冷至常温。3.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌快速检测方法，其特征在于：所述预增菌操作步骤的方法为：称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶，并及时盖上盖子，150rpm下振荡10min，于36℃±1℃培养18h左右。4.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌快速检测方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：庞森，郭志刚，陈洋，徐海瑛，郑娟，李璐璐，李明，
申请(专利权)人：黄河科技学院，
类型：发明
国别省市：河南,41