本发明专利技术公开了一种VBNC状态沙门氏菌的诱导形成方法，其包括，将沙门氏菌悬浮于液体中，混合均匀，使其菌液浓度为107～108CFU/mL，将菌液在42℃～55℃恒温条件下超声波190～570W处理5～25min，检测是否诱导沙门氏菌进入VBNC状态。本发明专利技术拓展了对VBNC状态沙门氏菌的认识，为将超声波热技术更好的应用到食品加工、微生物控制及食品安全保障方面提供理论基础和技术支持。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品微生物培养及检测领域，更具体的说，涉及一种VBNC状态沙门氏菌的诱导形成方法。
技术介绍
微生物活的但非可培养(Viable but nonculturable，VBNC)状态是指其失去了在常规培养基上生长繁殖的能力，但在合适条件下又可复苏并恢复可培养性的一种特殊休眠状态。自1982年徐怀恕等首次在河口和海洋环境中发现生存但不可培养的霍乱弧菌(Vibr1 cholerae)和大肠杆菌(Escherichia coli)，直到 1985 年 Colwell 正式提出 VBNC概念，至今已在20个种属的90多种细菌中发现VBNC状态。在食品加工与储藏过程中，主要有物理胁迫因素和化学诱导因素两大类诱导细菌进入VBNC状态。物理胁迫因素主要包括在食品加工贮藏过程运用的低温、冷冻、干燥、辐照以及高压等技术。目前研究表明低温可以诱导几乎所有细菌进入VBNC状态。化学诱导因素主要是由于不当使用消毒剂和防腐剂导致，包括含氯消毒剂、二氧化硫和一些酸性防腐剂。食源性致病菌和腐败菌一旦进入VBNC状态，将对食品安全和公共健康安全非常不利。主要体现在潜伏期长、可控性差及潜在致病性。伤寒沙门氏菌是一种肠道杆菌，其感染造成的沙门氏菌疾病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一，容易引起人类胃肠道炎症。从食品安全角度来看，沙门氏菌引发果蔬汁、鲜切果蔬和蛋乳产品中毒事件，形成对世界范围内人类健康和安全的威胁。
技术实现思路
本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。鉴于上述和/或现有VBNC状态沙门氏菌的诱导形成方法中存在的问题，提出了本专利技术。因此，本专利技术的一个目的是提供一种沙门氏菌VBNC状态诱导形成的方法，尤其是一种诱导鼠伤寒沙门氏菌进入VBNC状态的方法。为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案:一种VBNC状态沙门氏菌的诱导形成方法，其包括，将沙门氏菌悬浮于液体中，混合均匀，使其菌液浓度为17?10 sCFU/mL，将菌液在42°C?55°C恒温条件下超声波190?570W处理5?25min，检测是否诱导沙门氏菌进入VBNC状态。作为本专利技术所述的VBNC状态沙门氏菌的诱导形成方法的一种优选方案，其中:所述检测是否诱导沙门氏菌进入VBNC状态，其方法为:将处理后的沙门氏菌悬浮液离心处理得到菌体沉淀，用无菌蒸馏水冲洗，保留菌体沉淀，然后用无菌水重悬，加入混合染色液进行染色，经过激光激发在激光共聚焦显微镜上观察，若有发绿色荧光的细胞存在，说明已经诱导其进入VBNC状态。作为本专利技术所述的VBNC状态沙门氏菌的诱导形成方法的一种优选方案，其中:所述沙门氏菌为鼠伤寒沙门氏菌。作为本专利技术所述的VBNC状态沙门氏菌的诱导形成方法的一种优选方案，其中:还包括，使沙门氏菌复苏的方法，所述使沙门氏菌复苏的方法是将处于VBNC状态的沙门氏菌菌液离心提取菌体沉淀物，用无菌生理盐水冲洗，用培养基重悬，培养即可得到复苏后浓度为17?10 8CFU/mL的菌液。作为本专利技术所述的VBNC状态沙门氏菌的诱导形成方法的一种优选方案，其中:所述离心提取菌体沉淀物，其离心条件为3500 X g，离心1min。作为本专利技术所述的VBNC状态沙门氏菌的诱导形成方法的一种优选方案，其中:所述用培养基重悬，其培养基包括:牛肉膏5.0g L \蛋白胨10.0gL \酵母抽提物5.0gL \葡萄糖 5.0gL \ 氯化钠 5.0gL \ pH 7.0。作为本专利技术所述的VBNC状态沙门氏菌的诱导形成方法的一种优选方案，其中:所述培养即可得到复苏后浓度为17?10 sCFU/mL的菌液中，其培养的条件为温度20?37°C，培养6?72h。作为本专利技术所述的VBNC状态沙门氏菌的诱导形成方法的一种优选方案，其中:还包括，检测沙门氏菌是否复苏的方法，其是将所述复苏后浓度为17?10 sCFU/mL的菌液，混合均匀，采用无菌检验方式取样，并均匀涂布在SS琼脂平皿上，倒置在生化培养箱中，于37°C培养24h，若长出黑褐色具有金属光泽的圆菌落，则表明已成功复苏。本专利技术的另一个目的是提供一种VBNC状态沙门氏菌的诱导形成方法在食品微生物检测领域的应用。本专利技术的有益效果:通过本专利技术能够在30min内将沙门氏菌诱导进入VBNC状态，并能在适宜的复苏条件下较为迅速的复苏。拓展了对VBNC状态沙门氏菌的认识，弥补传统微生物平板计数方法不能检测VBNC状态细菌而造成“漏检”的缺陷，规避了污染的风险，为将TS技术更好的应用到食品加工、微生物控制及食品安全保障方面提供理论基础和技术支持。【附图说明】图1为本专利技术实施例3中VBNC鼠伤寒沙门氏菌复苏示意图；图2为本专利技术实施例4中超声波热处理诱导鼠伤寒沙门氏菌进入VBNC状态并快速复苏示意图；图3为本专利技术实施例4中VBNC鼠伤寒沙门氏菌复苏示意图。【具体实施方式】为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合说明书附图对本专利技术的【具体实施方式】做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术，但是本专利技术还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似推广，因此本专利技术不受下面公开的具体实施例的限制。其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本专利技术至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。实施例1:采用超声波热处理诱导BPY培养基中鼠伤寒沙门氏菌进入VBNC状态取可培养菌数为17?10 8CFU/mL的鼠伤寒沙门氏菌(菌种编号CMCC50115)BPY培养基悬浮菌液60mL无菌操作转移到夹套烧杯中。连通循环水浴装置，设定温度为52°C。平衡处理5min，使夹套烧杯中心BPY菌液温度为52°C。立即开启超声波装置，采用190W功率。超声波热处理20min。取出样品，冷却到4°C。将处理前后的沙门氏菌悬浮液，用涡旋混合仪混合均匀后，采用无菌检验方式取样，并均匀涂布在SS琼脂平皿上，倒置在生化培养箱中，与37°C培养24h，若无任何沙门氏菌菌落生长，则初步认为已成功将其诱导进入VBNC状态。进而将TS处理后沙门氏菌悬浮液ImL离心处理得到菌体沉淀，并用无菌蒸馏水冲洗两次以上，保留菌体沉淀，最后用无菌水重悬。加入 30 μ L 的 LIVE/DEAD@BacLight? Bacterial Viability 试剂盒(MolecularProbes)中SYT09/PI混合染色液进行染色，经过488nm激光激发在激光共聚焦显微镜上观察，若有发绿色荧光的细胞存在(SYT09使所有细菌染色呈现绿色，而PI仅能使细胞壁破损的当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种VBNC状态沙门氏菌的诱导形成方法，其特征在于：包括，将沙门氏菌悬浮于液体中，混合均匀，使其菌液浓度为107～108CFU/mL，将菌液在42℃～55℃恒温条件下超声波190～570W处理5～25min，检测是否诱导沙门氏菌进入VBNC状态。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：廖红梅，蒋丽芬，丁占生，李群英，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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