一种没食子酰芍药苷单体的制备方法技术

本发明专利技术一种没食子酰芍药苷单体的制备方法，包括下述步骤：A提取：将赤芍干燥根粉碎成粗粉，以乙醇回流提取得浓浸膏；B萃取：浓浸膏以乙酸乙酯萃取得没食子酰芍药苷粗品；C制备：经纳米有机膜过滤、C18制备、乙酸乙酯萃取得到纯度≥98%的没食子酰芍药苷单体产品。该方法快速简便、成本低廉、可适用于产业化生产且得到的没食子酰芍药苷单体纯度高、性质稳定的没食子酰芍药苷单体的制备方法。

Preparation method of epigallocatechin paeoniflorin monomer

The invention relates to a galloyl paeoniflorin monomer preparation method comprises the following steps: A extraction: red peony root root dry crushed into coarse powder, with ethanol reflux extraction to obtain concentrated extract; B extraction: the concentrated extract with ethyl acetate extraction galloyl paeoniflorin crude; C prepared by nano organic film filtration, C18 preparation, extraction of ethyl acetate has a purity of not less than 98% galloyl paeoniflorin single product. The method is rapid, simple, low cost and suitable for industrial production, and the preparation method of paeoniflorin glycosides with high purity and stable nature of the paeoniflorin paeoniflorin monomer.

【技术实现步骤摘要】
一种没食子酰芍药苷单体的制备方法
本专利技术涉及一种中药活性成分的分离纯化方法，具体涉及从赤芍干燥根中提取分离没食子酰芍药苷的方法，属于中药分离纯化

技术介绍
没食子酰芍药苷英文名Galloylpaeoniflorin，CAS：122965-41-7，分子式为C30H32O15，分子量为632.57，结构式如下：。最近研究报告指出，赤芍提取物对中枢脑神经内钙离子浓度有影响。赤芍临床上应用在精神抑郁症、抗肿瘤、免疫调节、保护血管、护肝等，这些与传统中医理论所说的健脾补正气、增强免疫力相符合。而国外学者用赤芍的萃取物做的药理活性试验,发现赤芍具有中枢脑神经、免疫、通经、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤的作用。没食子酰芍药苷是赤芍中所具有的一类重要活性化合物，是赤芍的特征性成分。该化合物具有抑制花生四烯酸（arachidonicacidAA）生成酶的功能。在体外研究中发现，没食子酰芍药苷以剂量依赖性和时间依赖性的模式降低细胞增生率，并且诱导细胞发生凋亡。没食子酰芍药苷通过抑制线粒体功能，进而启动凋亡信号，最终细胞发生凋亡。因此，从原植物中提取分离高纯度没食子酰芍药苷，对药材质量控制指标、阐明其药理作用以及为新药开发寻找先导化合物具有重要的意义。公开号为CN104072550A的申请中公开了中药组合物植物药中间体中单萜及皂苷类成分的分离方法：依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取、大孔吸附树脂纯化得到30%及70%乙醇洗脱部位、取30%乙醇洗脱部位分离得到白芍苷R1纯品、芍药苷纯品、取70%乙醇洗脱部位分离得到芍药苷内酯纯品、芍药酮苷纯品、苯甲酰芍药苷纯品、没食子酰芍药苷纯品、甲基芍药苷纯品、人参皂苷Rg1纯品、人参皂苷Rc纯品、人参皂苷Rb1纯品、人参皂苷Rb2纯品等。该方法虽然能得到没食子酰芍药苷纯品，但是其没食子酰芍药苷纯品的纯度低，用其工艺是不能得到HPLC纯度达98.5%以上的单体。公开号为CN1799581，丹皮有效组分及制备方法，其活性成分的百分含量为芍药苷10～25%，没食子酰芍药苷40～55%，牡丹皮苷30～45%；制备方法是将丹皮药材粉碎后加热提取，将提取液浓缩成浸膏，与硅胶进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，将洗脱液浓缩干燥后得样品，用制备液相色谱继续分离得到的有效组分。分离纯化没食子酰芍药苷没有针对性，其分离过程复杂，不利于没食子酰芍药苷的稳定。
技术实现思路
本专利技术旨在克服现有技术没有一种针对没食子酰芍药苷单体的提取纯化工艺，且现有方法分离得到的没食子酰芍药苷单体纯度低，性质不稳定的的缺陷，提供一种快速简便、成本低廉、可适用于产业化生产且得到的没食子酰芍药苷单体纯度高、性质稳定的没食子酰芍药苷单体的制备方法。为解决上述技术问题，本专利技术通过以下技术方案实现：一种没食子酰芍药苷单体的制备方法，包括下述步骤：A、提取：将赤芍干燥根粉碎成粗粉，加入质量百分比浓度为65%～75%的乙醇溶液，回流提取，提取液过滤，除去乙醇，得在45℃～50℃下相对密度为1.30-1.40的浓浸膏；B、萃取：将步骤A所得的浓浸膏先加入水进行分散，得分散溶液，然后加入石油醚萃取，除去石油醚萃取液，水相加入乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩至干，得食子酰芍药苷粗品；C、制备：按没食子酰芍药苷粗品:甲醇=1g:3ml的比例，将步骤B得到的没食子酰芍药苷粗品用甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液再经C18反相色谱填料高压制备分离，收集相对应的色谱峰,回收甲醇，剩余水溶液加乙酸乙酯萃取，收集所得乙酸乙酯萃液，加入无水硫酸钠脱水后，在40℃～45℃条件下减压浓缩至无乙酸乙酯得白色固体，白色固体在45℃条件下减压干燥后即可得到没食子酰芍药苷单体产品。该步骤中的C18反相色谱填料高压制备分离中的高压为4～5MPa。在步骤A中，每1Kg赤芍加入乙醇10～15L。在步骤B中，加水分散时，水加入的体积为浓浸膏体积的10～15倍。在步骤B中，加石油醚萃取时，每次加入量为分散溶液体积的2～3倍，水相加入乙酸乙酯萃取时，每次乙酸乙酯的用量为所述水相体积的2～3倍。在步骤C中，所述纳米有机膜过滤的孔径为220nm～450nm。在步骤C中，所述C18反相色谱填料高压制备分离的流动相为甲醇和水按45:55的体积配比的溶剂；检测波长为220nm～230nm。在步骤C中，剩余水溶液加乙酸乙酯萃取时，每次萃取加入水溶液1～2倍的乙酸乙酯。上述步骤中的减压浓缩、减压干燥的压力可为-0.1MPa。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术将赤芍提取的浓浸膏特定的乙酸乙酯萃、甲醇溶解、纳米有机膜过滤，滤液再经C18反相色谱填料高压制备分离，制备得到纯度≥98%的没食子酰芍药苷单体产品。整个工艺过程操作简便、工艺稳定、成本低廉，且分离效率高、产品纯度高，适合工业化生产高纯度的没食子酰芍药苷单体。本专利技术通过长期实验研究，只需经过乙酸乙酯萃、甲醇溶解、纳米有机膜过滤，滤液再经C18反相色谱填料高压制备这几个步骤就能得到，纯度≥98%的没食子酰芍药苷单体产品，避免了现有技术在没食子酰芍药苷单体时制备过程长，操作步骤繁杂导致的没食子酰芍药苷单体稳定性差的问题。本专利技术将得到的没食子酰芍药苷粗品用甲醇溶解后用纳米有机膜过滤，保证高压液相制备的压力在4-5MPa的工作环境正常运行。所述C18反相色谱填料高压制备分离：A：甲醇B：水，A：B45:55V/V为流动相；检测波长220nm。附图说明图1是本专利技术实施例1没食子酰芍药苷单体产品的HPLC图谱。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的详细描述。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于下述实施例。下述各实施例中，终产品没食子酰芍药苷单体的纯度复检均采用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）法，色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:水（20:80）为流动相；柱温30℃；流速1.0ml/min；检测波长为220nm。实施例1一种没食子酰芍药苷单体的制备方法，包括下述步骤：A、提取：将赤芍干燥根250g粉碎成粗粉，加入质量百分比浓度为70%的乙醇溶液2.5L，回流提取3次，每次1.5小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1.32（50℃），体积160ml。B、萃取：将步骤A所得的浓浸膏加1.6L水分散，用石油醚萃取3次，除去石油醚萃取液，水相用乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得褐色的没食子酰芍药苷粗品20g；加石油醚萃取时，每次加入量为分散溶液体积的2倍，水相加入乙酸乙酯萃取时，每次乙酸乙酯的用量为所述水相体积的3倍。C、制备：将步骤B得到的褐色固体用60ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，所述纳米有机膜过滤的孔径为380nm；滤液再经C18反相色谱填料高压制备分离，A：甲醇B：水，A：B45:55V/V为流动相；检测波长220nm，收集相对应的色谱峰,回收甲醇，剩余水溶液以乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯相用无水硫酸钠脱水后，45℃减压浓缩至无乙酸乙酯即得白色固体，再于45℃减压干燥后即可得到没食子酰芍药苷0.8g，纯度≥98%。实施例2一种没食子酰芍药苷单体的制备方法，以赤芍为原料通过提取、萃取、制备得到没食子酰芍药苷单体，具体包括下述主要步本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种没食子酰芍药苷单体的制备方法，其特征在于:包括下述步骤：A、提取：将赤芍干燥根粉碎成粗粉，加入质量百分比浓度为65%～75%的乙醇溶液，回流提取，提取液过滤，除去乙醇，得在45℃～50℃下相对密度为1.30‑1.40的浓浸膏；B、萃取：将步骤A所得的浓浸膏先加入水进行分散，得分散溶液，然后加入石油醚萃取，除去石油醚萃取液，水相加入乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩至干，得食子酰芍药苷粗品；C、制备：按没食子酰芍药苷粗品:甲醇=1g:3ml的比例，将步骤B得到的没食子酰芍药苷粗品用甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液再经C18反相色谱填料高压制备分离，收集相对应的色谱峰，回收甲醇，剩余水溶液加乙酸乙酯萃取，收集所得乙酸乙酯萃液，加入无水硫酸钠脱水后，在40℃～45℃条件下减压浓缩至无乙酸乙酯得白色固体，白色固体在 45℃条件下减压干燥后即可得到没食子酰芍药苷单体产品。

【技术特征摘要】
1.一种没食子酰芍药苷单体的制备方法，其特征在于:包括下述步骤：A、提取：将赤芍干燥根粉碎成粗粉，加入质量百分比浓度为65%～75%的乙醇溶液，回流提取，提取液过滤，除去乙醇，得在45℃～50℃下相对密度为1.30-1.40的浓浸膏；B、萃取：将步骤A所得的浓浸膏先加入水进行分散，得分散溶液，然后加入石油醚萃取，除去石油醚萃取液，水相加入乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩至干，得食子酰芍药苷粗品；C、制备：按没食子酰芍药苷粗品:甲醇=1g:3ml的比例，将步骤B得到的没食子酰芍药苷粗品用甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液再经C18反相色谱填料高压制备分离，收集相对应的色谱峰，回收甲醇，剩余水溶液加乙酸乙酯萃取，收集所得乙酸乙酯萃液，加入无水硫酸钠脱水后，在40℃～45℃条件下减压浓缩至无乙酸乙酯得白色固体，白色固体在45℃条件下减压干燥后即可得到没食子酰芍药苷单体产品。2.根据权利要求1所述的一种没食子酰芍药苷单体的制备方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑皓元，徐仕银，吴涛，肖斌，刘丁，
申请(专利权)人：成都普思生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51