本发明专利技术公开一种赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的HPLC-ELSD含量测定方法，步骤为：1)供试品溶液的制备；2)对照品溶液的制备；3)检测，分别取2)中芍药苷对照品溶液、芍药内酯苷对照品溶液进行检测，检测条件为C18柱，以乙腈-0.05％甲酸水溶液为流动相进行等度洗脱，采用ELSD检测器进行HPLC-ELSD检测，分别绘制曲线得到标准曲线方程；取1)中供试品溶液，在上述条件下采用ELSD检测器进行HPLC-ELSD检测，将所得芍药苷和芍药内酯苷的峰面积带入标准曲线线性回归方程中，即可得出赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的含量。本方法的专属性、耐用性、精密度、准确度良好，适用于中药赤芍的整体质量控制。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及一种赤巧中巧药巧和巧药内醋巧的HPLC-ELSD含量测定方法，属于生 物医药领域。
技术介绍
赤巧为毛赏科植物巧药（PaeonialactifloraPall.)或川赤巧（Paeonia veitchiiLynch)的干燥根，有着悠久的用药历史。近几年研究发现，赤巧具有抗凝血、抗血 栓、抗动脉粥样硬化、保护屯、脏和肝脏、保护脑缺血所致脑损伤等广泛的药理作用，有着广 阔的应用前景。 赤巧主要有效成分为巧药巧、巧药内醋巧、径基巧药巧、苯甲酯巧药巧等单祗巧类 化合物，总称赤巧总巧，其中巧药巧和巧药内醋巧约占总巧的70%。巧药巧具有扩张血管、 镇痛镇静、抗炎抗溃瘍、解热解疫、利尿的作用，巧药内醋巧具有镇痛镇静、抗惊厥作用、对 免疫系统、对平滑肌作用、抗炎、抗病原微生物、护肝的功效。中药的临床使用多采用配伍， 作用形式是多祀点的而且是中药中的多种成分共同发挥药效。大多数研究者采用高效液相 色谱法值AD检测器）对赤巧的质量进行评价，DAD检测器要求物质有紫外发射基团，赤巧 中的巧药巧和巧药内醋巧运类巧类成分的紫外发射团处于近紫外区，摩尔吸光系数较小， 采用DAD对运两种物质的定量有一定的限制。
技术实现思路
针对现有技术不足，本专利技术目的是提供一种赤巧中巧药巧和巧药内醋巧的 HPLC-ELSD含量测定方法，该方法利用HPLC-ELSD法同时对赤巧中巧药巧和巧药内醋巧的 含量进行测定，对中药赤巧的整体质量进行更好的控制，并对赤巧临床用药奠定基础。 本专利技术采用的技术方案为： 一种赤巧中巧药巧和巧药内醋巧的HPLC-ELSD含量测定方法，包括如下步骤： 阳007] 1)供试品溶液的制备，将干燥赤巧的根粉碎，过筛，称取Ig赤巧粉末，用10mL70% 甲醇水溶液浸泡比，加热回流提取比，冷却称重，补足失重，取溶液过滤，取续滤液作为供 试品溶液； 2)对照品溶液的制备，精密称取巧药巧和巧药内醋巧，用70%甲醇水溶解至容量 瓶，定容，摇匀，分别得lOmg/mL的巧药巧对照品溶液和3mg/mL的巧药内醋巧对照品溶液； 扣检测，分别取。中巧药巧对照品溶液、巧药内醋巧对照品溶液进行检测，检测 条件为Cis柱，W乙腊-0. 05%甲酸水溶液为流动相进行等度洗脱，采用化SD检测器进行 HPLC-ELSD检测，分别计算同一保留时间下的峰面积，W巧药巧含量X为横坐标，峰面积y为 纵坐标绘制标准曲线，得到巧药巧的标准曲线方程；W巧药内醋巧含量X为横坐标，峰面积 y为纵坐标绘制标准曲线，得到巧药内醋巧的标准曲线方程；取1)中供试品溶液在高效液 相色谱检测条件为Cis柱，W乙腊-0. 05%甲酸水溶液为流动相进行等度洗脱，采用化SD检 测器进行HPLC-ELSD检测，将所得巧药巧和巧药内醋巧的峰面积带入标准曲线线性回归方 程中，即可得出赤巧中巧药巧和巧药内醋巧的含量。 所述的一种赤巧中巧药巧和巧药内醋巧的HPLC-ELSD含量测定方法，所述步骤3) 中乙腊和0. 05%甲酸水溶液均用0. 45ym微孔滤膜过滤，在超声仪中超声30min。 所述的一种赤巧中巧药巧和巧药内醋巧的HPLC-ELSD含量测定方法，所述步骤3) 中乙腊和0. 05%甲酸水的体积比为（10-20) : (90-80)。 所述的一种赤巧中巧药巧和巧药内醋巧的HPLC-ELSD含量测定方法，所述步骤3) 中乙腊和0. 05%甲酸水的体积比为14:86。 所述的一种赤巧中巧药巧和巧药内醋巧的HPLC-ELSD含量测定方法，所述步骤3) 中Cis柱的规格为250mmX4. 6mmX5ym，柱溫30°C。 所述的一种赤巧中巧药巧和巧药内醋巧的HPLC-ELSD含量测定方法，所述步骤3) 中柱，乙腊和0. 05%甲酸水的流速为1血/min,进样量5yL。 所述的一种赤巧中巧药巧和巧药内醋巧的HPLC-ELSD含量测定方法，所述步骤3) 中化SD漂移管溫度为110°C，载气为氮气，载气压力为0. 45MPa，气流量是化/min。 本专利技术具有W下有益效果： 本专利技术的方法可用于巧药巧和巧药内醋巧的含量测定，专属性、耐用性、精密度、 准确度良好，适用于中药赤巧的整体质量控制。 化SD作为一种通用型检测器，其响应值不依赖于光学性质，它对几乎所有的物质 产生响应，采用化SD可W针对中成药、中药饮片及配方颗粒那些没有紫外吸收或末端吸收 的目标成分建立科学准确的质量控制方法。本专利技术提供了一种利用HPLC-ELSD法同时对赤 巧中巧药巧和巧药内醋巧含量测定的方法，可W对中药赤巧的质量进行更好的控制，本发 明中采用HPLC-ELSD同时测定巧药巧和巧药内醋巧的含量，相对于仅对巧药巧定量，本发 明可W更全面科学的控制赤巧的质量标准。 本专利技术选择了易挥发的甲酸与水混合，选择简单方便的等度洗脱，可快速有效地 将巧药巧和巧药内醋巧分离开，避免了采用难挥发性酸类（如憐酸）进行梯度洗脱造成时 间长，流动相浪费，且不适用于化SD检测器等问题。 不同的色谱柱会有不同的分离效果，本专利技术使用了乙腊与0. 05%甲酸水溶液体积 比为14 :86的配比，采用DiamonsilCis柱250mmX4. 6mmX5ym，柱溫30°C，使得赤巧中巧 药巧和巧药内醋巧达到一个很好的分离效果。【附图说明】 图1为本专利技术实施例中巧药巧标准品的高效液相色谱图。 图2为本专利技术实施例中巧药内醋巧标准品的高效液相色谱图。 图3为本专利技术实施例中赤巧提取液供试品的高效液相色谱图。 图4为本专利技术实施例中巧药巧标准品的线性关系曲线。图5为本专利技术实施例中巧药内醋巧标准品的线性关系曲线。 图6为本专利技术实施例中流动相乙腊-0. 05%甲酸水溶液体积比为20:80的高效液 相色谱图。 其中1-巧药内醋巧，2-巧药巧。【具体实施方式】 实施例1、一种赤巧中巧药巧和巧药内醋巧的HPLC-ELSD含量测定方法 具体包括如下步骤： 一、供试品溶液的制备 将产地为迂宁西丰的干燥赤巧的根粉碎，过20目筛，称取赤巧粉末Ig，用 10血70 %甲醇水溶液浸泡比，加热回流提取比，冷却至室溫称重，补足失重，取溶液过滤， 取续滤液作为供试品溶液。按上述平行操作=份。 二、对照品溶液的制备 精密称取巧药巧和巧药内醋巧，用70%甲醇水溶解至容量瓶，定容，摇匀，分别得 lOmg/mL的巧药巧对照品溶液和3mg/mL的巧药内醋巧对照品溶液。S、检测 高效液相和化SD的检测条件 高效液相色谱：Agilent1200高效液相色谱仪，Diamonsil。祖 250mmX4. 6mmX5ym，柱溫30°C，流动相为乙腊-0. 05%甲酸水溶液，流速为ImL/min，进样 量5yL。所用流动相均用0. 45ym微孔滤膜过滤，在超声仪中超声30min。 流动相的筛选[003引将甲醇与甲酸配比，和乙腊与甲酸水配比进HPLC进行比较，甲醇体系不如乙腊体 系的基线稳定，故选用乙腊体系。在其它条件一样的情况下分别选用乙腊-0. 05%甲酸水溶 液体积比为20:80，14:86，10:90立种进行比较，如图6所示20:80的情况下巧药内醋巧出 峰太早，虽与巧药巧色谱峰的分离度良好，但是与其前面的色谱峰的分离效果不理想（基 线恰好刚分离），而在10:90的情况下巧药巧出峰时间较长，如本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的HPLC‑ELSD含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：1)供试品溶液的制备，将干燥赤芍的根粉碎，过筛，称取1g赤芍粉末，用10mL70％甲醇水溶液浸泡1h，加热回流提取1h，冷却称重，补足失重，取溶液过滤，取续滤液作为供试品溶液；2)对照品溶液的制备，精密称取芍药苷和芍药内酯苷，用70％甲醇水溶解至容量瓶，定容，摇匀，分别得10mg/mL的芍药苷对照品溶液和3mg/mL的芍药内酯苷对照品溶液；3)检测，分别取2)中芍药苷对照品溶液、芍药内酯苷对照品溶液进行检测，检测条件为C18柱，以乙腈‑0.05％甲酸水溶液为流动相进行等度洗脱，采用ELSD检测器进行HPLC‑ELSD检测，分别计算同一保留时间下的峰面积，以芍药苷含量x为横坐标，峰面积y为纵坐标绘制标准曲线，得到芍药苷的标准曲线方程；以芍药内酯苷含量x为横坐标，峰面积y为纵坐标绘制标准曲线，得到芍药内酯苷的标准曲线方程；取1)中供试品溶液在高效液相色谱检测条件为C18柱，以乙腈‑0.05％甲酸水溶液为流动相进行等度洗脱，采用ELSD检测器进行HPLC‑ELSD检测，将所得芍药苷和芍药内酯苷的峰面积带入标准曲线线性回归方程中，即可得出赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的含量。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘玉峰，朱美霞，李胜男，王志萍，韩彬，卢晓丹，
申请(专利权)人：辽宁大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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