重组大肠杆菌发酵产物中L-哌啶酸的萃取分离方法技术

本发明专利技术属于生物化工技术领域，具体涉及一种重组大肠杆菌发酵产物中L‑哌啶酸的萃取分离方法。本发明专利技术以全细胞催化制备L‑哌啶酸的发酵液为原料，经调节pH值，萃取体系萃取，分离，反萃取，沉淀结晶，最后得到哌啶酸晶体。该方法用三辛胺‑正辛醇‑三磷酸丁酯作为反应萃取体系，解决了L‑哌啶酸在水溶液中溶解度大，不易提纯分离的难题；该方法专一性强，残留杂质少，具有反应条件温和，制备步骤简单，具有工业利用价值等特点。采用本方法制得的哌啶酸晶体有杂质少，为纯品，非钠钾盐，且色素吸附少的优点，此产物可用作制备罗哌卡因等药物的中间体，广泛应用于医药、化工领域。

Extraction method of L pipecolic acid fermentation of recombinant Escherichia coli

The invention belongs to the technical field of bio chemical industry, in particular to a method for the extraction and separation of recombinant Escherichia coli fermentation product L pipecolic acid. The whole cell catalyzed preparation of L pipecolic acid fermentation liquid as raw material, by adjusting the pH value, the extraction system of extraction, separation, extraction, crystallization, and finally get the pipecolic acid crystal. This method uses three octyl amine octanol three tributyl phosphate as the reaction extraction system, solved the L pipecolinic acid in aqueous solubility, easy separation and purification of the problem; the method specificity, less residual impurities, with mild reaction conditions, simple preparation steps, with industrial utilization value the characteristics of. Pipecolinic acid crystal prepared by the method has fewer impurities, pure, non sodium potassium, and the adsorption of pigment less, this product can be used as intermediates in the preparation of ropivacaine and other drugs, is widely used in the field of pharmaceutical and chemical engineering.

【技术实现步骤摘要】
重组大肠杆菌发酵产物中L-哌啶酸的萃取分离方法
本专利技术属于生物化工
，具体涉及一种重组大肠杆菌发酵产物中L-哌啶酸的萃取分离方法。
技术介绍
哌啶酸(Pipecolicacid，简称PA)是一种重要的刚性环状非蛋白质氨基酸，它既可以限定多肽的构象，还可作为不同化合物合成库中的多功能骨架，所以广泛用于许多手性药物和生物活性物质的制备。如，新一代局麻药罗哌卡因(Ropivacaine)、抗精神病药物硫利哒嗪(Thioridazine)、免疫抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)以及抗肿瘤抗生素山卓霉素(Sandramycin)等均是以哌啶酸或其衍生物为主要原料制得的。由于哌啶酸及其衍生物具有的生物活性和广泛的应用前景，其合成已引起众多国外研究者的兴趣，并开发出许多合成的新方法和新技术。利用重组大肠杆菌生产手性L-哌啶酸是一种新型生产哌啶酸的方法，其具有产率高选择性高光学纯度高等优点。哌啶酸及其衍生物作为一类应用广泛的医药中间体，市场需求会越来越大。若将上述生物合成哌啶酸的方法转为工业生产，L-哌啶酸分离提纯技术也很重要。随着合成技术、生物技术及药学研究的不断发展，可以预期哌啶酸及本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组大肠杆菌发酵产物中L‑哌啶酸的萃取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：1)待分离样品处理：取发酵原液，加入吸附剂充分混匀后加热搅拌，再经滤纸、硅藻土和滤膜过滤，得澄清溶液；2)反应萃取：取步骤1)所述的澄清溶液调节pH值至7～10，用三辛胺‑正辛醇‑三磷酸丁酯的反应萃取体系溶液与澄清溶液混合后搅拌萃取；3)反萃取：将步骤2)中搅拌萃取后的溶液进行离心操作，取上清液，在上清液中加入等体积的水介质混匀后搅拌，搅拌结束后，取下层水相，得L‑哌啶酸水溶液。

【技术特征摘要】
1.重组大肠杆菌发酵产物中L-哌啶酸的萃取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：1)待分离样品处理：取发酵原液，加入吸附剂充分混匀后加热搅拌，再经滤纸、硅藻土和滤膜过滤，得澄清溶液；2)反应萃取：取步骤1)所述的澄清溶液调节pH值至7～10，用三辛胺-正辛醇-三磷酸丁酯的反应萃取体系溶液与澄清溶液混合后搅拌萃取；3)反萃取：将步骤2)中搅拌萃取后的溶液进行离心操作，取上清液，在上清液中加入等体积的水介质混匀后搅拌，搅拌结束后，取下层水相，得L-哌啶酸水溶液。2.根据权利要求1所述的萃取分离方法，其特征在于，步骤1)所述发酵原液中哌啶甲酸浓度为10～60g/L，pH值为2～10；所述发酵原液中含有锌、钾、钠、铵、铁、铜、镁等多种阳离子，含有磷酸根、硫酸根、氯离子等多种阴离子，还含有少量葡萄糖、赖氨酸、柠檬酸等有机成分。3.根据权利要求1所述的萃取分离方法，其特征在于，步骤1)中加热搅拌的速率为1000～2000r/min，加热温度为45～75℃，加热搅拌时间为1～1.5h。4.根据权利要求1所述的萃取分离方法，其特征在于，步骤1)中滤膜过滤为至少一次0.2～0.8μm滤膜过滤。5.根据权利要求1所述的萃...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丹，陈坤，张雨，孙誉州，
申请(专利权)人：重庆大学，
类型：发明
国别省市：重庆,50