水仙子糖肽及其用途制造技术

水仙子糖肽，为从水仙子中提取的水溶性活性物质，其中糖蛋白的含量为７５～９７％。糖蛋白为多糖和肽结合结构，分子量为２６００～４２００。其中多糖含量以无水葡萄糖计不低于糖肽（按干燥品计）总量的２５．０％，肽含量不低于糖肽（按干燥品计）总量的５０％。水仙子糖肽的用途是制备抗肿瘤药物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及从水仙子中提取的活性物质水仙子糖肽及用途。
技术介绍
自然界中植物、微生物、动物都含有多糖，除以游离态存在外，也可与蛋白质相结合的形式存在。糖与蛋白质结合成糖蛋白，是一些组织器官的结构物质。目前常见的有从牛膝中提取的牛膝糖肽、从猪的小肠中提取的肝素、从猪鼻喉软骨中提取的硫酸软骨素等。专利文献中还记载了从枸杞子中提取的枸杞糖肽。由于原料来源不同，提取物的生物活性也不同。同时受原料来源不同的限制，没有一个统一规范的提取工艺。水仙子又称五谷虫、工程蝇蛆，从水仙子中提取壳聚糖有已有技术。但目前未发现从水仙子中提取糖肽的记载。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种从水仙子中提取的水仙子糖肽，同时提出水仙子糖肽的用途。本专利技术的水仙子糖肽，其特征在于为从水仙子中提取的水溶性活性物质，其中糖蛋白的含量为75～97％。糖蛋白的含量优选为75～92％，为多糖和肽结合结构，分子量为2600～4200。其中多糖含量以无水葡萄糖计不低于糖肽(按干燥品计)总量的25.0％，肽含量不低于糖肽(按干燥品计)总量的50％。优选多糖含量为25～35％，肽含量为50～70％。水仙子糖肽的用途是制备抗肿瘤药物。其中的糖蛋白为有效活性组分。水仙子的提取方法，本专利技术提供的一种方法为将水仙子中的蛋白质凝固，制成熟水仙子，加水打浆成浆液，然后进行酶解得酶解液，灭活酶解液，离心分离得到上清液，然后对上清液进行处理。水仙子先形成熟水仙子，使蛋白质凝固的方法，可以按照已有技术的多种方式，最常见是通过蒸煮的方法。具体工艺可优选水仙子与1～2倍重量的水在100℃下煮5～10分钟。熟水仙子用水打浆成浆液，优选熟水仙子与1～3倍重量的水进行打浆。浆液在PH为7～7.5、40～45℃、中性蛋白酶下酶解3～5小时得到酶解液，然后灭活酶解液，使酶终止反应。灭活酶解液进行离心分离，得到上清液和渣，分离出上清液。在酶解时，中性蛋白酶可采用适合的蛋白酶，优选1398中性蛋白酶。以上得到的上清液，其处理过程包括用有机溶剂进行沉淀，对沉淀物进行溶解提纯，提纯液干燥。给出如下一种具体的操作步骤上清液经过真空浓缩去掉水成浓缩液，离心除渣，清液用乙醇沉淀，分离出沉淀，沉淀用水溶解，得到的水溶液再离心除杂，清液在120～170℃下喷雾干燥得到水仙子糖肽。所述浓缩液的浓度为20～25％。所用乙醇的浓度最好≥95％，沉淀时间至少为12小时。也可采用其它的有机溶剂，如其它醇类、丙酮。乙醇的用量可选择按照沉淀前的清液∶乙醇＝1∶4～5(体积比)，乙醇量再多一点不影响整个工艺。上述得到的水仙子糖肽为棕色或棕黄色无定形粉末，气微，味特异，有引湿性。本品在水中易溶，在乙醇、丙酮、氯仿中不溶。以下为有关实验结果一、采用高效凝胶色谱法测定水仙子糖肽的分子量及分子量分布以不同分子量的葡萄糖作为对照品，以三批水仙子糖肽作为样品测定，结果为 在RI-6A示差折光检测器检测出的糖肽色谱图见图1。试验结果表明，水仙子糖肽(糖蛋白)的分子量为2600～4200，分子量分布为1.0～1.1。由图1的色谱图，在样品出峰处只有一个单独峰形、而无其它峰形出现，可以推断，水仙子糖肽(糖蛋白)是多糖与肽连接在一起的一个整体结构。二、水仙子糖肽的组成。1、通过紫外检测法测定水仙子糖肽中肽的组成总氨基酸含量为600～700μg/mg、游离氨基酸含量在39～51μg/mg、组成肽类的结合氨基酸含量为570～660μg/mg。2、氨基酸分析仪测定肽中氨基酸的种类水仙子糖肽由18种氨基酸组成，构成肽的氨基酸含量为500～530μg/mg。18种氨基酸的组成及比例为名称 g/100g 名称 g/100g天冬氨酸 6.43-6.96 苏氨酸 1.67-1.92丝氨酸 1.91-2.21 谷氨酸 10.00-10.65甘氨酸 2.44-2.55 丙氨酸 2.28-2.40胱氨酸 0.19-0.26 缬氨酸 1.50-1.58蛋氨酸 0.60-0.66 异亮氨酸0.96-1.01亮氨酸 1.43-1.52 酪氨酸 1.55-1.65苯丙氨酸 1.73-1.85 赖氨酸 5.11-5.49组氨酸 1.63-1.74 精氨酸 3.05-3.18脯氨酸 1.38-1.45 色氨酸 0.45-0.513、水仙子糖肽中多糖的组成气相色谱分析结果，水仙子糖肽中的多糖组分主要由葡萄糖和岩藻糖组成，二者分别占糖肽中总糖量的83.4％和16.6％。4、水仙子糖肽中多糖含量的测定按照分光光度法，以六批样品测定，多糖含量在25～35％之间。由于目前对糖肽类尚无理想的测定方法，因此以上实验用来证明了水仙子糖肽属于糖肽结构。从样品的实验数据可以看出，水仙子糖肽(糖蛋白)的分子量约2600～4200，其中多糖含量为25～35％，主要由葡萄糖和岩藻糖组成，二者的比例为83.4∶16.6；肽由18种氨基酸组成，含量为500～700mg/g，这些已知组分构成水仙子糖肽的75％以上，是药效学的主要作用所在。除此以外，还有水分、钠离子以及糖残基中可能存在的取代基等部分未知成分。四水仙子糖肽的主要药效学研究水仙子糖肽是从五谷虫体内提取的具有生物活性的化合物，根据其化学结构、组成分析和药效试验筛选，我们从调节免疫、抑瘤、减毒等三个方面对其进行了初步的药效学研究，现将试验结果报告如下。<一>、试验材料1.药品水仙子糖肽 山东淄博顺达企业集团总公司提供，批号970323、991028；呋喃脲嘧啶(FT207)济南制药厂生产，批号951207、981003；环磷酰胺 沈阳药科大学制药厂生产，批号961120；复方阿胶浆 山东东阿阿胶集团生产，批号960913。2.动物昆明种小鼠、BALB/C小鼠、SD种大鼠，分别由山东医科大学实验动物(合格证号鲁动质960102、970101、970103)、北京医科大学实验动物科学部(合格证号医动字第01-3046号)提供。3.瘤株和靶细胞S180瘤株、H22瘤株、艾氏腹水癌瘤株，由中国医科院药物所引进、代传；NK敏感细胞Yac-1株，山东医科院基础所免疫室提供；IL-2依赖株CTLL细胞，山东泉城生物技术研究所提供。4.试剂3H-TdR(氚标记的脱氧胸腺嘧啶核苷) 中国科学院原子能研究所(20ci/mM)961019；RPMI1640 GI810 laboratoyies CatNO430-1800EB；FCS(胎牛血清)大连生物制品研究所96810；MTT(噻唑蓝)USA.Sigma Spo120-3；ConA(刀豆蛋白A)USA.Sigma typeVI，活性＜64ug/ml，11028-71-0；IL-2中国军事医学科学院，911201效价400Iu/Amp；CD4(L3T4抗体)、CD8(Lyt-2抗体)试剂盒，北京医科大学免疫教研室提供；5.仪器酶标仪 日本岛津BIO-TEK Intrument Incomp MicroplateEL309；ZT-NB型多头细胞收集器 浙江东浦医疗器械厂；β-液体闪烁计数器，EG2101型，国产；96孔、24孔微量细胞培养板Costar产；恒温箱，荧光显微镜(Olimpa本文档来自技高网...

【技术保护点】
水仙子糖肽，其特征在于为从水仙子中提取的水溶性活性物质，其中糖蛋白的含量为７５～９７％。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王淦，宋淑玉，宋波，杜晓敏，
申请(专利权)人：淄博顺达企业集团总公司，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]