HLA-A2.1结合肽及其用途制造技术

本发明专利技术提供筛选具有以下特征的免疫原性肽和免疫原性肽组合物的装置和方法：它们能特异性结合ＨＬＡ－Ａ２．１等位基因编码的糖蛋白并诱导Ａ２．１等位基因限制性Ｔ细胞的激活。所述肽可用于引发针对所需抗原的免疫应答。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利申请是USSN 60/013,980的部分继续，后者又与USSN08/589,108、USSN 08/454,033，以及USSN 08/349,177有关，并且在如下专利中，相继地前者是后者的部分继续USSN 60/013,980、USSN08/159,184、USSN 08/073,205、USSN 08/027,146。本申请还与USSN08/205,713有关。上面所有的专利申请在此都被引入作为参考。
技术介绍
本专利技术涉及用于对许多病理状态如病毒性疾病和癌症进行预防、治疗或诊断的组合物和方法。特别是提供了能结合于所选择的主要组织相容性复合物(MHC)分子并诱发免疫反应的新型肽。MHC分子被分类为Ⅰ类分子或Ⅱ类分子。Ⅱ类MHC分子主要是在与启动和维持免疫反应有关的细胞上表达，如T淋巴细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞等。Ⅱ类分子可被辅助T淋巴细胞识别，诱导辅助T淋巴细胞增殖并放大对特定的免疫原性肽所展示的免疫反应。Ⅰ类MHC分子可在几乎所有的有核细胞上表达，被细胞毒T淋巴细胞(CTLs)识别，然后破坏携带抗原的细胞。CTLs在肿瘤排斥和抗病毒感染过程中特别重要。CTL能识别结合于MHCⅠ类分子的以肽片段形式存在的抗原，而不是完整的外来抗原本身。在正常情况下抗原必须被细胞内源性地合成，并在细胞质中，部分蛋白质抗原被裂解成小肽片段。某些这种小肽位移进入前Golgi区，并与Ⅰ类分子重链相互作用，以便于适当地折叠并与β2微球蛋白的亚单位结合。然后，这种肽-MHCⅠ类复合物被转移到细胞表面，便于表现并可以被特别的CTLs识别。对人MHCⅠ类分子，HLA-A2.1的晶体结构研究表明，通过Ⅰ类分子重链α1和α2结构域的折叠，形成了一个肽结合槽(Bjokman等，Nature 329:506(1987))。但是，在这些研究中，对结合于此槽内肽的种类并未确定。Buus等，Science 242:1065(1988)首先描述了一种从MHC上酸洗脱结合肽的方法。随后，Rammensee及其合作者(Falk等，Nature351:290(1991))建立了一种方法，用于鉴定天然产生的结合于Ⅰ类分子的肽。其它一些研究者借助于质谱分析法，通过对从B型Ⅰ类分子(Jardetzky等，Nature 353:326(1991))和从A2.1型Ⅰ类分子中洗脱的肽进行常规的自动测序，已成功地达到了对各种HPLC组分中较大量的肽进行直接氨基酸测序的目的(Hunt等，Science 225:1261(1992))。Rotzschke和Falk已提供了有关对MHCⅠ类分子中天然产生的结合肽鉴定的述评(Rotzschke和Falk,Immunol.Today 12:447(1991))。Sette等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:3296(1989)的研究表明，MHC等位基因特异性基元可用于预测MHC结合能力。Schaeffer等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:4649(1989)的研究表明，MHC结合与免疫原性有关，几位研究者(De Bruijn等，Eur.,J.Immunol.21:2963-2970(1991)；Pamer等，Nature 353:852-955(1991))已提供了初步证据表明，Ⅰ类分子结合基元可用于对动物模型鉴定潜在的免疫原性肽。还必须对那些对许多已知Ⅰ类同种型分子的人等位基因具有特异性的Ⅰ类分子基元进行阐述。理想的情况是，这些不同等位基因的聚合频度应该足够高，以便能包括大部分，或者大多数异系繁殖人群。尽管技术在发展，但是，现有的技术还必须在此研究的基础上提供有用的基于人肽的疫苗或治疗药剂。本专利技术提供了这种肽，并具有其它一些优点。专利技术概述本专利技术提供具有HLA-A2.1分子结合基元的免疫原性肽。这种免疫原性肽结合合适的MHC等位基因，优选长度为9-10个残基，并含有在特定位置，如第2位和第9位，的保守残基。并且所述肽不含有本文定义的负结合残基，所述负结合残基如9氨基酸肽时的第1、3、6位和/或第7位，10氨基酸时的第1、3、4、5、7、8位和/或第9位。本专利技术在基元内限定位置可以选择有效与HLA A2.1结合的肽。可以使用本专利技术的肽鉴定许多免疫原性靶蛋白质上的表位。可根据来自病原体(例如病毒病原体、真菌病原体、细菌病原体、原生动物病原体等)或来自癌相关抗原的抗原蛋白质序列制备这种肽。适当抗原例子包括前列腺特异性抗原(PSA)，乙型肝炎核心抗原和表面抗原(HBVc、HBVs)，丙型肝炎抗原，Epstein-Barr病毒抗原，Ⅰ型人免疫缺损病毒(HIV1)抗原和乳头状瘤病毒抗原。这种肽或编码它们的核酸在药用组合物中是有用的，可用于体内和体外的治疗和诊断。定义名词“肽”和“寡肽”在本说明书中可互换使用，指的是一系列氨基酸残基，典型的L-氨基酸残基，一般是相邻氨基酸的α-氨基和羰基之间通过肽键相互连接而成的。本专利技术寡肽的长度少于大约15个残基，通常由大约8-11个残基组成，优选是9个或10个残基。“免疫原性肽”是含有等位基因特异性基元的肽，并因此它能结合于MHC等位基因，并能诱发CTL反应。本专利技术的免疫原性肽能结合适当的HLA-A2.1分子，诱发针对产生此免疫原性肽的抗原的细胞毒T细胞反应。免疫原性肽使用本专利技术的算法可以方便地鉴定。所述算法是数学过程，产生能够选择免疫原性肽的数值。一般使用具有“结合阈值”的算法数值，使得能够选择具有以一定亲和力结合的高概率并因而具有免疫原性的肽。所述算法基于对肽上特定位置的特定氨基酸结合MHC的影响或对含有基元的肽上特定置换的结合的影响。以二种不同的实验方法分析了分散的肽表位对MHCⅠ类分子的结合亲和性和其免疫原性之间的相互关系(Sette等，J.Immunol.153:5586-5592(1994))。第一种方法分析表明，对于HLA-A*0201转基因小鼠，在MHC结合亲和性范围内潜在性表位的免疫原性超过10000倍。第二种方法通过使用急性肝炎病人的PBL，对大约100个不同的来自乙型肝炎病毒(HBV)，并都带有A*0201结合基元的潜在性表位，测定了其抗原性。在此二种情况中都发现，大约500nM(优选在500nM或小于500nM)的亲和性阈限可确立肽表位诱发CTL反应的能力。这些资料正好与对天然产生的肽或以前所述T细胞表位测定的Ⅰ类分子结合亲和性结果一致。这些资料表明，在T细胞应答形成中决定簇选择具有重要的作用。“保守残基”是在肽中某一特定位置，与通过随机分布所预测的相比较，以显著较高的频度存在的氨基酸。典型的保守残基是MHC结构可在此提供与免疫原性肽接触点的残基。对于某一免疫原性肽。在限定长度的肽内含有1-3个，优选含有2个保守残基，定义为一个基元。这些残基典型地是与肽结合槽有紧密的接触，其侧链埋藏在槽本身的特定凹陷中。一般情况下，一个免疫原性肽含有多至3个保守残基，更通常是2个保守残基。在此使用的名词“负结合残基”指的是这样一些氨基酸，如果它们在肽的某些位置存在(如9聚体的第1、3位和/或第7位)，将导致肽成为非结合物或弱结合物，并因而不具免疫原性，即不诱发CTL反应。名词“基元”指的是在限定长度，通常是大约8-11个氨基酸的肽内本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含具有一个ＨＬＡ－Ａ２．１结合基元的免疫原性肽的组合物，所述免疫原性肽具有９个残基，其中：位于Ｎ端第２位的第１保守残基选自Ｉ、Ｖ、Ａ和Ｔ；位于Ｃ末端的第２保守残基选自Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ａ和Ｍ。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：HM格雷，A瑟特，J悉尼，
申请(专利权)人：埃皮曼尼公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]