用于鉴定牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒的引物组及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于鉴定牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒的引物组及其应用。本发明专利技术保护引物对甲和引物对乙组成的引物组合。引物对甲由序列1所示的引物F1和序列2所示的引物R1组成。所述引物对乙由序列3所示的引物F2和序列4所示的引物R2组成。采用引物对甲和引物对乙，通过二重二温式PCR检测牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒，具有特异性好、灵敏度高、普适性好、方便快速等优点，可用于临床鉴别诊断和流行病学调查。本发明专利技术为牛病的防控提供了新的技术方法，具有很高的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
用于鉴定牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒的引物组及其应用
本专利技术涉及一种用于鉴定牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒的引物组及其应用。
技术介绍
牛支原体(Mycoplasmabovis，MB)主要引起牛呼吸困难、气喘、咳嗽，同时还可引起关节炎、乳房炎、生殖道炎、角膜结膜炎、耳炎等。谢建华等人在2008-2013年间对重庆地区1606份牛血清样品进行检测，结果显示MB阳性率为49.00％。郭澍强等人对宁夏16个规模化养殖场的460份牛血清进行了牛支原体抗体的检测,结果显示MB阳性率为32.17％。牛传染性鼻气管炎病毒(bovineherpesvirusⅠ，IBRV)又称为传染性牛鼻气管炎病毒，主要引起牛高热、鼻炎、呼吸困难和母畜流产等疾病。该病影响牛群的繁殖和产奶，给养牛业造成了巨大的经济损失，我国将其列为二类动物疫病。韩照清等人在2011年间采自西藏(988份)、青海(475份)和四川(377份)共1840份牦牛血清样品进行牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测，结果IBRV阳性率分别为38.6％、44.6％、27.9％。孙庆宇等人(2014年)在内蒙古地区16个奶牛养殖场的2321头奶牛进行牛传染性鼻气炎血清流行病学调查，结果显示IBRV平均阳性率为75.7％。张弦等人(2015年)对上海地区19个规模化牧场共920份血清样品进行IBRV血清抗体检测,结果表明IBRV抗体阳性率为46.74％。李永琴等(2016年)对宁夏地区18个规模化奶牛场470份血清进行牛传染性鼻气管炎的血清学调查，结果显示平均阳性率达到71.9％。牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒均能引起牛呼吸道疾病，临床症状态相似难以区分，因此急需建立牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒的快速检测技术，为牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒的防控提供技术支持。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于鉴定牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒的引物组及其应用。本专利技术首先保护一种引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由引物对甲和引物对乙组成；(a2)所述引物对甲；(a3)所述引物对乙；所述引物对甲由引物F1和引物R1组成；所述引物F1为如下(b1)或(b2)：(b1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(b2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物R1为如下(b3)或(b4)：(b3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物对乙由引物F2和引物R2组成；所述引物F2为如下(c1)或(c2)：(c1)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(c2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物R2为如下(c3)或(c4)：(c3)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(c4)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子。所述引物组合的用途为如下(d1)或(d2)或(d3)：(d1)鉴别牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒；(d2)鉴定待测病原微生物是否为牛支原体或牛传染性鼻气管炎病毒；(d3)鉴定待测样本是否感染了牛支原体和/或牛传染性鼻气管炎病毒。本专利技术还保护所述引物组合在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为如下(d1)或(d2)或(d3)：(d1)鉴别牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒；(d2)鉴定待测病原微生物是否为牛支原体或牛传染性鼻气管炎病毒；(d3)鉴定待测样本是否感染了牛支原体和/或牛传染性鼻气管炎病毒。本专利技术还保护含有所述引物组合的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下(d1)或(d2)或(d3)：(d1)鉴别牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒；(d2)鉴定待测病原微生物是否为牛支原体或牛传染性鼻气管炎病毒；(d3)鉴定待测样本是否感染了牛支原体和/或牛传染性鼻气管炎病毒。本专利技术还保护所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。本专利技术还保护一种鉴别待测病原微生物为牛支原体还是牛传染性鼻气管炎病毒的方法，包括如下步骤：(1)提取待测病原微生物的核酸；(2)以步骤(1)得到的核酸为模板，采用所述引物对甲和所述引物对乙进行二重二温式PCR，然后进行如下判断：如果得到大小为412bp的扩增产物，待测病原微生物为牛支原体；如果得到大小为727bp的扩增产物，待测病原微生物为牛传染性鼻气管炎病毒。所述待测病原微生物为牛支原体或牛传染性鼻气管炎病毒。本专利技术还保护一种鉴定待测病原微生物是否为牛支原体或牛传染性鼻气管炎病毒的方法，包括如下步骤：(1)提取待测病原微生物的核酸；(2)以步骤(1)得到的核酸为模板，采用所述引物对甲和所述引物对乙进行二重二温式PCR，然后进行如下判断：如果得到大小为412bp的扩增产物，待测病原微生物为或候选为牛支原体；如果得到大小为727bp的扩增产物，待测病原微生物为或候选为牛传染性鼻气管炎病毒。本专利技术还保护一种鉴定待测样本是否感染牛支原体和/或牛传染性鼻气管炎病毒的方法，包括如下步骤：(1)提取待测样本的核酸；(2)以步骤(1)得到的核酸为模板，采用所述引物对甲和所述引物对乙进行二重二温式PCR，然后进行如下判断：如果得到大小为412bp的扩增产物，待测样本感染或疑似感染牛支原体；如果得到大小为727bp的扩增产物，待测样本感染或疑似感染牛传染性鼻气管炎病毒。本专利技术还保护一种鉴别待测病原微生物为牛支原体还是牛传染性鼻气管炎病毒的方法，包括如下步骤：检测待测病原微生物的核酸中是否具有序列表的序列5所示的特异DNA分子或是否具有序列表的序列6所示的特异DNA分子，如果待测病原微生物的核酸中具有序列表的序列5所示的特异DNA分子、待测病原微生物为牛支原体，如果待测病原微生物的核酸中具有序列表的序列6所示的特异DNA分子、待测病原微生物为牛传染性鼻气管炎病毒。所述待测病原微生物为牛支原体或牛传染性鼻气管炎病毒。本专利技术还保护一种鉴定待测病原微生物是否为牛支原体或牛传染性鼻气管炎病毒的方法，包括如下步骤：检测待测病原微生物的核酸中是否具有序列表的序列5所示的特异DNA分子或是否具有序列表的序列6所示的特异DNA分子，如果待测病原微生物的核酸中具有序列表的序列5所示的特异DNA分子、待测病原微生物为或候选为牛支原体，如果待测病原微生物的核酸中具有序列表的序列6所示的特异DNA分子、待测病原微生物为或候选为牛传染性鼻气管炎病毒。本专利技术还保护一种鉴定待测样本是否感染牛支原体和/或牛传染性鼻气管炎病毒的方法，包括如下步骤：检测待测样本的核酸中是否具有序列表的序列5所示的特异DNA分子和/或是否具有序列表的序列6所示的特异DNA分子，如果待测样本的核酸中具有序列表的序列5所示的特异DNA分子、待测样本感染或疑似感染牛支原体，如果待测样本的核酸中具有序列表的序列6所示的特异DNA分子、待测样本感染或疑似感染牛传染性鼻气管炎病毒。以上任一所述待测病原微生物为牛支原体、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、口蹄疫病毒、水泡性口炎病毒、蓝舌病病毒、牛轮状病毒或小反刍兽疫病毒。所述牛病毒性腹泻病毒为牛病毒性腹泻病毒Ore本文档来自技高网...

【技术保护点】
引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由引物对甲和引物对乙组成；(a2)所述引物对甲；(a3)所述引物对乙；所述引物对甲由引物F1和引物R1组成；所述引物F1为如下(b1)或(b2)：(b1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(b2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物R1为如下(b3)或(b4)：(b3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物对乙由引物F2和引物R2组成；所述引物F2为如下(c1)或(c2)：(c1)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(c2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物R2为如下(c3)或(c4)：(c3)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(c4)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子。

【技术特征摘要】
1.引物组合，为如下(a1)或(a2)或(a3)：(a1)由引物对甲和引物对乙组成；(a2)所述引物对甲；(a3)所述引物对乙；所述引物对甲由引物F1和引物R1组成；所述引物F1为如下(b1)或(b2)：(b1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(b2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物R1为如下(b3)或(b4)：(b3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物对乙由引物F2和引物R2组成；所述引物F2为如下(c1)或(c2)：(c1)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(c2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物R2为如下(c3)或(c4)：(c3)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(c4)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子。2.权利要求1所述引物组合在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为如下(d1)或(d2)或(d3)：(d1)鉴别牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒；(d2)鉴定待测病原微生物是否为牛支原体或牛传染性鼻气管炎病毒；(d3)鉴定待测样本是否感染了牛支原体和/或牛传染性鼻气管炎病毒。3.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下(d1)或(d2)或(d3)：(d1)鉴别牛支原体和牛传染性鼻气管炎病毒；(d2)鉴定待测病原微生物是否为牛支原体或牛传染性鼻气管炎病毒；(d3)鉴定待测样本是否感染了牛支原体和/或牛传染性鼻气管炎病毒。4.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。5.一种鉴别待测病原微生物为牛支原体还是牛传染性鼻气管炎病毒的方法，包括如下步骤：(1)提取待测病原微生物的核酸；(2)以步骤(1)得到的核酸为模板，采用权利要求1中的所述引物对甲和所述引物对乙进行二重二温式PCR，然后进行如下判断：如果得到大小为412bp的扩增产物，待测病原微生物为牛支原体；如果得到大小为727bp的扩增产物，待测病原微生物为牛传染性鼻气管炎病毒。6.一种鉴定待测病原微生物是否...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢芝勋，范晴，谢志勤，谢丽基，黄莉，黄娇玲，张艳芳，曾婷婷，王盛，罗思思，邓显文，刘加波，庞耀珊，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：广西,45