热敏纳米颗粒制剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种热敏脂质体制剂，更特别地涉及一种包含磷脂和表面活性剂的脂质体制剂，其中所述脂质体支持在低于或等于约8℃的温度下长期储存，控制降解物形成以最大化产品效价，并且在温和的较高温度下释放它们的包含物。还描述了制备制剂的方法。

Thermosensitive nanoparticle preparation and preparation method thereof

The invention relates to a temperature sensitive liposome preparation, more particularly relates to a containing phospholipids and surfactant liposomes, wherein the liposome to support long-term storage in less than or equal to about 8 DEG C temperature control degradation to maximize product formation and release the contents of their potency, in high under moderate temperature. Methods for preparing formulations are also described.

【技术实现步骤摘要】
热敏纳米颗粒制剂及其制备方法本申请是申请号为201380014896.2(PCT/US2013/026453)、申请日为2013年2月15日、专利技术名称为“热敏纳米颗粒制剂及其制备方法”的中国专利申请的分案申请。
本专利技术涉及一种热敏脂质体制剂，更特别地涉及一种包含磷脂和表面活性剂的脂质体制剂，其中所述脂质体支持在低于或等于约8℃的温度下长期储存，控制降解物形成以最大化产品效价，并且在温和的体温过高(hyperthermic)温度下释放其包含物。还描述了制备制剂的方法。
技术介绍
脂质体是由至少一个包封水性内部隔室的脂质双层膜组成。脂质体可以通过膜类型和尺寸表征。小单层囊泡(SUV)具有单层膜且直径通常介于0.02至0.25μm之间；大单层囊泡(LUV)通常大于0.25μm。寡层大囊泡(oligolamellarlargevesicle)和多层大囊泡具有多个、通常同心的膜层，并且通常大于0.25μm。具有几个非同心膜的脂质体，即包含在较大囊泡内的几个小囊泡，称为多囊囊泡。脂质体可以配制成载有治疗剂、药物或其它活性剂，所述治疗剂、药物或其它活性剂包含在水性内部空间(水溶性活性剂)或分布在脂质双层内(水不溶性活性剂)。脂质体也可以结合允许活性剂递送到特定目标位置的抗体或靶分子。将药物包囊在脂质体中(1)降低了药物的毒性，(2)避免了身体的防御，所述防御通常识别外源颗粒并且将它们作为靶标通过肝和脾的网状内皮系统(RES)除去，和(3)使该药物载体靶向于作用的治疗位置，并且一旦到达该位置，快速释放药物以便其可以作用于靶组织。进一步，可以通过将聚乙二醇脂质引入到脂质体膜而抑制脂质体被网状内皮系统(RES)的细胞从血液清除；这些脂质抑制标识供RES摄取的脂质体的蛋白质吸附。脂质体可以设计为不渗漏的，但是如果该脂质体膜中出现小孔，或者如果该膜变成液体(例如，发生从固相或凝胶相到液相的相变)，或者如果该膜降解或溶解，则变成可渗漏的。这样的渗透性分解可以通过施加电场(电穿孔)或将脂质体暴露于酶或表面活性剂而诱发。另一种方法包括使膜的温度升高至其由凝胶向液相转化温度附近的温度，此时似乎在部分液体和部分固体膜中的相边界区域的孔缺陷能增加水、离子和小分子的跨膜转运。临床上体温升高称为体温过高(Hyperthermia)。该过程用于升高受试者的目标部位的温度，并且如果热敏脂质体可以递送到该目标部位，则该温度升高可以触发脂质体内含物的释放，引起治疗剂在目标部位的选择性递送和释放，如Yatvin等人,Science204:188(1979)最初描述的。然而，该技术受到其中脂质体的相变温度高于(大于37℃)正常组织温度的条件的限制。体温过高引起多种生物学变化。综述参考IsselsRD.HyperthermiaaddstoChemotherapy,EuropeanJofCancer(2008)44:2546-2554。温和的体温过高范围(39-44℃)内的温度调节局部的生理变化，比如血流量、血管系统渗透性和组织氧合作用增加。支持实体瘤的血管系统的结构混乱，且内衬微血管系统的内皮细胞没有密封在一起，通常导致多孔性(porousquality)。体温过高引起异常肿瘤微血管系统中的孔径增加，因此增强纳米尺寸分子(比如直径约100nm的脂质体)外渗到肿瘤间质中(BatesDA,MackillopWJ.Hyperthermia,adriamycintransport,andcytotoxicityindrug-sensitiveand-resistantChinesehamsterovarycells,CancerRes(1986)46:5477-5481；NagaokaS,KawasakiS,SasakiK,NakanishiT.Intracellularuptake,retentionandcytotoxiceffectofadriamycincombinedwithhyperthermiainvitro.JpnJCancerRes(1986)77:205-211)。为此，温和的体温过高选择性地对肿瘤细胞致死，抗肿瘤效果随温度升高而增加。热敏性脂质体将高浓度的化疗剂运载至实体瘤，支持血管系统，并且当加热时局部释放药物。体温过高选择性地提高脂质体摄取、脂质体渗透性、刺激局部药物释放、增加药物流入肿瘤细胞中、和增加药物结合肿瘤细胞DNA(后者对于许多化疗剂的作用机制很重要)。为了开始使用体温过高治疗深部肿瘤(例如，前列腺、卵巢、结肠直肠和乳腺的肿瘤)，因此，期望设计能够响应温和的体温过高条件(即，在39-45℃范围内的临床可得到的温度)而递送治疗量的活性剂的脂质体制剂。美国专利No.6,726,925描述了对于周围环境温度的改变敏感的脂质体。该脂质体特别地载有多柔比星，一种批准且经常使用的治疗大量癌症的肿瘤药物。含有多柔比星的脂质体制剂是静脉内给药的，并且与体温过高组合可以提供局部肿瘤控制和改善生活质量。局部温和的体温过高(39.5-45摄氏温度)从脂质体释放包埋的多柔比星。该递送技术使得高浓度的多柔比星优选地沉积在目标肿瘤中。美国专利No.7,901,709描述了一种用于热活化多柔比星的脂质体包囊的方法。公布的国际申请No.WO2007/024826描述了一种储存脂质体或纳米颗粒制剂的方法，其包括冷冻这样的制剂。所述制剂描述了储存具有增强的稳定性和储存特性的脂质体的方法。使体温过高活化的脂质体-药物制剂有效所需的关键设计原理是∶1)接近完全包囊活性剂，以使该药物在体循环中与脂质体结合，2)设计成在正常体温(37℃)下保留药物且在温和的体温过高温度(即41-43℃)下释放药物的膜，3)膜组合物和粒度，其能使脂质体保持在体循环中足够长时间以允许应用加热模态触发药物释放至其目标，和4)脂质体尺寸，其允许脂质体穿过渗漏性肿瘤微血管系统从血流外渗而使化疗药物靶向于肿瘤部位。本专利技术人发现关于多柔比星的脂质体制剂(例如美国专利No.7,901,709中公开的)一个另外的重要设计问题是多柔比星复合物(共晶体或盐)的形成对于最终药物产品稳定性的稳定作用。成功控制降解速率将导致对药物产品的储存温度和长期稳定性的显著影响。两种感兴趣的降解产物为8-脱乙酰基-8-羧基柔红霉素和杂质A。本专利技术解决了多柔比星脂质体制剂中药物降解产生柠檬酸盐复合物(共晶体或盐)的长期存在的问题。已经发现柠檬酸盐复合物在多柔比星不稳定性和降解物形成方面起重要作用。更具体地，8-脱乙酰基-8-羧基柔红霉素和杂质A的形成可以通过将柠檬酸盐复合物的形成改变成硫酸盐复合物(共晶体或盐)的形成而显著减少。另外，本专利技术保持了上述对于含有活性剂的有效的体温过高活化的脂质体制剂的关键设计原理。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术提供了一种药物组合物，其包含脂质体的悬浮液，所述脂质体具有凝胶相脂质双层和包埋在该脂质体内的多柔比星；所述脂质双层包含∶(i)一种或多种磷脂，选自：磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、和磷脂酰乙醇胺；(ii)一种或多种用亲水性聚合物衍生的磷脂；和(iii)一种或多种溶解脂质(lysolipid)，选自：单酰基磷脂酰胆碱、单酰基磷脂酰甘油、单酰基磷脂酰肌醇和单酰基磷脂酰基-乙醇胺本文档来自技高网...

【技术保护点】
将硫酸多柔比星负载到热敏脂质体中的方法，其包括：(a)制备脂质体的悬浮液，所述脂质体具有凝胶相脂质双层和在该脂质体内部的浓度大于其在该脂质体外部的浓度的铵离子和硫酸根离子，所述脂质双层包含：(i)一种或多种磷脂，选自：磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、和磷脂酰乙醇胺；(ii)一种或多种用亲水性聚合物衍生的磷脂；和(iii)一种或多种溶解脂质，选自：单月桂酰基磷脂酰胆碱(MLPC)、单肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(MMPC)、单硬脂酰基磷脂酰胆碱(MSPC)；其中所述脂质双层成分以80‑90:2‑8:2‑18的摩尔比提供；并且其中所述制备包括将悬浮液中脂质体大小减小至在50和150nm之间的平均粒度；(b)将多柔比星的溶液加入到脂质体的悬浮液中，其中所述多柔比星以硫酸多柔比星的形式被吸收到所述脂质体中。

【技术特征摘要】
2012.02.17 US 61/600,4181.将硫酸多柔比星负载到热敏脂质体中的方法，其包括：(a)制备脂质体的悬浮液，所述脂质体具有凝胶相脂质双层和在该脂质体内部的浓度大于其在该脂质体外部的浓度的铵离子和硫酸根离子，所述脂质双层包含：(i)一种或多种磷脂，选自：磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、和磷脂酰乙醇胺；(ii)一种或多种用亲水性聚合物衍生的磷脂；和(iii)一种或多种溶解脂质，选自：单月桂酰基磷脂酰胆碱(MLPC)、单肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(MMPC)、单硬脂酰基磷脂酰胆碱(MSPC)；其中所述脂质双层成分以80-90:2-8:2-18的摩尔比提供；并且其中所述制备包括将悬浮液中脂质体大小减小至在50和150nm之间的平均粒度；(b)将多柔比星的溶液加入到脂质体的悬浮液中，其中所述多柔比星以硫酸多柔比星的形式被吸收到所述脂质体中。2.权利要求1的方法，其中所述溶液中存在的至少95％的多柔比星被吸收到脂质体中。3.权利要求1的方法，其中所述制备包括硫酸铵溶液的存在下制备脂质体。4.根据权利要求1的方法制备的脂质体制剂。5.根据权利要求4的脂质体制剂，其中在低于或等于8℃下储存6个月之后杂质A的相对浓度低于0.5％，并且其中杂质A为在高效液相色谱中相对保留时间为约1.4的峰，所述高效液相色谱使用C18反相柱与乙酸/甲醇溶剂梯度洗脱条件。6.权利要求5的脂质体制剂，其中在低于或等于8℃下储存一年之后杂质A的相对浓度低于0.5％。7.权利要求4的脂质体制剂，其中在低于或等于8℃的温度下储存一年之后...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·A·里德，苏大水，
申请(专利权)人：效思因公司，
类型：发明
国别省市：美国,US