氧化胸腺素β4制造技术

本发明专利技术涉及氧化胸腺素β４在治疗中的应用，尤其是在治疗与炎症反应或感染性休克有关的病症中的应用。本发明专利技术也提供含有氧化胸腺素β４和适宜赋型剂的药物制剂。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及从类固醇处理过的单核细胞中分离出来的肽因子。尤其是，本专利技术涉及用于替代类固醇治疗的肽因子。类固醇被有效地用于抗炎症性疾病，例如哮喘、湿疹、过敏反应和风湿性疾病如类风湿性关节炎。然而，类固醇具有严重的副作用，因而仅在非类固醇抗炎药物不能奏效的情况下使用。单核细胞是重要前免疫效应细胞，在细胞免疫中发挥着至关重要的作用。除了其在炎症部位的抗原呈递和吞噬活性外，外周血单核细胞还参与多种与调节嗜中性白细胞反应有关的炎性酶原和多肽细胞因子的合成和释放。这些成分的产生可被糖皮质激素抑制，因此，认为这即是糖皮质激素抗炎反应的基础。关注类固醇诱导的因子对嗜中性白细胞迁移的影响，最初是为了阐明抗炎机制。皮质类固醇使许多前炎症介质下调(Lew等，1988；Almawi等1991；Standford等1992)，而有些作用则可以解释为使抗炎介质上调。嗜中性白细胞迁移刺激类固醇诱导的因子的活性，提示分散移动旨在防止细胞聚集在一个部位，而这对于终止炎症反应是很重要的。Stevenson(1973，1974，1978)证实人单核细胞在与抗炎皮质类固醇一起孵育时释放蛋白酶敏感因子，后者增加嗜中性白细胞从短毛细管中的细胞团迁移。后来的研究证实，用采集自接受类固醇治疗的患者的白细胞也观察到刺激嗜中性白细胞迁移的现象。最近，Chettibi等(1993，1994)使用能够研究细胞在蛋白包被的玻璃盖玻片上迁移过程的自动细胞跟踪分析法研究了类固醇诱导的对嗜中性白细胞迁移行为的刺激作用。这些研究是如下测定的1.类固醇-处理的单核细胞上清液(STMS)使得人嗜中性白细胞移动速度显著增加，而使人嗜中性白细胞对蛋白包被的玻片的粘附显著下降。相反，对照单核细胞上清液对嗜中性白细胞的移动速度影响较小，但是粘附性大大增加。2.在有或没有血清的条件下，37℃与10-6M地塞米松孵育24h后制得的上清液的活性相同。3.类固醇-处理的单核细胞上清液对人外周血嗜中性白细胞移动速度的作用不受兔抗脂蛋白1-6多克隆抗血清的影响。4.能够阻断IL-8对人嗜中性白细胞移动速度作用的兔抗白介素-8抗体，并不能拮抗类固醇-处理的单核细胞上清液的移动刺激作用。5.人单核白细胞胞外释放的因子提示它可能是糖皮质激素体内抗炎作用的介质。然而，尚未揭示STMS中该活性物质到底是什么。Huff T.等(1995)和Heintz D.等(1994)描述涉及β-胸腺素的研究，和生物分子络合物中β-胸腺素如何与G-肌动蛋白相互作用及抑制F-肌动蛋白在高盐条件下的聚合。氧化形式的胸腺素β4是作为抑制肌动蛋白聚合反应而被披露的，然而，其抑制作用只是在高于胸腺素β420倍的浓度时才会出现。没有文献推断氧化胸腺素β4的任何医疗作用。事实上，文章似乎教导人们不要去考虑氧化胸腺素β4的积极作用。US5578570(Goldstein等)公开了施用胸腺素β4治疗感染性休克的方法。然而，其中没有披露氧化胸腺素β4，也没有提示氧化胸腺素β4具有治疗感染性休克的作用。本专利技术的一个目的是提供类固醇治疗的替代疗法。本专利技术部分基于本专利技术者的观察与嗜中性白细胞移动有关的因子是氧化形式的胸腺素β4。本专利技术首先是提供氧化胸腺素β4或其生理活性变体在治疗中的应用。代表性的氧化胸腺素β4是胸腺素β4的一种，胸腺素β4中的一个蛋氨酸残基(距N-末端6个氨基酸)(Met6)被氧化，从而该残基转化为硫氧蛋氨酸。而且，蛋氨酸残基(Met6)可进一步氧化为砜蛋氨酸，后一形式也包括在本专利技术之内。还可涉及(evisaged)蛋氨酸残基的其它修饰，如硫与金属络合，从而产生类似于本文描述的氧化胸腺素β4的活性形式的胸腺素β4。氧化胸腺素β4可以通过天然胸腺素β4在氧化条件下反应而获得，例如，与过氧化氢反应形成氧化胸腺素β4。这样，首先得到天然胸腺素β4，然后将其氧化成氧化形式。已经观察到，天然胸腺素β4含有认为是自动氧化结果的少量如10％氧化胸腺素β4。然而，本专利技术者首先将此氧化形式胸腺素β4与生理活性联系起来。因此，总体上讲，本专利技术提供纯化的氧化胸腺素β4的应用。具有代表性地，本专利技术提供含有占残基未氧化胸腺素β4至少30％，优选60％，更优选80％，最优选90％的纯化氧化胸腺素β4的制剂的应用。然而，氧化胸腺素β4制剂优选地含有大体上全部是氧化胸腺素β4(即，基本上不含有未氧化胸腺素β4)。氧化或未氧化胸腺素β4可以从任何适宜来源获得，例如，由类固醇处理的单核细胞中得到。此外，胸腺素β4可以来自任何适宜种属，但是通常来源于哺乳动物，如牛、马、鼠和人。注意到牛、马、鼠、大鼠和人胸腺素β4在序列上完全相同。因此，例如，牛胸腺素β4可以作为胸腺素β4的适宜来源以便进一步氧化并施用于其它种属如人。氧化胸腺素β4的生理活性变体理解为那些显示出氧化胸腺素β4相同或相似生理特性的变体。含有氧化蛋氨酸的变体是优选的，但是变体可以是截短的、缺失的或变异的形式。应当理解，对于本文所涵盖的特定氧化胸腺素β4而言，可以存在变异体(天然或其它)。通过全序列氨基酸差异或通过所述序列中氨基酸缺失、取代、插入、反转或增加可以证实这些变异体。只要变异体具有生理活性(即，显示出本文所定义的氧化胸腺素β4的活性)，那么所有这些变异体均包括在本专利技术范围内。例如，为达到本专利技术目的，可以在下列组的氨基酸之间进行保守替换(I)丙氨酸、丝氨酸和苏氨酸；(II)谷氨酸和天冬氨酸；(III)精氨酸和赖氨酸；(IV)天冬酰胺和谷胺酰胺；(V)异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸；(VI)苯丙酰胺、酪氨酸和色氨酸；(VII)蛋氨酸和其它蛋氨酸同系物；(VIII)蛋氨酸和硫被VIB组元素(如，硒、碲、钋)取代的其它蛋氨酸同系物。(IX)氧化蛋氨酸和其它氧化蛋氨酸同系物(如，VIB组同系物，硫氧蛋氨酸)(X)蛋氨酸和包括含硫氨基酸(如，半胱氨酸)氧化同系物在内的其它含硫氨基酸。早期分子模型研究提示，蛋氨酸残基(met-6)在肽的三个螺旋之一的顶部。分子模型应当有助于确定那些可能具有观测到的STMS和氧化胸腺素β4活性并且将是用于制备具有抗炎活性药物的优选分子的短肽。的确，这将有助于开发具有氧化胸腺素β4相同生理功能的肽模拟物。另外，通过利用适当的化学修饰(如乙酰化)或使用D氨基酸来增加氧化胸腺素β4或其生理活性变体的半衰期是可能的。分离的氧化胸腺素β4可以具有封闭的N-末端。本专利技术也提供合成的氧化胸腺素β4，其中含有氧化胸腺素β4或其生理活性变体的肽序列。如上所述，合成的氧化胸腺素β4可以被修饰和/或被氨基酸取代，只要其仍保留生理活性即可。例如，可以引入硒基蛋氨酸来代替蛋氨酸并以同样的方式氧化。本专利技术进一步提供本文描述的氧化肽在制备治疗慢性或急性炎性病症的药物中的应用。该炎性病症包括炎性关节病，如类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、结晶性(crystal)关节炎、反应性关节炎、僵直性脊椎炎、感染性关节炎、青少年慢性关节炎；结缔组织病，如系统性红斑狼疮、斯耶格伦氏综合征、多肌痛风湿、颅动脉炎；脉管炎综合征，如韦格内氏肉芽肿病、结节性多动脉炎、Churg Strauss综合征；呼吸系统疾病，如哮喘、慢性阻塞性肺病、纤维性小泡炎、过敏性肺炎、肉样瘤病、变应性曲霉病、起因不明的肺嗜酸性粒细胞增本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种合成的分离的氧化胸腺素β４或具有氧化胸腺素β４活性的变体，或其药用盐。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特邓肯史蒂文森，安东尼约翰劳伦斯，约翰扬，达里尔约翰塞西尔帕皮宁，
申请(专利权)人：格拉斯哥大学董事会，皇家肿瘤研究院，罗伯特邓肯史蒂文森，
类型：发明
国别省市：GB[英国]