【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体涉及目的蛋白质的重组质粒的构建、原 核表达、纯化及鉴定，特别涉及胸腺素al (Tocl) 二串体蛋白及其制备方法。
技术介绍
1、胸腺素al的生物化学特性 1. l胸腺素家族胸腺素主要是由胸腺产生，最初由Goldstein自胎牛胸腺蛋白提取液中制 备得到，含40多种多肽成分，根据这些多肽在等电聚焦电泳分析图谱上的位 置，划分为a、 P、 Y三个区a区pl〈5， P区pl在5 7之间，y区pl〉7。 a 族胸腺素包括胸腺素a、前胸腺素a和旁胸腺素a。胸腺素al (Tal)是前胸腺素 a的N末端的28个氨基酸片段，其产生是由于溶酶体门冬酰内肽酶选择性裂解 位于前胸腺素原a序列中的Asn28-Gly29 。1. 2胸腺素ocl的化学结构胸腺素al是氨基端乙酰化的28个氨基酸组成的多肽激素，分子量为 3108，等电点PH为4.2。胸腺素al结构高度保守,氨基酸序列为 NH2-Ser-Asp-A 1a-A1a-Val-Asp-Thr-Ser-Ser~G1u_11e-Thr-Thr-Lys-Asp-Le u-Lys-Glu-Lys-Lys-...
【技术保护点】
一种重组胸腺素α１二串体蛋白，其特征在于，通过甘氨酸和丝氨酸串连两分子的胸腺素α１（Ｔα１），其连接方式为：Ｔα１－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｔα１，其氨基酸序列如ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１所示。
【技术特征摘要】
1、一种重组胸腺素α1二串体蛋白，其特征在于，通过甘氨酸和丝氨酸串连两分子的胸腺素α1(Tα1)，其连接方式为Tα1-Gly-Ser-Tα1，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2、 如权利要求l所述的重组胸腺素al二串体蛋白，其特征在于，其对应 的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2戶标。3、 如权利要求2戶/M的重组胸腺素al二串体蛋白，其特征在于，该重组 胸腺素od 二串体蛋白的重组核苷酸是用万a/zii I酶切位点连接2段胸腺素ocl 的氨基酸，在5'端加入Ue I酶切位点，3'端加入终止密码子TAG和Sal I 酶切位点，其连接方式为yWel酶切位点-Totl基因酶切位点-Tod 基因-TAG-Sal I酶切位点，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示。4、 如权利要求3所述的重组胸腺素ctl二串体蛋白，其特征在于，所述 的重组胸腺素al 二串体核苷酸构建于表达载体或重组质粒pET-22b(+)-Tal ②，所述的pET-22b(+)-Tal②是通过Tfefel酶切位点和Sal I酶切位点将质 粒pET-22b(+)与权利要求3所述的重组胸腺素al 二串体核苷酸双酶切连接。5、 权利要求1所述的重组胸腺素al 二串体蛋白的制备方法，其特征在于， 其制备方法按照以下步骤1)构建胸腺素al二串体基因表达载体或重组质粒pET-22b (+) -Totl a)胸腺素二串体基因(Totl②)的设计与合成依据大肠杆菌偏爱的密码子，将胸腺素al的氨基酸序列转化为cDNA序 列，用^/zHl酶切位点连接2段胸腺素al的氨基酸序列，再在5'端加入7Vflfel酶切位点，3，端加入终止密码子TAG和Sal I酶切位点，合成胸腺素 al二串体基因，其核苷酸序列如下戶际-catatgtctg atgcagcggt tgacaccagc tcggaaatca ccaccaaaga cctgaaagag 60 aagaaagagg tggtggaaga agcggagaac ggatccagcg atgcggcggt tgacaccagc 120 tcggaaatca ccaccaaaga cctgaaagag aagaaagagg tggtggaaga agcggagaac 180 ta卿gctt s 189 划线部分分别为厕e I 、 Sal I酶切位点，人工合成上述胸腺素od 二串体基因 基因；b)胸腺素al二串体表达载体pET-22b(+)-Tal②的构建 用I和I双酶切pET-22b (+)质粒回收大片段，Mfe I和I双 酶切胸腺素al 二串体Pmdl8_T- Tal②重组质粒回收小片断；回收的大、小 片断用T4连接酶连接构成胸腺...
【专利技术属性】
技术研发人员：张英起，韩苇，李维娜，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]
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