一种PD-1抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种PD‑1抗体及其制备方法和应用。所述PD‑1抗体包括PD‑1抗体的重链可变区重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和PD‑1抗体的轻链可变区轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种。所述PD‑1抗体是全人源的，具有高亲和力，在人混合淋巴细胞或T淋巴细胞中显著增加IFN‑γ和IL‑2的表达量，因此运用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病等药物的制备中。

【技术实现步骤摘要】
一种PD-1抗体及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种PD-1抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
程序性细胞死亡受体-1(PD-1)是一种有288个氨基酸的I型膜蛋白，是已知的主要免疫检查点(ImmuneCheckpoint)之一(Blanketal,2005,CancerImmunotherapy,54:307-314)。PD-1表达在已经激活的T淋巴细胞，它与配体PD-L1(程序性死亡受体-配体1，programmedcelldeath-Ligand1)和PD-L2(程序性死亡受体-配体2，programmedcelldeath-Ligand2)结合可以抑制T淋巴细胞的活性及相关的体内细胞免疫反应。PD-L2主要表达在巨噬细胞和树突状细胞，而PD-L1则广泛表达于B、T淋巴细胞及外周细胞如微血管上皮细胞，肺、肝、心等组织细胞中。大量研究表明，PD-1和PD-L1的相互作用不但是维持体内免疫系统平衡所必须，也是导致PD-L1表达阳性肿瘤细胞规避免疫监视的主要机制和原因。通过阻断癌细胞对PD-1/PD-L1信号通路的负调控，激活免疫系统，能够促进T细胞相关的肿瘤特异性细胞免疫反应，从而打开了一扇新的肿瘤治疗方法的大门——肿瘤免疫疗法。肿瘤免疫疗法，即利用人体自身的免疫系统抵御癌症，是一种突破性的肿瘤治疗方法，而免疫检查点是人体通过正负调节控制免疫系统平衡的关键。癌细胞可通过控制免疫检查点，抑制免疫系统的活力，从而逃避免疫系统对自身的发现和清除。免疫检查点抑制剂具有高效治疗多种类型肿瘤的潜力，针对晚期皮肤癌，肺癌，乳腺癌，肾癌等的肿瘤免疫疗法展现了让人欣喜的结果，而且对癌症已经转移的病人效果尤其明显。另外，这类药物在血液癌症领域也展现出了巨大潜力，包括晚期霍奇金淋巴瘤，包括多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症、非霍奇金淋巴瘤等。免疫检查点抑制剂毒副作用小，作用可逆、可控。免疫检查点抑制剂药物的出现，有望实质性改善患者总生存期。另外，免疫检查点抑制剂可以与靶向治疗或者传统放化疗联合应用，可能是治疗或者治愈多种癌症的希望。而目前还没有较佳的PD-1抗体恰当地发挥正负调节控制免疫系统平衡的作用而应用于肿瘤免疫疗法中，并达到排异性小、抗体效价高的效果，此外也没有满足上述条件的较佳的PD-1抗体能够应用于肿瘤免疫疗法、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等相关药物的制备，因此亟待解决上述的问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服目前缺少人源化的PD-1抗体的不足，提供一种亲和力高、特异性强的人源化的PD-1抗体及其制备方法和应用。所述的PD-1抗体，与PD-1蛋白具有高度亲和力，能够抑制PD-1与其配体PD-L1和PD-L2的结合，能在人混合淋巴细胞或T淋巴细胞显著增加IFN-γ和IL-2的表达量，并且缺乏与人B7.1、CD28、CTLA-4、ICOS等同类蛋白抗原的交叉反应，因此能够运用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病等药物的制备中。本专利技术人以人源PD-1蛋白作为免疫原，采用人源抗体转基因小鼠技术最早由Abgenix(XenoMouse)和Madarex(HuMabmouse)开发和用于全人源抗体的制备[Lonberg,etal.1994，Nature368(6474)：856-859，Lonberg,N.andHuszar,D.1995，Intern.Rev.Immunol.13:65-93,andHarding,F.andLonberg,N.,1995，Ann.N.Y.Acad.Sci.764:536-546]通过一系列的调整和改进，获得PD-1抗体的先导抗体。再通过对先导抗体的初步生产、纯化和检定，获得具备抗体亲和力高(亲和力KD＜1*10-9M)、有效封闭PD-1与配体PD-L1和PD-L2的结合、与人B7.1、CD28、CTLA-4、ICOS等同类蛋白抗原缺乏交叉反应等优异的生物性特性的PD-1抗体。然后通过分子生物学方法测序获知PD-1抗体的重链可变区和PD-1抗体的轻链可变区的氨基酸序列。本领域中，抗体或抗原的结合区均含有一条轻链可变区和一条重链可变区，每一个可变区均含有CDR1、CDR2和CDR3三个结构域。本专利技术提供一种分离的蛋白质，其包括PD-1抗体的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和/或，PD-1抗体的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10或SEQIDNo.18所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3、SEQIDNo.11或SEQIDNo.19所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.12或SEQIDNo.20所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.14或SEQIDNo.22所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.15或SEQIDNo.23所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.16或SEQIDNo.24所示；或者，所述重链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10或SEQIDNo.18所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.3、SEQIDNo.11或SEQIDNo.19所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.12或SEQIDNo.20所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.14或SEQIDNo.22所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.15或SEQIDNo.23所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.16或SEQIDNo.24所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示。较佳地，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.2所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.4所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.10所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.11所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.12所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.18所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.19所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.20所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.6所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.7所示，且所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的蛋白质，其特征在于，其包括PD‑1抗体的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和/或，PD‑1抗体的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2、SEQ ID No.10或SEQ ID No.18所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.3、SEQ ID No.11或SEQ ID No.19所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.4、SEQ ID No.12或SEQ ID No.20所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.6、SEQ ID No.14或SEQ ID No.22所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.7、SEQ ID No.15或SEQ ID No.23所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.8、SEQ ID No.16或SEQ ID No.24所示；或者，所述重链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.2、SEQ ID No.10或SEQ ID No.18所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.3、SEQ ID No.11或SEQ ID No.19所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.4、SEQ ID No.12或SEQ ID No.20所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.6、SEQ ID No.14或SEQ ID No.22所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.7、SEQ ID No.15或SEQ ID No.23所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQ ID No.8、SEQ ID No.16或SEQ ID No.24所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示。...

【技术特征摘要】
1.一种分离的蛋白质，其特征在于，其包括PD-1抗体的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和/或，PD-1抗体的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10或SEQIDNo.18所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3、SEQIDNo.11或SEQIDNo.19所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.12或SEQIDNo.20所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.14或SEQIDNo.22所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.15或SEQIDNo.23所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.16或SEQIDNo.24所示；或者，所述重链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10或SEQIDNo.18所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.3、SEQIDNo.11或SEQIDNo.19所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.12或SEQIDNo.20所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.14或SEQIDNo.22所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.15或SEQIDNo.23所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如与序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.16或SEQIDNo.24所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示。2.如权利要求1所述的蛋白质，其特征在于，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.2所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.4所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.10所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.11所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.12所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.18所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.19所示，且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.20所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.6所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.7所示，且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.8所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.14所示，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨欣秀，罗海山，刘虎，帅正蓉，王健，钟勤，段清，顾红专，刘礼乐，
申请(专利权)人：钜川生物医药，
类型：发明
国别省市：维尔京群岛,VG