新型半胱氨酸减少的疏水蛋白融合蛋白、其生产和用途制造技术

本发明专利技术涉及通用结构式（Ⅰ）的多肽及其生产和用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及新型疏水蛋白融合蛋白、其生产和用途。
技术介绍
疏7K蛋白是约ioo个氨基酸的小蛋白质，其为丝状真菌的特征蛋白质并且不存在于其它生物体中。最近，在天蓝色链霉菌(5^印to/^CM CO^'CO/or)中发现疏水蛋白类蛋白质，称为"Chaplins"，而且其同样具有高表面活性 的性质。Chaplins可以在7K-空气界面组装形成淀粉样原纤维(Classen 等人 2003 Genes Dev 1714-1726; Elliot等人2003， Genes Dev. 17， 1727-1740)。疏水蛋白以不溶于水的形式分布于多种真菌结构，例如气生菌丝、孢 子、子实体的表面。疏水蛋白的基因从子嚢菌(ascomycetes)、半知菌 (deuteromycetes)和担子菌(basidiomycetes)中分离而来。某些真菌含有多于 一个的疏水蛋白基因，例如普通裂褶菌(5Wi/zop/^〃MWCo附/w朋e)、灰盖鬼伞(C0/7/7VlW5" "Viere"51)、构巢曲霉(ylspe/^7/M51 fMV/M/flW51)。明显地，多种疏7片蛋白涉及真菌发育的不同阶段。推测所述疏水蛋白负责不同的功能(van Wetter等人，2000， Mol. Microbiol.， 36, 201-210; Kershaw等人1998， Fungal Genet. Biol, 1998， 23， 18-33)。除了为产生气生菌丝减少水的表面张力以外，疏水蛋白的生物学功能 还有使孢子疏水化(W6sten等人1999， Curr. Biol.， 19, 1985-88; Bell等人 1992， Genes Dev., 6， 2382-2394)。此外，疏水蛋白^皮用于内村地衣子实体中 的气体通道，并且作为真菌病原体辨别植物表面系统的成分(Lugones等人 1999， Mycol. Res.， 103， 635-640; Hamer和Talbot, 1998， Curr. OpinionMicrobiol.,巻1， 693-697)。互补实验证明单个类型中的疏水蛋白在某种程度上可以在功能上相互 取代。先前公开的疏水蛋白只能以中等产量制备，并且用常用的蛋白质化学 纯化和分离方法纯化，目前在遗传方法的辅助下供应更大量的疏水蛋白的 尝试尚未成功。专利技术主题本专利技术的主题是提供新的疏水蛋白及其生产方法，所述方法使能够经 济地生产疏水蛋白并在多种
使用。专利技术详述本专利技术涉及通用结构式(I)的多肽其中X可以是任何20种天然存在的氨基酸(苯丙氨酸Phe、亮氨酸Leu、 丝氨酸Ser、酪氨酸Tyr、半胱氨酸Cys、色氨酸Trp、脯氨酸Pro、组氨 酸His、谷氨酰胺Gln、精氨酸Arg、异亮氨酸Ile、甲疏氨酸Met、苏氨 酸Thr、天冬酰胺Asn、赖氨酸Lys、缬氨酸Val、丙氨酸Ala、天冬氨酸 Asp、谷氨酸Glu、甘氨酸Gly)，且在X的指数表示氨基酸数，指数n和 m是0-500之间，优选在15-300之间的数，p是1-250之间，优选在1-100 之间的数，并且C是半胱氨酸、丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、曱硫氨酸或苏 氨酸，其中至少4个由C指定的残基为半胱氨酸，附带条件是缩写为Xn 或Xm或Xp的肽序列的至少一个是长度至少为20个氨基酸的非天然连接 于疏水蛋白的肽序列，该多肽在包被玻璃表面之后使接触角改变至少20。。 C1到<:8指定的#^酸优选为半胱氨酸，但是它们也可能被其它相似 的大氨基酸(优选丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸或甘氨酸)所代替。 然而，C1到<:8位置的至少4个、优选至少5个、尤其优选至少6个且尤 其至少7个应该包含半胱氨酸。本专利技术蛋白质中的半胱氨酸可以是还原形式或彼此形成二疏键。尤其优选形成分子内C-C桥，特别是具有至少1个、 优选2个、尤其优选3个和特别尤其优选4个分子内二石克键的那些。当如 上所述用相似的大氨基酸代替半胱氨酸时，那些彼此之间形成分子内二硫 键的C位置的配对最好也被代替。如果在以X指定的位置也使用半胱氨酸、丝氨酸、丙氨酸、甘氨酸、 甲硫氨酸或苏氨酸，可以相应改变通式中单个半胱氨酸位点的数量。尤其有利的多肽是那些具有通式(II)的多肽Xn-C、X3-25-G2國Xo-2画C3誦X5-50-C4誦X2-35画G5-X2-l5-C6曙Xo-2画C7-X3-35-C!8-Xm (II)其中X可以是任何20种天然存在的氨基酸(苯丙氨酸Phe、亮氨酸Leu、 丝氨酸Ser、酪氨酸Tyr、半胱氨酸Cys、色氨酸Trp、脯氨酸Pro、组氨 酸His、谷氨酰胺Gln、精氨酸Arg、异亮氨酸Ile、甲硫氨酸Met、苏氨 酸Thr、天冬酰胺Asn、赖氨酸Lys、缬氨酸Val、丙氨酸Ala、天冬氨酸 Asp、谷氨酸Glu、甘氨酸Gly)，在X的指数表示氨基酸数，指数n和m 是2-300之间的数，并且C是半胱氨酸、丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、甲硫 氨酸或苏氨酸，其中至少4个由C指定的残基为半胱氨酸，附带条件是缩 写为Xn或Xm的肽序列的至少一个是长度至少为35个氨基酸的非天然连 接疏水蛋白的肽序列，该多肽在包被玻璃表面之后使接触角改变至少20。。 特别尤其有利的是那些具有通式(III)的多肽Xn隱C、X5-9-C2國C3画Xii-39画C4-X2-23-C5画X5-9-C6-C7-X6—l8曙C8-Xm (HI)其中X可以是任何20种天然存在的氨基酸(苯丙氨酸Phe、亮氨酸Leu、 丝氨酸Ser、酪氨酸Tyr、半胱氨酸Cys、色氨酸Trp、脯氨酸Pro、组氨 酸His、谷氨酰胺Gln、精氨酸Arg、异亮氨酸Ile、甲硫氨酸Met、苏氨 酸Thr、天冬酰胺Asn、赖氨酸Lys、缬氨酸Val、丙氨酸Ala、天冬氨酸 Asp、谷氨酸Glu、甘氨酸Gly)，在X的指数表示氨基酸数，指数n和m 是0-200之间的数，并且C是半胱氨酸、丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、甲硫 氨酸或苏氨酸，其中至少6个由C指定的残基为半胱氨酸，附带条件是缩 写为Xn或Xm的肽序列的至少一个是长度至少为40个氨基酸的非天然连 接疏水蛋白的肽序列，该多肽在包被玻璃表面之后使接触角改变至少20°。所述本专利技术的优选实施方案是具有通用结构式(I)、 (II)或(III)的多肽，该结构式包含至少一种I类疏水蛋白，优选至少一个dewA、 rodA、 hypA、 hypB、 sc3、 basfl、 basf2疏水蛋白，或其部分或4汙生物。下文的序列表对 所述疏水蛋白进行了结构表征。也可能将多个(优选2个或3个)相同或不 同结构的疏水蛋白彼此连接，并且连接于并非天然连接疏水蛋白的相应适 宜多肽序列上。本专利技术尤其优选的实施方案是具有SEQIDNO:20、 22、 24所示的多 肽序列的新蛋白质，及其编码核酸序列，具体是SEQ ID NO:19、 21、 23 中定义的序列。尤其优选的实施方案还包括由SEQ ID NO: 20、 22或24 所示多肽序列起始，通过取代、插入或缺失至少1个至多10个、优选5 个、更优选所有氨基酸的5%而产生的蛋白质，所述蛋白质仍然具有起始 蛋白质至少50%的生物特性。此处蛋白质的生物学特性指上述接触角的改本文档来自技高网...

【技术保护点】
通用结构式（Ⅰ）的多肽　　　　Ｘ↓［ｎ］－Ｃ↑［１］－Ｘ↓［１－５０］－Ｃ↑［２］－Ｘ↓［０－５］－Ｃ↑［３］－Ｘ↓［ｐ］－Ｃ↑［４］－Ｘ↓［１－１００］－Ｃ↑［５］－Ｘ↓［１－５０］－Ｃ↑［６］－Ｘ↓［０－５］－Ｃ↑［７］－Ｘ↓［１－５０］－Ｃ↑［８］－Ｘ↓［ｍ］　　（Ⅰ）　　　　其中Ｘ可以是任何２０种天然存在的氨基酸，　　　　ｎ和ｍ是０－５００之间的数，ｐ是１－２５０之间的数，Ｃ是半胱氨酸、丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸或苏氨酸，有至少４个由Ｃ指定的残基为半胱氨酸，　　　　附带条件是至少一个缩写为Ｘ↓［ｎ］或Ｘ↓［ｍ］或Ｘ↓［ｐ］的肽序列是长度至少为２０个氨基酸的非天然连接至疏水蛋白的肽序列，该多肽在包被玻璃表面之后使接触角改变至少２０°。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：T萨布科夫斯基，M考罗什，HG勒迈尔，H巴尔格，C博尔施韦勒，
申请(专利权)人：巴斯福股份公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]